Щф в биохимическом: Щелочная фосфатаза — serovodorod-okt.ru

Содержание

Щелочная фосфатаза

Щелочная фосфатаза – группа ферментов, содержащихся практически во всех тканях организма, с преимущественной локализацией в печени, костях и плаценте.

Метод исследования

Кинетический колориметрический метод.

Единицы измерения

Ед/л (единица на литр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную, капиллярную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не принимать пищу в течение 12 часов перед исследованием.
Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования.
Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Щелочная фосфатаза – фермент, который находится в клетках печени и желчевыводящих путей и является катализатором определенных биохимических реакций в этих клетках (в кровеносном русле он не работает). При разрушении этих клеток их содержимое попадает в кровь.

В норме часть клеток обновляется, поэтому в крови обнаруживается определенная активность щелочной фосфатазы. Если гибнет много клеток, она может повышаться очень значительно.

Активность щелочной фосфатазы сильно увеличивается при препятствиях оттоку желчи, например камнях в желчных протоках.

В костях щелочная фосфатаза образуется в специальных клетках – остеобластах, которые играют важную роль в формировании и обновлении костной ткани. Чем выше активность остеобластов, тем выше активность щелочной фосфатазы в крови, поэтому у детей и лиц, перенесших переломы костей, активность щелочной фосфатазы на высоком уровне.

Щелочная фосфатаза также содержится в клетках кишечника и плаценты.

Для чего используется исследование?

Обычно данный тест назначают для выявления заболеваний печени или костей. Кроме того, щелочная фосфатаза повышается при болезнях, затрагивающих желчные ходы, поэтому такой анализ помогает подтвердить закупорку желчевыводящих путей при камнях в желчных протоках или опухолях поджелудочной железы.

Тест на щелочную фосфатазу, а также гамма-глутамилтрансферазу проводится для того, чтобы диагностировать заболевания, поражающие желчевыводящие пути: первичный билиарный цирроз и первичный склерозирующий холангит.

Любые состояния, которые связаны с ростом костей или повышенной активностью костных клеток, повышают активность щелочной фосфатазы. Повторное назначение щелочной фосфатазы используется для контроля за активностью заболеваний, при которых она повышена, или для оценки эффективности лечения.

Что означают результаты?

Возраст, пол	Референсные значения
17-19 лет, женский	45 — 87 Ед/л
17-19 лет, мужской	55 — 149 Ед/л
> 19 лет, женский	35 — 105 Ед/л
> 19 лет, мужской	40 — 130 Ед/л

Если показатели, полученные в результате других анализов, таких как тест на билирубин, АЛТ, АСТ, тоже повышены, то увеличение активности щелочной фосфатазы в крови, возможно, связано с повреждением печени.

Если изменены уровни кальция и фосфора, наиболее вероятная причина повышения щелочной фосфатазы – патология костной ткани.

Повышение активности щелочной фосфатазы почти всегда означает поражение или вовлечение в патологический процесс печени, желчевыводящих путей или костей.

Причины повышения активности щелочной фосфатазы

1. Поражение печени и желчевыводящих путей.

2. Поражение костей.

3. Другие причины.

Гиперпаратиреоз.
Инфаркт миокарда.
Язвенный колит, перфорация кишечника.

Причины понижения активности щелочной фосфатазы

Тяжелая анемия.
Массивные переливания крови.
Гипотиреоз.
Недостаток магния и цинка.
Гипофосфатазия.
Выраженное снижение щелочной фосфатазы у беременных – признак недостаточности плаценты.

Что может влиять на результат?

При беременности в норме активность щелочной фосфатазы повышена, так как она содержится в плаценте.
Временное повышение активности ЩФ отмечается после переломов.
У детей и юношей активность ЩФ выше, чем у взрослых, так у них происходит рост костей.
Аспирин, парацетамол, аллопуринол, антибиотики и ряд других лекарств способны повышать активность щелочной фосфатазы.
Прием оральных контрацептивов иногда приводит к снижению активности щелочной фосфатазы.

Важные замечания

Активность щелочной фосфатазы иногда повышается и у здоровых лиц, это не обязательно свидетельствует о какой-либо патологии. Чтобы верно интерпретировать изменение активности ЩФ, нужна комплексная оценка результатов остальных анализов, а также других медицинских данных.

Вопрос: Яна | 10 Апреля, 2021

Здравствуйте, после сдачи пцр теста на ковид, через какое время будет результат? Где и как его можно получить? И есть ли возможность получения результата на английском языке?

Здравствуйте. Результат обследования готов в течение 24 часов (чаще, уже через 12 часов Вам приходит СМС с кодом посещения и ссылкой, пройдя по которой можно увидеть анализа). Печатную версию результата можно получить в нашем филиале, расположенном по адресу 15 микр дом 8 а. Анализ на английском языке выдаем (не забудьте предупредить об этом администратора)

Вопрос: Дарья | 07 Апреля, 2021

Добрый день)
Подскажите,пожалуйста,если рана находиться в ротовой полости,нужно сдавать пцр тест крови или соскоб в ротовой полости?

Здравствуйте. Из Вашего вопроса непонятно ПЦР на какой вид возбудителя Вам требуется провести. Этот вопрос лучше обсудить с врачом, который рекомендует провести обследование

Анализ крови на щелочную фосфатазу сдать в Москве

Щелочная фосфатаза — фермент, находящийся в основном в печени и желчевыводящих путях.Наиболее высока активность щелочной фосфатазы в костной ткани, кишечнике, клетках печени, почечных канальцев и в плаценте.

Щелочная фосфатаза имеет важнейшее значение в образовании костной ткани и сохранение постоянной минеральной плотности костей.
Повышенная активность щелочной фосфатазы встречается при заболеваниях, связанных с повреждением печени, костей, почек и др.
Пониженная активность щелочной фосфатазы встречается при деминерализации костной ткани, как правило, при гипофосфатазии (наследственное заболевание).

Щелочная фосфатаза — один из базовых биохимических показателей, входит в стандарт диагностического обследования при плановых профилактических медосмотрах и при подготовке пациента к госпитализации.

Alkaline Phosphatase – это группа ферментов, которые содержатся в различных тканях организма. Основным местом их локализации служат кости, печень и плацента. Эти ферменты принимают участие в отщеплении от ряда органических соединений фосфорной кислоты. Повышение их активности характерно для многих заболеваний, которые сопровождаются повреждением костей и внутренних органов (например, печени, почек).

Общие сведения

Щелочная фосфатаза служит катализатором ряда биохимических процессов в клетках желчевыводящих путей и печени. Когда эти клетки разрушаются, образовавшиеся при этом вещества попадают в кровь. Обновление клеток является физиологическим процессом, поэтому в норме в крови обнаруживается небольшая активность ALKP. Значительное повышение ее активности свидетельствует о гибели большого количества клеток.

В организме желчь выполняет ряд важных функций. Она используется организмом при всасывании поступающих с пищей жиров и в ряде других процессов. Синтез желчи происходит в клетках печени. Ее образование – это постоянный процесс, но в кишечник желчь поступает только во время приема пищи и после него. В остальное время она накапливается в желчном пузыре. При затрудненном оттоке желчи (например, в случае камней в желчных протоках) активность ЩФ существенно увеличивается.

В костях образование фосфатазы происходит в остеобластах. Активность ЩФ напрямую зависит от активности остеобластов. У пациентов, перенесших переломы, и у детей этот показатель существенно увеличен.

В большинстве случаев результаты анализа используются для выявления заболеваний костей или печени. Также он может назначаться для подтверждения опухолей поджелудочной железы или закупорки желчевыводящих путей. Для грамотной интерпретации результатов исследования и назначения лечения необходимо обратиться к врачу.

Фосфатаза щёлочная (ЩФ, Alkaline phosphatase, ALP)

Что такое щёлочная фосфатаза?

Щелочная фосфатаза (ЩФ) — это фермент, который в наибольшем количестве можно обнаружить в клетках печени, желчного пузыря и желчных протоках. В кровь ЩФ попадает главным образом из гепатоцитов – клеток печени, а также из клеток костной ткани – остеобластов.

Для чего определяют уровень щелочной фосфатазы в крови?

Определение уровня щелочной фосфатазы необходимо при подозрении на патологии печени, желчного пузыря, костей. Однако для точной диагностики заболеваний печени целесообразно измерять уровень ЩФ вкупе с другими показателями, такими как гамма-глутамилтранспептидаза (ГГТ), билирубин, аспартатаминотрансфераза (АСТ), аланинаминотрансфераза (АЛТ). Их повышение практически полностью исключает патологию костной ткани, но может свидетельствовать о наличии камней в желчных путях и/или желчном пузыре, воспалении желчного пузыря – холецистите, опухолевых процессах, циррозе печени, в меньшей степени – о гепатитах (воспалении ткани печени).

Иногда несколько исследований ЩФ, разнесенных во времени, используют для оценки динамики состояния пациента при лечении болезни Педжета или дефицита витамина Д.

Жалобы пациентов, при которых необходимо измерять уровень щелочной фосфатазы: регулярные приступы тошноты и рвоты, боли в животе, желтый цвет кожи и слизистых, темный цвет мочи, необъяснимая усталость.

При каких заболеваниях меняются значения щёлочной фосфатазы в крови?

Повышение уровня ЩФ в крови часто вызвано заболеваниями печени или желчного пузыря, нарушением пассажа (оттока) желчи по гепато-билиарному тракту (желчные протоки начинаются в печени и открываются в двенадцатиперстную кишку – часть тонкого кишечника). Увеличение показателей ЩФ наблюдается при срастающихся переломах костей.

Повышение ЩФ при нормальных значениях ГГТ и билирубина, вероятнее всего, связано с патологией скелета. В этой ситуации в качестве дополнительного обследования врач назначает исследование уровня кальция и фосфора, а также рентгенограмму, поскольку причиной увеличения значений ЩФ могут выступать опухолевые поражения костей (в том числе при изначальной локализации новообразования в другом органе и распространении заболевания по кровотоку) или болезнь Педжета, при которой по неустановленным причинам костная ткань локально уплотняется или разрежается (при этом даже небольшое механическое воздействие может привести к перелому).

В норме количество ЩФ в крови выше у детей и подростков, так как у них идет активных рост костей. У беременных может отмечаться увеличение ЩФ из-за развития костной ткани ребенка. Результаты теста должны интерпретироваться врачом с учетом этих состояний организма исследуемого.

Почему результат анализа может быть некорректным?

Основная причина некорректных результатов анализа – несоблюдение правил подготовки к сдаче крови на щелочную фосфатазу, эмоциональное перенапряжение.

Правила подготовки к анализу крови на Фосфатазу щёлочную

Взятие крови предпочтительно проводить утром натощак, после 8-14 часов ночного периода голодания (воду пить можно), допустимо днем через 4 часа после легкого приема пищи. Накануне исследования необходимо исключить повышенные психоэмоциональные и физические нагрузки (спортивные тренировки), приём алкоголя.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Трактовка результатов определения уровня Фосфатазы щёлочной в сыворотке крови

Единицы измерения: Ед/л.

Референсные значения

Пол	Возраст	Референсные значения (Ед/л)
Оба	<15 дней	90-273
	15 дней — 1 года	134-518
	1год — 10 лет	156-369
	10 лет — 13 лет	141-460
Женщины	13 лет-15 лет	62-280
Женщины	>15 лет	40-150
Мужчины	13 лет – 15 лет	127-517
	15 лет-17 лет	89-365
	17 лет -19 лет	59-164
	>19 лет	40-150

Повышение значений

Патология костной ткани (с повышением активности остеобластов или распадом костной ткани): болезнь Педжета (деформирующий остеит), остеомаляция, болезнь Гоше с резорбцией костей.
Первичный или вторичный гиперпаратиреоз.
Рахит.
Заживление переломов.
Остеосаркомы и метастазы злокачественных опухолей в кости.
Заболевания печени (цирроз, некроз печёночной ткани, первичная гепатокарцинома, метастатический рак печени, инфекционные, токсические, лекарственные гепатиты, саркоидоз, туберкулез, паразитарные поражения).
Внутри- и внепечёночный холестаз (холангиты, камни желчных протоков и желчного пузыря, опухоли желчевыводящих путей).
Нарушения питания (недостаток кальция и фосфатов в пище).
Цитомегалия у детей.
Инфекционный мононуклеоз.
Инфаркт лёгкого, почки.
Физиологическое (у недоношенных, детей в период быстрого роста, у женщин в последнем триместре беременности и после менопаузы).
Приём гепатотоксичных препаратов: метотрексат, хлорпромазин, антибиотики широкого спектра действия, сульфаниламиды. больших доз витамина С. магнезии.

Понижение значений

Гипотиреоз.
Цинга.
Тяжелая анемия.
Квашиоркор.
Ахондроплазия.
Кретинизм.
Наследственная гипофосфатазия.
Дефицит витамина В12.
Пернициозная анемия.
Дефицит цинка и магния в пище.
Прием азатиоприна, клофибрата, даназола, эстрогенов, оральных контрацептивов.
Химические интерференции в пробе: присутствие мышьяка, бериллия, цитрата, цианида, ЭДТА (например, при ошибочном выборе типа контейнера при взятии крови), флюорита, марганца, оксалата, фосфата, сульфгидрильных компонентов, теофиллина, солей цинка и магния (избыток).

Информация о порядке проведения биохимического анализа фракций (изоферментов) щелочной фосфатазы в сыворотке крови

В многопрофильных биохимических анализах сыворотки крови при различных заболеваниях у детей нередко встречаются весьма заметные изменения общей активности щелочной фосфатазы (ЩФ). Этот фермент отвечает за отщепление от фосфорорганических соединений фосфатных групп с последующим гидролизом моноэфиров ортофосфата и транспортом фосфата к соответствующим органам и тканям. Щелочная фосфатаза, как известно, присутствует во многих тканевых и органных структурах организма. Наибольшие её «запасы» отмечаются в остеобластах, гепатоцитах, слизистой тонкого кишечника, почечной ткани, в плаценте, молочных железах (при лактации).

Существенное увеличение общей активности ЩФ в сыворотке крови наблюдается при патологии в гепато-билиарной системе (прежде всего, при механической желтухе, холестазе, несколько реже – при гепатитах и циррозе), при поражении костной ткани (болезнь Педжета, остеопороз), нарушениях фосфорно-кальциевого обмена, в меньшей степени – при рахите, гиперпаратиреозе. Общая активность ЩФ может быть повышена, хотя и не часто, при патологии тонкого кишечника. При онкологических процессах в указанных органах и тканях активность ЩФ в сыворотке крови, как правило, нарастает. Снижение общей активности ЩФ может иметь место при анемиях, дефиците витамина С, гипотиреозе, дефиците магния и цинка в организме; резкое её снижение отмечается при гипофосфатазии.

Референтные значения показателей общей активности ЩФ сыворотки крови в норме варьируют в зависимости от возраста и составляют: 50-350 Ед/л – для детей до 1-го года и 60-400 Ед/л – для детей от 1 года до 14 лет.

Если показатели общей активности ЩФ сыворотки крови превышают верхние границы нормы (особенно, если это повышение весьма значительно) и возникают затруднения с трактовкой обнаруженных изменений активности фермента (а возможно, и трудности с диагностикой заболевания), тогда есть все основания для проведения исследования по разделению фракций (изоферментов) щелочной фосфатазы сыворотки крови.

Лаборатория нейробиологии и фундаментальных основ развития мозга располагает возможностями для проведения такого исследования. Используется современный метод электрофоретического разделения фракций ЩФ на агарозном геле в системе Hydrasys 2 фирмы Sebia (Франция). При расшифровке электрофореграмм идентифицируются следующие фракции: костная фракция (она всегда самая выраженная именно у детей ввиду их интенсивного роста и формирования костного скелета), две печеночных фракции, кишечные фракции (число их может достигать 3-х, но небольших фракций), а также могут проявиться (в зависимости от патологии) почечная и плацентарная фракции.

Данный биохимический анализ не относится к числу срочных анализов. Это важный тест, но он является дополнительным к целому ряду основных биохимических параметров. С учётом технологических особенностей метода и экономической целесообразности (рациональное использование дорогостоящих и дефицитных реактивов) анализ проводится нами в режиме накопления поступающих в лабораторию для этого сывороток крови (оптимальный вариант их числа – до 5-7 проб для проведения одновременного их исследования). Сыворотки хранятся в морозильнике при температуре не выше, чем минус 20оС. Сроки выполнения анализа и соответственно выдачи его результатов зависят от сроков поступления в лабораторию необходимого числа сывороток крови для проведения такого исследования. При наличии реактивов сроки выполнения исследования 2-3 недели.

Биохимические маркеры метастазирования в кости | Любимова

1. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2012 г. Под ред. М.И. Давыдова, Е.М. Аксель. М.: Издательская группа РОНЦ, 2014. 226 с. [Statistics of malignant tumours in Russia and CIS countries in 2012. under the editorship of M.I. Davydova, E.M. Aksel. Moscow: Publishing Group of Russian Cancer Research Center, 2014. Pp. 226. (In Russ.)].

2. Любимова Н.В., Кушлинский Н.Е. Маркеры костного ремоделирования: общие представления и клиническое значение при поражении скелета у онкологических больных. Вопросы онкологии 2001;47(1):18–23. [Lyubimova N.V., Kushlinsky N.E. Bone turnover markers: fundamental understanding and clinical relevance at skeletal lesion in oncologic patients. Voprosy onkologii = Problems in Oncology 2001;47(1):18–23. (In Russ.)].

3. Кушлинский Н.Е., Тимофеев Ю.С. Роль системы RANK/RANKL/OPG в патогенезе первичных и метастатических опухолей костей. Патогенез 2013;11(4):9–15. [Kushlinsky N.E., Timofeev Y.S. Role of RANK/RANKL/OPG system in pathogenesis of primary and metastatic bone tumours. Patogenez = Pathogenesis 2013;11(4):9–15. (In Russ.)].

4. Кушлинский Н.Е., Тимофеев Ю.С., Герштейн Е.С., Соловьев Ю.Н. Клинические перспективы исследования компонентов системы RANK/RANKL/OPG при первичных и метастатических опухолях костей. Вопросы онкологии 2014;60(4):413–21. [Kushlinsky N.E., Timofeev Y.S., Gershteyn E.S., Solovyev Y.N. Clinical prospects of system RANK/RANKL/OPG components research at primary and metastatic bone tumours. Voprosy onkologii = Problems in Oncology 2014;60(4):413–21. (In Russ.)].

5. Lee J.A., Jung J.S., Kim D.H. et al. RANKL expression is related to treatment outcome of patients with localized, highgrade osteosarcoma. Pediatr Blood Cancer 2011;56(5):738–43.

6. Roodman D. Mechanisms of bone metastasis. N Engl J Med 2004;350(16):1655–64.

7. Chu G.C., Chung L.W. RANK-mediated signaling network and cancer metastasis. Cancer Metastasis Rev 2014;33(2–3): 497–509.

8. Schramek D., Leibbrandt A., Sigl V. et al. Osteoclast differentiation factor RANKL controls development of progestin-driven mammary cancer. Nature 2010;468(7320):98–102.

9. Martin T. J. Historically significant events in the discovery of RANK/RANKL/OPG. World J Orthop 2013;4(4):186–97.

10. Morony S., Capparelli C., Sarosi I. et al. Osteoprotegerin inhibits osteolysis and decreases skeletal tumor burden in syngeneic and nude mouse models of experimental bone metastasis. Cancer Res 2001;61(11):4432–6.

11. Choi H.K., Kang H.R., Jung E. et al. Early estrogen-induced gene 1, a novel RANK signaling component, is essential for osteoclastogenesis. Cell Res 2013;23(4): 524–36.

12. Rucci N., Millimaggi D., Mari M. et al. Receptor activator of NF-kappaB ligand enhances breast cancerinduced osteolytic lesions through upregulation of extracellular matrix metalloproteinase inducer/CD147. Cancer Res 2010;70(15):6150–60.

13. Coleman R.E. , Major P., Lipton A. et al. Predictive value of bone resorption and formation markers in cancer patients with bone metastases receiving the bisphosphonate zoledronic acid. J Clin Oncol 2005;23(22):4925–35.

14. Body J. J., Greipp P., Coleman R.E. et al. A phase I study of AMGN-0007, a recombinant osteoprotegerin construct, in patients with multiple myeloma or breast carcinoma related bone metastases. Cancer 2003;97(3 Suppl):887–92.

15. ClinicalTrials.gov. Bethesda (MD): NIH. Single ascending-dose study to characterize the safety, pharmacokinetics, and pharmacodynamics of CEP-37251 in healthy postmenopausal women. 2010. Available from: http://clinicaltrials.gov/show/NCT01159873.

16. Riggs B.L., Khosla S., Atkinson E. J. et al. Evidence that type I osteoporosis results from enhanced responsiveness of bone to estrogen deficiency. Osteoporos Int 2003;14(9):728–33.

17. Fizazi K., Lipton A., Mariette X. et al. Randomized phase II trial of denosumab in patients with bone metastases from prostate cancer, breast cancer, or other neoplasms after intravenous bisphosphonates. J Clin Oncol 2009;27(10):1564–71.

18. Кушлинский Н.Е., Тимофеев Ю.С., Соловьев Ю.Н. и др. Компоненты системы RANK/RANKL/OPG, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-16, ММП-2 и кальцитонин в сыворотке крови больных с новообразованиями костей. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2014;157(4):522–6. [Kushlinsky N.E., Timofeev Y.S., Solovyev Y.N. et al. Components of system RANK/RANKL/OPG, IL-6, IL-8, IL-16, MMP-2 and calcitonin in blood serum of bone tumors patients. Bulleten, eksperimental, noy biologii i meditsiny = Bulletin of Experimental Biology and Medicine 2014;157(4):522–6. (In Russ.)].

19. Wozney J.M. Overview of bone morphogenetic proteins. Spine (Phila Pa 1976). 2002;27(16 Suppl 1):2–8.

20. Hofbauer L.C., Rachner T., Singh S.K. Fatal attraction: why breast cancer cells home to bone. Breast Cancer Res 2008;10(1):101.

21. Roodman D. Biology of osteoclast activation in cancer. J Clin Oncol 2001;19(15):3562–71.

22. Sezer O., Heider U., Zavrski I. et al. RANK ligand and osteoprotegerin in myeloma bone disease. Blood 2003;101(6):2094–8.

23. Pearse R.N., Sordillo E.M., Yaccoby S. et al. Multiple myeloma disrupts the TRANCE/osteoprotegerin cytokine axis to stimulate bone destruction and promote tumor progression. Proc Natl Acad Sci USA 2001;98(20):11581–6.

24. Choi S. J., Cruz J.C., Craig F. et al. Macrophage inflammatory protein 1–alpha is a potential osteoclast stimulatory factor in multiple myeloma. Blood 2000;96(2):671–5.

25. Min H., Morony S., Sarosi I. et al. Osteoprotegerin reverses osteoporosis by inhibiting endosteal osteoclasts and prevents vascular calcification by blocking a process resembling osteoclastogenesis. J Exp Med 2000;192(4):463–74.

26. Choi S. J., Oba Y., Gazitt Y. et al. Antisense inhibition of macrophage inflammatory protein 1–alpha blocks bone destruction in a model of myeloma bone disease. J Clin Invest 2001;108(12):1833–41.

27. Tian E., Zhan F., Walker R. et al. The role of the Wnt-signaling antagonist DKK1 in the development of osteolytic lesions in multiple myeloma. N Engl J Med 2003;349(26): 2483–94.

28. Fujita К., Janz S. Attenuation of WNT signaling by DKK-1 and -2 regulates BMP2-induced osteoblast differentiation and expression of OPG, RANKL and M-CSF. Mol Cancer 2007;6:71.

29. Hameed A., Brady J. J., Dowling P. et al. Bone disease in multiple myeloma: pathophysiology and management. Cancer Growth Metastasis 2014;7:33–42.

30. Li X., Liu Y., Wu B. et al. Potential role of the OPG/RANK/RANKL axis in prostate cancer invasion and bone metastasis. Oncol Rep 2014;32(6):2605–11.

31. Yamabuki T., Takano A., Hayama S. et al. Dikkopf-1 as a novel serologic and prognostic biomarker for lung and esophageal carcinomas. Cancer Res 2007;67(6):2517–25.

32. Mundy G.R., Boyce B.F., Yoneda T. Mechanisms of osteolytic bone destruction. In: Metastatic Bone Disease: Fundamental and Clinical Aspects. Berlin, Heidelberg: Springer Verlag, 1994. Pp. 86–92.

33. Ratcliffe W.A., Bowden S. J. Parathyroid hormone-related protein: Assay and their clinical applications. In.: Calcium Regulating Hormones and Markers of Bone Metabolism: Measurement and Interpretation. Heidelberg: Clin.Lab. Publications, 1997. Pp. 71–8. Моисеенко В.М., Семиглазов В.Ф., Тюляндин С.А. Современное лекарственное лечение местнораспространенного и метастатического рака молочной железы. СПб.: Грифон, 1997. 248 c. [Moiseenko V.M., Semiglazov V.F., Tyulyandin S.A. Modern medical therapy of locally advanced and metastatic breast cancer. St. Petersburg: Grifon, 1997. 248 p. (In Russ.)].

34. Moss D.W. Diagnostic aspects of alkaline phosphatase and its isoenzymes. Clin Biochem 1987;20(4):225–30.

35. Kress B.C. Bone alkaline phosphatase in normal and disease processes. In: Calcium regulating hormones and markers of bone metabolism: measurement and interpretation. Heidelberg: Clin.Lab. Publications, 1997. Pp. 171–82.

36. Van Straalen J.P., Sanders E., Prummel M.F., Sanders G.T. Bone-alkaline phosphatase as indicator of bone formation. Clin Chim Acta 1991;201(1–2):27–33.

37. Price C.P., Thompson P.W. The role of biochemical tests in the screening and monitoring of osteoporosis. Ann Clin Biochem 1995;32(Pt 3):244–60.

38. Robins S.P., Stewart P., Astbury C., Bird H.A. Measurement of the crosslinking compound, pyridinoline, in urine as an index of collagen degradation in jont diseases. Ann Rheum Dis 1986;45(12):969–73.

39. Robins S.P., Black D., Paterson C.R. et al. Evaluation of urinary hydroxypyridinium crosslink measurements as resorption markers in metabolic bone diseases. Eur J Clin Invest 1991;21(1):310–5.

40. Robins S.P. Measurement of pyridinium crosslinks by HPLC and immunoassay. In: Calcium regulating hormones and markers of bone metabolism: measurement and interpretation. Heidelberg: Clin.Lab. Publications, 1997. Pp. 135–40.

41. Becker S., Traber L., Schmidt-Gayk H. Free and peptide-bound pyridinium crosslinks in urine measured in healthy people, women after menopause and patients with bone metastases. In: Calcium regulating hormones and markers of bone metabolism: measurement and interpretation. Heidelberg: Clin.Lab. Publications, 1997. Pp. 141–6.

42. Delmas P.D. Biochemical markers of bone turnover. Acta Orthop Scand Suppl 1995;266:176–82.

43. Bonde M., Qvist P., Fledelius C. et al. Applications of an enzyme immunoassay for a new marker of bone resorption (CrossLaps): Follow-up on hormone re-placement therapy and osteoporosis risk assessment. J Clin Endocrinol Metab 1995;80(3):864–8.

44. Hanson D.A., Weis M.A., Bollen A.M. et al. A specific immunoassay for monitoring human bone resorption: quantitation of type I collagen cross-linked N-telopeptides in urine. J Bone Miner Res 1992;7(11):1251–8.

45. Рожинская Л.Я. Остеопороз: диагностика нарушений метаболизма костной ткани и кальций-фосфорного обмена. Клиническая и лабораторная диагностика 1998;(5):25–32. [Rozhinskaya L.Y. Osteoporosis: diagnostics of bone tissue metabolism and calcium-phosphoric metabolism disturbances. Klinicheskaya i laboratornaya diagnostika = Clinical and Laboratory Diagnostics 1998;(5):25–32. (In Russ.)].

46. Body J. J., Dumon J.C., Gineyts E., Delmas P.D. Comparative evaluation of markers of bone resorption in patients with breast cancer-induced osteolysis be-fore and after biphosphonate therapy. Br J Cancer 1997;75(3):408–12.

47. Любимова Н.В., Кушлинский Н.Е., Робинс С.П. Маркеры резорбции костной ткани при метастатическом поражении скелета. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 1998;(3):323–8. [Lyubimova N.V., Kushlinsky N.E., Robins S.P. Bone resorption markers at metastatic bone disease. Bulleten, eksperimental, noy biologii i meditsiny = Bulletin of Experimental Biology and Medicine 1998;(3):323–8. (In Russ.)].

48. Любимова Н.В., Никитина О.Ю., Робинс С.П., Кушлинский Н.Е. Биохимические маркеры костного ремоделирования у онкологических больных с поражением скелета. Вопросы онкологии 2000;(5):13–8. [Lyubimova N.V., Nikitina O.Y., Robins S.P., Kushlinsky N.E. Bone turnover biochemical markers in oncologic patients with skeletal lesion. Voprosy onkologii = Problems in Oncology 2000; (5):13–8. (In Russ.)].

49. Withold W., Friedrich W., Reinauer H. Comparision of biochemical markers of bone resorption in patients with metabolic and malignant bone diseases. Ann Clin Biochem 1996;33(Pt 5):421–7.

50. Lipton A., Demers L., Daniloff Y. et al. Increased urinary excretion of pyridinium cross-links in cancer patients. Clin Chem 1993;39(4):614–8.

51. Pecherstorfer M., Zimmer-Roth I., Schilling T. et al. The diagnostic value of urinary pyridinium cross-links of collagen, serum total phosphatase, and urinary calcium excretion in neoplastic bone disease. J Clin Endocrinol Metab 1995;80(1): 97–103.

52. Seibel M. J., Lambrinoudaki I., Zipf A. Biochemical markers of bone metabolism in metastatic bone disease. In: Metastatic bone disease: fundamental and clinical aspects. Berlin, Heidelberg: Springer Verlag, 1994. Pp. 109–26.

53. Lumachi F., Santeufemia D.A., Del Conte A. et al. Carboxy-terminal telopeptide (CTX) and amino-terminal propeptide (PINP) of type I collagen as markers of bone metastases in patients with non-small cell lung cancer. Anticancer Res 2013;33(6):2593–6.

54. Addison C.L., Pond G.R., Zhao H. et al. Effects of de-escalated bisphosphonate therapy on bone turnover biomarkers in breast cancer patients with bone metastases. Springerplus 2014;3:577.

55. Любимова Н.В., Кожарская Г.В., Агеева Т.В. и др. Клиническое значение биохимических показателей костного ремоделирования при поражении скелета у больных раком молочной железы.Молекулярная медицина 2012;(5):25–9. [Lyubimova N.V., Kozharskaya G.V., Ageeva T.V. et al. Clinical relevance of bone turnover biochemical indices at skeletal lesion in breast cancer patients. Molekulyarnaya meditsina = Molecular Medecine 2012;(5):25–9. (In Russ.)].

56. Kylmälä T., Tammela T.L., Risteli L. et al. Type I collagen degradation product (ICTP) gives information about the nature of bone metastases and has prognostic value in prostate cancer. Br J Cancer 1995;71(5):1061–4.

57. Brown J.E., Cook R. J., Major P. et al. Bone turnover markers as predictors of skeletal complications in prostate cancer, lung cancer and other solid tumors. J Natl Cancer Inst 2005;97(1):59–69.

58. Ali S.M., Demers L.M., Leitzel K. et al. Baseline serum NTx levels are prognostic in metastatic breast cancer patients with boneonly metastasis. Ann Oncol 2004;15(3):455–9.

59. Семенов Н.Н., Любимова Н.В., Кушлинский Н.Е., Личиницер М.Р. С-концевой телопептид коллагена I типа в моче – фактор прогноза при метастатическом поражении скелета у больных раком молочной железы. Технологии живых систем 2012;9(3):3–7. [Semenov N.N., Lyubimova N.V., Kushlinsky N.E., Lichinitser M.R. Beta-cross laps in urine as forecast factor at metastatic skeletal lesion in breast cancer patients. Tekhnologii zhivykh system = Living Systems Technologies 2012;9(3):3–7. (In Russ.)].

60. Berruti A., Piovesan A., Torta M. et al. Biochemical evaluation of bone turnover in cancer patients with bone metastases. Br J Cancer 1996;73(12):1581–7.

61. Du W.X., Duan S.F., Chen J. J. et al. Serum bone-specific alkaline phosphatase as a biomarker for osseous metastases in patients with malignant carcinomas: a systematic review and meta-analysis. J Cancer Res Ther 2014;10(Suppl 2):140–3.

62. Demers L.M., Costa L., Chinchilli V.M. et al. Biochemical markers of bone turnover in patients with metastatic bone disease. Clin Chem 1995;41(10):1489–94.

63. Li F., Pitt P.I., Sherwood R. et al. Biochemical markers of bone turnover in women with surgically treated carcinoma of the breast. Eur J Clin Invest 1993;23(9):566–71.

64. Tang C., Liu Y., Qin H. et al. Clinical significance of serum BAP, TRACP 5b and ICTP as bone metabolic markers for bone metastasis screening in lung cancer patients. Clin Chim Acta 2013;426:102–7.

65. Jung K., Lein M. Bone turnover markers in serum and urine as diagnostic, prognostic and monitoring biomarkers of bone metastasis. Biochim Biophys Acta 2014;1846(2):425–38.

Щелочная фосфатаза (ЩФ, ALP, Alkaline phosphatase) в крови, биохимический анализ

Подробности: Просмотров: 2026

Щелочная фосфатаза (ЩФ, ALP, Alkaline phosphatase) в крови, биохимический анализ крови животных

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Материал для исследования: Кровь.

Щелочная фосфатаза (ЩФ, ALP, Alkaline phosphatase) — фермент, присутствующий во многих клетках. Его биологическая роль пока не выяснена, хотя известно, что ЩФ — это мембраносвязанный фермент, синтез и высвобождение которого в сыворотку крови происходят вследствие холестаза, применения лекарственных препаратов, действия кортикостероидов. Вследствие того, что ЩФ является мембраносвязанным ферментом, при повреждении или некрозе клеток не произойдет повышения сывороточной его активности, если только не разовьется холестаз или не будет оказан другой стимулирующий эффект. Различные формы (изоферменты) ЩФ вырабатываются в разных тканях и под воздействием разных индуцирующих факторов. Чаще всего в сыворотке крови у собак и кошек обнаруживается печеночный изофермент (активность которого повышается при холестазе и т. п.), костный изофермент (активность которого возрастает при перестройке костной ткани), а также кортикостероид-индуцируемый изофермент, который вырабатывается в печени и выявляется только у собак. Общее количество сывороточной ЩФ обычно оценивают по сыворотке крови, хотя повышение активности специфических изоферментов можно дифференцировать с помощью электрофореза или используя селективные тесты, ингибирующие изоферменты.

Показания

Заболевание печени или желчных путей (предполагаемый диагноз).
Болезнь Кушинга (предполагаемый диагноз).

Оцениваемые системы органов

Гепатобилиарная.
Опорно-двигательная.
Эндокринная или метаболическая.

РАБОТА С ОБРАЗЦОМ

Взятие образца

Необходимо 0,5—2,0 мл венозной крови.

Обработка полученных образцов

Кровь берут в обычную пробирку с красной крышкой или в пробирку с компонентами для отделения сыворотки.

Условия хранения

При необходимости кратковременного хранения пробу следует поместить в холодильник; для более длительного хранения образец надо заморозить.

Стабильность образца

При комнатной температуре или при условии хранения в холодильнике: 1 неделя.
В замороженном состоянии (-20 °С): 2 месяца.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ТЕСТА

Диапазон нормальных значений

Собаки: 12-121 МЕ/л.
Кошки: 10-72 МЕ/л.
Референсные значения могут отличаться, что зависит от методики исследования и лаборатории.

Возможные патологические изменения

Значения, превышающие показатели нормы или находящиеся ниже нормы.

Факторы, влияющие на результаты теста

Препараты, которые могут повлиять на методологию теста — не известны.

Препараты, которые могут повлиять на физиологические процессы в организме

у собак любая форма кортикостероидных препаратов (даже для местного или офтальмологического применения) повышает уровень ЩФ. Этот эффект может сохраняться несколько недель после отмены препарата, особенно при использовании пролонгированных форм с замедленным высвобождением активного вещества.
Противосудорожные препараты и барбитураты (фенобарбитал, фенитоин, примидон) могут также повышать уровень ЩФ.

Нарушения, которые могут повлиять на результаты теста — Не известны.

Особые факторы, влияющие на проведение и интерпретацию результатов данного теста Вид животного

Оценка ЩФ является относительно нечувствительным исследованием при подозрении на холестаз у кошек.
Только у собак отмечается выработка кортикосте-роид-индуцируемого изофермента ЩФ в ответ на лечение кортикостероидами или вследствие повышения эндогенных кортикостероидов.

Порода

У некоторых семейных линий собак породы сибирский хаски и скотч терьер наблюдается повышение активности ЩФ в 1,5-1,7 раз больше нормы без каких-либо признаков поражения печени или увеличения концентрации кортикостероидов.

Возраст

У молодых, быстро растущих животных (старше 12-15 месяцев) часто отмечается повышение активности сывороточной ЩФ (костного изофермента).
У стареющих собак часто выявляют повышение ЩФ (вследствие узловатой гиперплазии печени).

Пол — Не влияет.

Беременность

У беременных и подсосных животных может отмечаться повышение уровня ЩФ (вследствие перестройки костной системы).

Чувствительность и специфичность теста, прогностичность положительного и отрицательного результатов исследования

При холестатическом заболевании у собак:

Чувствительность — 96 %.
Прогностичность положительного результата — 61 %.
Прогностичность отрицательного результата — 94 %.

Относительно нечувствительный тест при холестазе у кошек.

Причины появления патологических изменений

Высокие значения:

Печеночная ЩФ

Лечение кортикостероидами или повышение уровня эндогенных кортикостероидов (на ранней стадии).
Гепатопатия (холестаз), вызванная кортикостероидами. Узловая гиперплазия печени.
Липидоз печени.
Цирроз.
Гепатит или холангиогепатит.
Камни в желчном пузыре.
Холецистит.
Неоплазия печени или желчных путей.
Панкреатит.
Лечение противосудорожными препаратами.
Гипертиреоз.
Болезнь накопления меди.

Костная ЩФ

У молодых, растущих животных.
Заживление костной ткани после перелома.
Неоплазия кости.
Метаболическое заболевание кости (резорбция).
Гипертиреоз.
Беременность.
Семейная гиперфосфатемия (сибирский хаски, скотч терьер).

Кортикостероид-индуцированная ЩФ (только у собак)

Гиперадренокортицизм.
Лечение глюкокортикоидами.
Выраженное заболевание, не связанное с поражением надпочечников (стресс, развившийся на фоне болезни, является причиной усиленной секреции кортизола).

Низкие значения:

Клинического значения не имеет

Клиническое применение

Повышение активности костной ЩФ обычно умеренное (в 2—3 раза выше нормы).
Значительное повышение активности ЩФ (в 10 раз и выше), как правило, возникает вследствие поражения печени, холестатического заболевания или воздействия кортикостероидов.
При лечении кортикостероидами или при болезни Кушинга у собак может наблюдаться очень значительное повышение активности ЩФ (в 100 раз выше нормы).
Увеличение уровня эндогенных кортикостероидов в ответ на заболевание приводит к незначительному повышению активности фермента (менее чем в 3 раза от нормы).
Кортикостероиды у собак вначале вызывают повышение активности печеночных изоферментов. Кор-тикостероидные изоферменты начинают превалировать через 2—3 недели лечения.
У кошек даже слабое повышение активности ЩФ следует рассматривать как значительное.
У кошек при липидозе печени часто отмечается повышение уровня ЩФ с одновременным увеличением активности ГГТ или уровень ГГТ может оставаться в пределах нормы.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Дополнительные исследования

Тест ингибирования левамизолом и тест с инактивацией нагреванием для оценки кортикостероидного изофермента ЩФ: левамизол и нагревание селективно ингибируют некортикостероидные изоферменты ЩФ.
Электрофорез изоферментов для определения количества ЩФ.
Оценка уровня ГГТ и/или билирубина для подтверждения/исключения холестаза.
Определение активности AJIT и ACT для выявления повреждения гепатоцитов.
Соотношение кортизола/креатинина в моче в качестве скрининга при гиперадренокортицизме.

Синонимы

ALP.
Alk Phos.
Alkaline phosphatase
AP.
SAP (сывороточная щелочная фосфатаза).

Сокращения

ACT (AST, ASAT) — аспартатаминотрансфераза.
АЛТ (ALT, ALAT) — аланинаминотрансфераза.
ЩФ (ALP, Alkaline phosphatase) — щелочная фосфатаза.
КК (CK) — креатинкиназа.
ГГТ (GGT) — гамма-глутамилтрансфераза.
Р5Р — пиридоксаль-5′-фосфат.

Сделать биохимический анализ и определить концентрацию Щелочной фосфатазы (ЩФ, ALP, Alkaline phosphatase) в крови можно в независимой лаборатории ветеринарной клиники Котофей, г. Днепр.

Информация взята из открытых источников и учебников популярных издательств.

Фосфатаза щелочная общая — Сдать анализ в Ростове-на-Дону

Заболевания печени и желчевыводящих путей диагностируются с использованием комплекса лабораторных анализов. Одним из них является анализ на общую щелочную фосфатазу – если содержание этого вещества в крови резко возрастает, это свидетельствует о гибели клеток печени и нарушении нормального оттока желчи. Ее застой также вызывается скоплением камней в желчных протоках. Кроме того, этот анализ может назначаться для выявления заболеваний костей, быстрого роста злокачественной опухоли.

Что такое общая щелочная фосфатаза?

Общая щелочная фосфатаза – это фермент, входящий в состав тканей печени и желчевыводящих протоков. Он используется как важная составляющая биохимических реакций и не действует при попадании в кровь. Клетки печени постепенно меняются, поэтому в кровяном русле постоянно присутствует небольшое содержание фермента. Однако если его становится слишком много, это говорит о заболевании с гибелью большого количества клеток печени. Также повышение щелочной фосфатазы нередко говорит о нарушении работы желчевыводящих путей, патологиях костной ткани (остеосаркоме, остеопорозе).При беременности в норме активность щелочной фосфатазы повышена, так как она содержится в плаценте.Временное повышение активности ЩФ отмечается после переломов.У детей и юношей активность ЩФ выше, чем у взрослых, так у них происходит рост костей.

Возможные результаты анализа:

Норма общей щелочной фосфатазы равна 35-105 Ед/л для женщин и 40-130 Ед/л для мужчин, для детей нормальные показатели отличаются.
Общая щелочная фосфатаза понижена. Причинами являются анемия, нарушение функционирования щитовидной железы, недостаток магния в метаболизме.
Повышенный уровень фермента. Распространенные причины – нарушения работы печени и желчевыводящих путей (рак, цирроз, гепатит, скопление камней в желчных протоках). Также причинами могут быть остеосаркома и иные опухолевые процессы костной ткани, патологический рост.

Правила подготовки

Чтобы провести анализ крови на щелочную фосфатазу, необходимо выполнить следующие требования подготовки:

Отказаться от курения минимум за полчаса до получения крови на анализ.
Не есть минимум 12 часов до проведения анализа.
Не допускать физических и эмоциональных нагрузок минимум полчаса до исследования.

Когда назначается анализ?

Определение отклонений от нормы щелочной фосфатазы требуется для диагностики заболеваний печени, выявления опухолевых процессов печени и костной ткани, диагностики желчнокаменной болезни. Кроме того, это исследование включено в перечень «печеночных проб», которые назначаются при общих осмотрах.

Где провести исследование в Ростове-на-Дону?

Клинико-диагностический центр «Да Винчи» проводит недорогие лабораторные исследования для выявления патологий печени и других внутренних органов. Гарантируется высокая точность результатов обследования.

Наименование услуги
Цена
Фосфатаза щелочная общая
220 pуб.

Отзывы об услуге

Щелочная фосфатаза — обзор

A Щелочная фосфатаза

Щелочная фосфатаза (EC 3.1.3.1.) Была одним из первых сывороточных ферментов, имеющих клиническое значение. В 1920-х годах было обнаружено, что активность сывороточного АП повышается при различных заболеваниях костей и печени. Щелочная фосфатаза остается важным ферментом для характеристики заболеваний костей и печени.

Щелочная фосфатаза представляет собой неспецифический фермент, который гидролизует многие типы сложных эфиров фосфорной кислоты и присутствует во многих молекулярных формах, т.е.е., изоферменты. Эндогенный субстрат AP неизвестен, но фермент катализирует дефосфорилирование АТФ и, как полагают, связан с энергозатратными мембранными «насосами». Термин «щелочной» относится к оптимальному щелочному pH для этого класса фосфатаз in vitro. Оптимальное значение pH для AP составляет 10, т.е. pH в организме маловероятен. Возможно, что AP может иметь совершенно другую активность в своей естественной среде (Pekarthy et al., 1972; Bergmeyer, 1974).

Анализы на AP используют большое количество синтетических субстратов, что привело к путанице в выражении его активности. Раньше эпонимы использовались как единицы, такие как единицы Боданского и Кинга-Армстронга, которые позже были преобразованы в международные единицы (см. Приложение II). Однако преобразование имеет значение для сравнительных исследований только в том случае, если учитываются субстратная специфичность и условия анализа. Когда кто-то преобразует данные, полученные с помощью разных методов, это удовлетворительно в пределах нормального диапазона, но за пределами диапазона действия обычно несопоставимы.

Сыворотка AP теперь известна как группа изоферментов. Они присутствуют в большом количестве клеток, но лишь в немногих их активности достаточно, чтобы иметь клиническое значение. Как правило, активность AP связана с микроворсинками секреторных и абсорбирующих клеток, такими как эпителий канальцев желчных протоков, кишечного тракта, эпителий почечных канальцев и плацента. Он также содержится в клетках печени и связан с остеобластической активностью в костях. Кость, вероятно, содержит больше активности AP, чем любая другая ткань.Каждый из изоферментов AP из костей, печени, кишечника, плаценты и почек был выделен и охарактеризован электрофорезом, иммунологически, кинетическими константами, с ингибиторами и чувствительностью к теплу. Каждый из этих критериев использовался для идентификации изоферментов в нормальных и аномальных условиях (Baetz, 1969; Pickrell et al., 1974; Hoffman and Dorner, 1975, 1977; Hoffman et al., 1977a, b; Saini и Saini, 1978a, b).

Основным источником сывороточного АП у молодняка является кость.У всех молодых животных активность АП в сыворотке выше, чем у взрослых, из-за высокой остеобластической активности у молодых. Сывороточная активность AP в два или три раза выше у щенков, жеребят (рис. 2) и котят, чем у взрослых (Pickrell et al., 1974; Blackmore and Elton, 1975).

Рис. 2. Среднее и стандартное отклонение сывороточной активности щелочной фосфатазы у породистых лошадей в зависимости от возраста.

AP печени способствует активности AP в сыворотке крови на протяжении всей жизни, и, когда рост костей достигает уровня взрослой жизни, печень становится основным источником. В нормальной печени эпителий желчных протоков имеет наибольшую активность АП. Когда обструкция системы протоков происходит на любом уровне, наблюдается повышение активности AP печени в сыворотке (Hoffman et al., 1977a). Активность АП печени может увеличиваться в сыворотке в связи с фиброзом или обструкцией печени, но более частым явлением является ее повышение в связи с липидозом печени.Липиды откладываются в печени, и активность АП в сыворотке увеличивается при сахарном диабете, гипотиреозе, гиперадренокортицизме, тяжелом голодании и поздней беременности. Кроме того, терапевтическое введение стероидов также вызывает повышение активности АП печени в сыворотке крови. Источник в печени этого индуцированного стероидами AP неизвестен (Dorner et al. , 1974).

Щелочная фосфатаза в назальном секрете крупного рогатого скота: биохимическая и молекулярная характеристика | BMC Veterinary Research

Животные и сбор носового секрета

Образцы 38 коров голштино-фризской породы в возрасте 2-5 лет были взяты из стада из 90 дойных коров с фермы Кохно Университета Глазго.Эксперименты на животных проводились с одобрения этического комитета колледжа MVLS Университета Глазго и полностью соответствовали Закону о животных (научные процедуры) 1986 года Министерства внутренних дел Великобритании и Северной Ирландии. Клиническое обследование было проведено, чтобы убедиться, что коровы клинически здоровы и не имеют респираторных заболеваний. Во время процедуры коров удерживали в давке. Имеющийся в продаже тампон вводили в одну ноздрю и осторожно скользили вверх и назад на глубину примерно 5-8 см, а затем оставляли на месте на срок до 15 минут [15].Затем тампон вынули из ноздри, осторожно потянув за прикрепленную нить, и взвесили в качестве меры поглощения NS перед тем, как вставить его в модифицированную сборную трубку (рис. 1). За коровами наблюдали во время сбора, чтобы убедиться, что не было никаких признаков дискомфорта, но никаких признаков дискомфорта не наблюдалось в любое время ни у одной из коров в исследовании. Модифицированные пробирки центрифугировали при 700 g в течение 10 минут при 4 ° C по процедуре, аналогичной процедуре Лу и Эша [16]. Назальный секрет, собранный на дне пробирки Фалькона, переносили в 1.Пробирки на 5 мл и хранят при -80 ° C до дальнейшего анализа.

Рисунок 1

Схематическое изображение собирательной трубки для назального секрета. Насыщенный тампон из ноздри был вставлен в модифицированную сборную трубку, состоящую из 30-миллилитровой универсальной пробирки с четырьмя отверстиями по 2 мм, просверленных в дне, вставленной в 50-миллилитровую пробирку Falcon.

Экстракция белка для биохимического и иммунологического анализа

Образцы слизистой оболочки носа, тонкой кишки, сердца, печени и почек от 6 взрослых особей крупного рогатого скота были собраны на бойне и обработаны в течение 24-48 часов. Слизистую носа осторожно разрезали и отделяли от носовых раковин с помощью щипцов и лезвия. Слизистую оболочку кишечника получали путем осторожного соскоба со слизистой оболочки тонкого кишечника металлическим шпателем. Ткани мгновенно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C перед экстракцией. Два грамма каждой ткани промывали изотоническим физиологическим раствором и гомогенизировали (Janke & Kunkel Ultra Turrax T25) в 5 мл физиологического раствора. AP был извлечен из 2 образцов раздробленной губчатой кости, полученной из пястной кости 2 голов крупного рогатого скота.

Экстракты тканевых АР дополнительно обрабатывали инкубацией со 100% н-бутанолом в соотношении 1: 4 гомогенатов н-бутанол: белок при осторожном перемешивании при 4 ° C в течение 30 минут [17]. Экстракция н-бутанолом способствует высвобождению АР из мембран, где он закреплен на фосфатидилинозитоле [18]. Образцы центрифугировали при 1500 g в течение 30 минут при 4 ° C, водный слой удаляли и центрифугировали при 15000 g в течение 90 минут с супернатантом, представляющим собой экстракт AP. Активность АР и концентрацию белка в экстрактах АР определяли, как описано ниже.Активность АР экстрактов тканей регистрировали как активность фермента на грамм экстрагированной ткани (Ед / г). Относительную активность АР в различных экстрактах сравнивали с помощью теста Краскела-Уоллиса (GraphPad Prism 5.0, Калифорния, США) с уровнем значимости (α), установленным на 0,05.

Биохимический и иммунологический анализ

Биохимический состав носовых выделений и экстрактов тканей исследовали с помощью анализатора Olympus A640, принадлежащего Ветеринарной диагностической службе Университета Глазго.Ферментативный тест проводили при 37 ° C, где измерение AP основывалось на рекомендациях Немецкого общества клинической химии (GSCC) при pH 10,4. Метод анализа γ-глутамилтрансферазы (GGT) и аспартаттрансаминазы (AST) был основан на рекомендации Международной федерации клинической химии (IFCC). Альбумин измеряли с помощью анализа связывания бромкрезолового зеленого (БЦЖ), общий белок по реакции с биуретом, мочевину по реакции с 2-оксоглутуратом и никотинамидадениндинуклеотидом (НАДН), креатинин по реакции с пикриновой кислотой, общий билирубин по реакции с 3,5 -дихлорфенилдиазонийтетрафторборат (DPD), кальций по реакции с о-крезолфталеин-комплексоном (oCPC) и фосфат по реакции с молибдатом.Измерения электролитов проводились ионоспецифическими электродами с использованием метода непрямой потенциометрии. Измерение концентраций бычьего IgA и IgG с помощью видоспецифичного ELISA (Bethyl Labs, Техас, США) в соответствии с инструкциями производителя.

Гистохимический анализ

Слизистые оболочки носа крупного рогатого скота собирали для гистологического исследования, как описано выше, с вырезанным квадратом размером 1 см и быстрым замораживанием в жидком азоте. Криосрезы размером 8 мкм фиксировали ацетоном, окрашивали набором субстратов для щелочной фосфатазы Vector® Red (Vector Labs, Питерборо, Великобритания) в присутствии или в отсутствие ингибитора левамизола (Sigma-Chem Co, Poole, UK), окрашенного гематоксилином Gills ( Sigma-Chem Co, Пул, Великобритания) и установлен с помощью Histomount (National Diagnostics, Нью-Джерси, США).Программное обеспечение D (Olympus, Япония).

Экстракция общей клеточной РНК

Образцы тканей 100 мг от того же крупного рогатого скота, которые использовались для приготовления экстрактов тканей, использовали для приготовления РНК с использованием PureZOL ™ (Bio-Rad Laboratories, Хемел Хемпстед, Великобритания) в соответствии с протоколом производителя.

Конечная точка обратной транскриптазы — полимеразная цепная реакция (ОТ-ПЦР)

Реакции обратной транскрипции (ОТ) проводили на образцах РНК из слизистой оболочки носа, печени и тонкой кишки.Образцы 2 мкг РНК денатурировали при 65 ° C в течение 5 минут. 50 мкл реакции, содержащие 2 мкг образца общей РНК, 1 × буфер для первой цепи, 0,5 мМ каждого из dNTP, 10 мМ дитиотреитола, 3 мкг случайных праймеров, 20 ед. RNAseOut и 400 ед. Обратной транскриптазы M-MVL (Life Technologies Ltd, Paisley , Великобритания) инкубировали в течение 30 минут при 37 ° C, 60 минут при 42 ° C, 15 минут при 70 ° C и гасили при 4 ° C. Продукты ПЦР анализировали на 2% (мас. / Об.) Агарозных гелях, содержащих бромид этидия (0,5 мкг / мл).

Праймеры

были сконструированы для амплификации специфических областей гена ALPI (NM_173987) AP (IAP) бычьего кишечника и неспецифического гена AP ALPL (NM_176858), соответственно, с использованием интерактивного алгоритма программы праймеров на базе Интернета, версии 1 программного обеспечения GeneFisher.2.2 (BiBiServe, Билефельд, Германия) с предсказанным размером продукта ПЦР 500 п.н. Последовательности праймеров представлены в таблице 1. Был подготовлен общий объем 25 мкл реакции ПЦР, содержащий 12,5 мкл буфера для ДНК-полимеразы RedTaq® (Sigma Chem. Co, Пул, Великобритания), 0,5 мкл каждого праймера (5 пмоль на реакционную пробирку. ) и 200 нг гДНК. Условия амплификации составляли 30 циклов (94 ° C в течение пяти минут, 94 ° C в течение одной минуты, 58 ° C в течение одной минуты, 72 ° C в течение одной минуты, 72 ° C в течение 10 минут). Продукты ПЦР (2 мкл) визуализировали с использованием бромистого этидия (0.5 мкг / мл) окрашивали агарозный гель и количественно оценивали по лестнице масс 100 п.н. для ДНК (Life Technologies, Пейсли, Великобритания).

Таблица 1 Последовательности праймеров , используемые для RT-PCR —

Секвенирование

ПЦР-продуктов из реакций RT-PCR очищали с использованием набора для очистки QIAquick PCR (Qiagen, Crawley, UK) в соответствии с инструкциями производителя. Продукты ПЦР секвенировали с использованием Big Dye v3.1 Terminator (Life Technologies, Пейсли, Великобритания) в реакционном объеме 10 мкл, содержащем 200-500 нг матрицы, 1X буфер для секвенирования, 32 мМ праймер и 1x смесь Big Dye.Реакции секвенирования проводили на двух случайных образцах слизистой оболочки носа с прямым и обратным праймерами в отдельных реакциях. Продукты секвенирования осаждали этанолом, ресуспендировали в формамиде и считывали с использованием капиллярного электрофореза на Applied Biosystems 3130XL Genetic Analyzer (Hitachi, Tokyo, Japan).

Изоэлектрическое фокусирование (IEF)

ПИ различных изоферментов АР определяли разделением с использованием геля Invitrogen Novex® pH 3-7 IEF (Life Technologies, Пейсли, Великобритания).Образцы NS крупного рогатого скота и экстракты тканей NS, слизистой оболочки носа, тонкой кишки, печени, почек и костей были отобраны случайным образом из имеющихся образцов для разделения изоферментов AP. Образцы разбавляли до активности АР 300-350 МЕ / л в буфере для образцов IEF с pH 3-7 (Life Technologies, Пейсли, Великобритания), приготовленном в соответствии с инструкциями производителя. В каждую лунку загружали десять микролитров приготовленного образца таким образом, чтобы в каждую лунку загружали равные активности АР. Изоэлектрическую фокусировку проводили при 4 ° C с использованием следующего градиента напряжения: 100 В, 1 час; 200 В, 1 час; 500 В, 30 минут.Затем гель окрашивали растворами субстрата NBT-BCIP ALP Pierce 1-Step ™ при pH 9,2 (Thermo Fisher Scientific Inc, Иллинойс, США) в течение 5 часов при 37 ° C. PI сфокусированных полос оценивали по сравнению со стандартами pH 3-10 (Serva Electrophoresis, Heidelberg, Germany), которые запускали в дорожке гелей IEF, причем дорожка вырезалась и окрашивалась отдельно кумасси синим после изоэлектрического фокусирования.

Исследовательские статьи, журналы, авторы, подписчики, издатели

Как крупный международный издатель академических и исследовательских журналов Science Alert издает и разрабатывает названия в партнерстве с самыми престижные научные общества и издатели.Наша цель заключается в том, чтобы максимально широко использовать качественные исследования. аудитория.

Мы прилагаем все усилия, чтобы поддержать исследователей которые публикуют в наших журналах. Есть масса информации здесь, чтобы помочь вам публиковаться вместе с нами, а также ценные услуги для авторов, которые уже публиковались у нас.

Доступны цены 2021 года. Ты может получить личную / институциональную подписку перечисленных журналы прямо из Science Alert. В качестве альтернативы вы может пожелать связаться с выбранным вами агентством по подписке Направляйте заказы, платежи и запросы в службу поддержки. в службу поддержки клиентов журнала Science Alert.

Science Alert гордится своей тесные и прозрачные отношения с обществом. В виде некоммерческий издатель, мы стремимся к самым широким возможное распространение публикуемых нами материалов и на предоставление услуг высочайшего качества нашим издательские партнеры.

Здесь вы найдете ответы на наиболее часто задаваемые вопросы (FAQ), которые мы получили по электронной почте или через контактную форму в Интернете.В зависимости от характера вопросов мы разделили часто задаваемые вопросы на разные категории.

Азиатский индекс научного цитирования (ASCI) стремится предоставить авторитетный, надежный и значимая информация по освещению наиболее важных и влиятельные журналы для удовлетворения потребностей мировых научное сообщество.База данных ASCI также предоставляет ссылку к полнотекстовым статьям до более чем 25000 записей с ссылка на цитированные ссылки.

Колориметрический анализ активности щелочной фосфатазы в биопленке S. aureus

Щелочная фосфатаза (ЩФ) повсеместно экспрессируется как в прокариотических, так и в эукариотических клетках ¹. Он может катализировать гидролиз монофосфата из различных молекул, таких как нуклеотиды, белки, алкалоиды, сложные эфиры фосфорной кислоты и ангидриды фосфорной кислоты.У человека эукариотическая ЩФ присутствует во многих тканях, включая печень, кости, кишечник и плаценту ². Он играет важную роль в фосфорилировании белков, росте клеток, апоптозе, процессах стволовых клеток, а также в нормальной минерализации скелета. Эукариотическая ЩФ также является ключевым сывороточным индикатором наличия заболеваний в костях, печени и других тканях / органах при повышении ³ ^, ⁴.

Прокариотическая ЩФ была обнаружена в различных бактериальных клетках, включая E.coli ⁵, S. aureus ⁶ ^, ⁷ и некоторые обычные бактерии рубца в почве ⁸. Бактериальная активность ЩФ использовалась в качестве биосенсора при обнаружении пестицидов, тяжелых металлов ⁹ и бактериального загрязнения ¹⁰. Конститутивная экспрессия ALP была использована для идентификации Staphylococci ¹¹ и для дифференциации Serratia от Enterobacter ¹².Кроме того, предполагается, что конститутивная продукция ЩФ коррелирует с патогенностью у стафилококков ¹³. Хотя ALP изучалась в различных условиях ³ ^, ⁴, мало что сообщается о ее активности и функции в культурах биопленок.

Было документально подтверждено, что биопленка имеет иную бактериальную жизнь, чем ее свободноживущая бактериальная клетка. ¹⁴. В S. aureus образование биопленки было идентифицировано в различных клинических условиях и объясняет устойчивость к антибиотикам и хроническое воспаление ¹⁵ ^, ¹⁶.Сообщалось, что в матрице биопленки можно найти множество молекул, таких как полисахариды, белки, нуклеиновые кислоты и липиды, но механизм образования биопленок полностью не изучен ¹⁴. Чтобы понять роль ALP в формировании биопленок, мы культивировали биопленок S. aureus в 96-луночных планшетах для тканевых культур и измеряли активность ALP с использованием пара-нитрофенилфосфата (pNPP).

Молекула pNPP представляет собой готовый к использованию субстрат для ALP и широко используется для измерения активности ALP ⁶ ^, ¹⁷ ^, ¹⁸.Этот колориметрический анализ основан на превращении пара-нитрофенилфосфата (pNPP) в пара-нитрофенол, в результате чего получается окрашенный продукт при 405 нм. По сравнению с другими традиционными анализами ALP, такими как электрофорез в агарозном геле ¹⁹, преципитация агглютинина зародышей пшеницы (WGA) и WGA-HPLC ²⁰, этот анализ является высокоспецифичным, чувствительным, простым в воспроизведении и, что наиболее важно, позволяет высокая пропускная способность.

Требуется подписка. Пожалуйста, порекомендуйте JoVE своему библиотекарю.

Биохимические свойства щелочной фосфатазы из клеток рака эндометрия — PubliRES

@article {8e289ab8ca7045f5b725066628c1ef8e,

title = «Биохимические свойства щелочной фосфатазы из клеток рака эндометрия»,

= «Возникновение активности фосфатных клеток эндометрия»,

был исследован на нескольких аденокарциномах эндометрия человека.Каталитическая активность была обнаружена только в 10 из 15 опухолей, без явной корреляции между повышенным АД и гистологическим типом.Кажущаяся молекулярная масса фермента после частичной очистки составляла около 140000 дальтон. Кинетическая активность, термодинамические свойства и зависимость активности от pH находились в диапазонах, указанных для других подформ. Некоторые другие физико-химические свойства также были исследованы и сравнены с теми, которые проявляются ферментами, полученными из нормальных тканей человека. Исследования ингибирования показывают, что фермент имеет несколько общих свойств с плацентарной формой, в частности, в отношении устойчивости к хлориду цинка и действию ЭДТА.С другой стороны, по чувствительности к неконкурентным ингибиторам, а также к мочевине и аскорбиновой кислоте он ближе к другим термочувствительным формам, не относящимся к Регану. Результаты подтверждают мнение о том, что может иметь место полиморфизм экспрессии AP в неопластических тканях. Очевидно, что для более точного определения характеристик онкологических ферментов необходим более широкий спектр физико-химических свойств. »,

keywords =« Аденокарцинома, щелочная фосфатаза, кости и кости, женщины, люди, кишечник, тонкий, печень, плацента, беременность, новообразования матки. , Аденокарцинома, щелочная фосфатаза, кости и кости, женщины, люди, кишечник, тонкий, печень, плацента, беременность, новообразования матки «,

author =» Alvaro Mordente «,

год =» 1985 «,

language =» English »,

volume =« 34 »,

pages =« 113—121 »,

journal =« ENZYME »,

issn =« 0013-9432 »,

publisher =« S Karger AG: Allschwilerstrasse. 10, CH-4009 Basel Switzerland: 011 41 61 3061111, EMAIL: orders @ karger.ch, ИНТЕРНЕТ: http://www.karger.com, факс: 011 41 61 3061234 «,

}

Ферментные субстраты для ELISA | Thermo Fisher Scientific

Колориметрические субстраты для приложений ELISA

Найдите различные колориметрические (хромогенные) субстраты для ELISA-анализа пероксидазы хрена (HRP) и щелочной фосфатазы (AP) в соответствии с вашей чувствительностью и экспериментальными потребностями.

Субстрат	Фермент	Преимущества, формат	Кат.(всего анализов)	Поглощение и цвет	Предел обнаружения²	Рекомендуемые первичные (1 °) и вторичные (2 °) разведения антител²
TMB (3,3 ‘, 5,5’-тетраметилбензидин)
1-Step Ultra TMB	HRP	Наиболее чувствительный хромогенных субстратов, готовый к использованию формат	34028 (2500 лунок)	450 нм (650 нм) Желтый (синий)	~ 2 пг / лунку (20 пг / мл)	1 ° — 1: 1,000 2 ° — 1: 5,000 до 1: 50,000
1-этапный медленный TMB	HRP	Идеальный субстрат для кинетические исследования , готовый к использованию формат	34024 (2500 лунок)	450 нм (652 нм) Желтый (синий)	~ 8 пг / лунку (80 пг / мл)	1 ° — 1: 1,000 2 ° — 1: 5,000 до 1: 50,000
1-Step Turbo TMB	HRP	Быстро определяет активность HRP в течение 5–30 мин, готовый к использованию формат	34022 (2500 лунок)	450 нм (652 нм) Желтый (синий)	~ 7 пг / лунку (70 пг / мл)	1 ° — 1: 1,000 2 ° — 1: 5,000 до 1: 50,000
Комплект субстрата TMB	HRP	Комплект из двух частей	34021 (4000 лунок)	450 нм (652 нм) Желтый (синий)	~ 6 пг / лунку (60 пг / мл)	1 ° — 1: 1,000 2 ° — 1: 5,000 до 1: 50,000
Раствор хромогена TMB	HRP	Готово -использовать формат	00-2023 (500 мл)	450 нм (652 нм) Желтый (синий)
ABTS (2,2′-Азинобис [3-этилбензотиазолин- 6-сульфоновая кислота] -диаммониевая соль
Одностадийный раствор субстрата ABTS	HRP	Готовый к использованию формат	37615 (2000 лунок)	410 нм (650 нм) Зеленый	~ 250 пг / лунку (2.5 нг / мл)	1 ° — 1: 1,000 2 ° — 1: 5,000 до 1: 50,000
OPD (о-фенилендиамин дигидрохлорид)
OPD Substrate	HRP	Pre- утяжеленные таблетки	34006 (таблетки) 34005 (25 г)	490 нм (450 нм) Зеленый (оранжевый)	~ 7 пг / лунку (70 пг / мл)	1 ° — 1: 1,000 2 ° — 1: 5000 до 1: 50 000
PNPP (пара-нитрофенилфосфат)
Одностадийный раствор подложки PNPP	AP	Готовый к использованию формат	37621 (1000 лунки)	405 нм Желтый	~ 10 нг / лунку (100 нг / мл)	1 ° — 1: 500 2 ° — 1: 5,000 до 1: 20,000
PNPP Substrate	AP	Предварительно взвешенные таблетки	37620 (105 таблеток, буферный набор) 34047 (105 таблеток) 34045 (25 г)	405 нм 903 84 Желтый	~ 10 нг / лунку (100 нг / мл)	1 ° — 1: 500 2 ° — 1: 5,000 до 1: 20,000
ONPG (о-нитрофенил-β-D -галактопиранозид)
ONPG Substrate	Gal		34055 (5 г)	410 нм Желтый	~ 10 нг / лунку (100 нг / мл)	1 ° — 1: 500 2 ° — 1: 5,000

¹ См. Дополнительную информацию и рекомендации по анализу, которые определяют количество анализов, в инструкциях к продукту.
² Пределы обнаружения и рекомендуемые разведения антител (на основе исходного раствора 1 мг / мл) были обобщены как средство для начала оптимизации. Для отдельных анализов могут потребоваться условия, выходящие за пределы предложенных диапазонов.

Краткий обзор субстратов для колориметрического ИФА

TMB (3,3 ‘, 5,5’-тетраметилбензидин) растворимые субстраты дают синий цвет при обнаружении HRP. Основные максимумы поглощения продукта реакции составляют 370 нм и 652 нм. Затем цвет меняется на желтый при добавлении серной или фосфорной кислоты (стоп-раствор) с максимальным поглощением при 450 нм.TMB очень чувствителен и может давать значительный фоновый сигнал, если используется слишком много белка или антител. TMB окисляется быстрее, чем другие субстраты HRP, что приводит к более быстрому развитию цвета.

ABTS (2,2′-Азинобис [3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота] -диаммониевая соль) используется для обнаружения HRP и дает водорастворимый зеленый конечный продукт реакции. Зеленый продукт имеет два основных пика поглощения — 410 нм и 650 нм. ABTS менее чувствителен, чем субстраты OPD и TMB для обнаружения HRP.Развитие цвета происходит медленно (примерно 20 минут), что может быть выгодным, если неприемлемый фон является результатом использования подложек OPD или TMB из-за более высокой чувствительности. ABTS доступен в виде таблеток или готовых к применению рецептур.

OPD ( o -фенилендиамин дигидрохлорид) используется для обнаружения HRP и дает водорастворимый продукт реакции желто-оранжевого цвета. Продукт реакции имеет максимум поглощения 492 нм. OPD доступен в форме порошка или таблеток и легко готовится путем растворения в стабильном пероксидном буфере субстрата или в забуференном растворе пероксида водорода.

PNPP ( p -нитрофенилфосфат, двунатриевая соль) — широко используемый субстрат для обнаружения щелочной фосфатазы в приложениях ELISA. PNPP производит водорастворимый продукт реакции желтого цвета, который поглощает свет с длиной волны 405 нм. PNPP доступен в виде кристаллического порошка, таблеток по 5 мг или в виде готовой к применению композиции.

Хемилюминесцентные субстраты для ELISA

Мы предлагаем несколько хемилюминесцентных субстратов для ELISA-анализа с ферментом пероксидазы хрена (HRP) и щелочной фосфатазой (AP):

¹ Общее количество анализов основано на 96-луночном микропланшете.См. Инструкции к продукту для получения дополнительной информации и рекомендаций по анализу, которые определяют количество анализов.
² Пределы обнаружения и рекомендуемые разведения антител (на основе исходного раствора 1 мг / мл) были обобщены как средство для начала оптимизации. Для отдельных анализов могут потребоваться условия, выходящие за пределы предложенных здесь диапазонов.
³ Длина волны пикового излучения дана для справки. Однако для лучшей чувствительности измерьте общий световой поток с помощью люминометра.

Краткий обзор хемилюминесцентных субстратов для ELISA

CSPD и CDP-Star — хемилюминесцентные субстраты 1,2-диоксетановой щелочной фосфатазы, излучающие свет с максимальной интенсивностью на длине волны 475 нм.Эти подложки являются «светящимися» подложками и обеспечивают устойчивый максимальный сигнал с течением времени только через 15–60 минут в зависимости от температуры. Они поставляются в водном буфере в концентрации 5 или 25 мМ (соответственно). Чувствительность можно улучшить, добавив усилители люминесценции Sapphire-II или Emerald-II.

DynaLight Substrate с RapidGlow Enhancer — это готовый к использованию хемилюминесцентный субстрат, который был оптимизирован для получения более быстрых результатов в анализах на основе растворов. Эта подложка классифицируется как подложка со вспышками и светом, которая обеспечивает быстрый и устойчивый максимальный сигнал уже через 2–10 минут.Состав субстрата DynaLight с усилителем RapidGlow Enhancer включает 1,2-диоксетановый хемилюминесцентный субстрат и полимерный усилитель, который обеспечивает сверхчувствительный иммуноанализ по метке щелочной фосфатазы.

Пико-хемилюминесцентный субстрат для ELISA SuperSignal

обеспечивает отличную производительность для большого диапазона количеств целевого белка и легко оптимизируется для обнаружения с большей чувствительностью, чем колориметрические субстраты начального уровня. Быстрая генерация сигнала со стабильностью сигнала 5–30 минут в зависимости от концентрации HRP.

SuperSignal ELISA Femto Maximum Sensitivity Substrate — один из наиболее чувствительных субстратов, доступных для приложений ELISA. При правильной оптимизации нижний предел обнаружения на 1-10 порядков ниже, чем у обычно используемых колориметрических подложек. Однако без надлежащей оптимизации легко перегрузить систему белком и ферментом, что приведет к высокому фону и, возможно, к отрицательным результатам.

Флуоресцентные субстраты для ИФА

Мы предлагаем несколько хемифлуоресцентных субстратов для ELISA с ферментом пероксидазы хрена (HRP):

Обзор флуоресцентных субстратов для ELISA

QuantaBlu Fluorogenic Substrate имеет большой линейный диапазон обнаружения с линейностью нижнего предела для обнаружения HRP. Стабильный флуоресцентный продукт реакции имеет Emax / Amax 420 нм / 325 нм, что позволяет проводить остановленные, непрерывные и кинетические анализы; преимущество перед более чувствительными хемилюминесцентными подложками.

QuantaRed Enhanced Chemifluorescent Substrate — самый чувствительный флуоресцентный субстрат ELISA, доступный для обнаружения HRP. Флуоресцентный продукт реакции (резоруфин) стабилен в течение 4 часов с Emax / Amax 585 нм / 570 нм, когда реакция прекращается. Продукт реакции резоруфина с красным смещением позволяет обнаруживать на длине волны с меньшим вмешательством со стороны автофлуоресценции, которая может возникать в биологических образцах.

Amplex Red Reagent — высокочувствительный и стабильный зонд для H ₂ O ₂.Поскольку H ₂ O ₂ образуется во многих различных ферментативных реакциях, реагент Amplex Red позволяет обнаруживать множество различных ферментов (наборы для анализа Amplex Red).

Amplex UltraRed Reagent улучшает характеристики реагента Amplex Red, предлагая более яркую флуоресценцию и повышенную чувствительность на моль в анализах пероксидазы или связанных с пероксидазой ферментов.

Определение активности щелочной фосфатазы

Презентация на тему: «Определение активности щелочной фосфатазы» — стенограмма презентации:

ins [data-ad-slot = «4502451947»] {display: none! important;}} @media (max-width: 800px) {# place_14> ins: not ([data-ad-slot = «4502451947»]) {display: none! important;}} @media (max-width: 800px) {# place_14 {width: 250px;}} @media (max-width: 500 пикселей) {# place_14 {width: 120px;}} ]]>

1 Определение активности щелочной фосфатазы
Влияние концентрации субстрата и ингибитора фермента на активность фермента Определение активности щелочной фосфатазы

2 Введение: фосфатазы — это ферменты, которые катализируют отщепление фосфорной кислоты от нефосфорных эфиров.В сыворотке оцениваются два общих типа: щелочная фосфатаза (оптимальное значение pH 10); кислотная фосфатаза (оптимальное значение pH 5-6).

3 Щелочная фосфатаза Очищенные формы из разных источников подвергаются 3 видам активности: 1- Гидролитическая RO- P + HOH ROH + h4PO4 2- Фосфотрансфераза RO- P + R`-OH R- OH + R`- O- P 3- Пирофосфатаза: RO — P -O- P -O- R` + HOH RO- P + R`-O- P

4 Источники: Остеобласты в кости Желчные каналы в печени
Эпителий тонкой кишки Проксимальные канальцы в почках.Плацента Кормящая грудь Во всех этих участках, по-видимому, участвует в транспорте фосфата через мембрану. ЩФ нормальной сыворотки в основном происходит из печени (костный изофермент отсутствует).

5 ALP требует ионов металлов: Ингибиторы ALP:
Mg2 +, Zn2 + и в меньшей степени Mn2 + Ингибиторы ALP: Cu2 +, Hg2 +, EDTA (хелатирующий Mg2 +), фосфат и некоторые аминокислоты, например L-фенилаланин

6 Принцип теста: ЩФ из сыворотки крови человека будет гидролизовать искусственный субстрат, динатрийфенилфосфат, до фенола, который будет реагировать с 4-аминоантипирином в щелочных окислителях, давая красно-пурпурный цвет, который можно измерить при 520 нм.

7 Цель теста. В этом эксперименте мы исследуем влияние изменения концентрации субстрата на активность фермента в присутствии и в отсутствие ингибитора (неорганического фосфата), чтобы определить тип ингибирования.

8 В 10 пробирок добавьте следующее (в мл):
ПРОЦЕДУРА: В 10 пробирок добавьте следующее (в мл): Бланк стандартный тестовый тест без ингибитора с ингибитором 1 2 3 4 5 6 7 8 Buffer 1.0 Substrate — 0,25 0,50 0,75 Субстрат + ингибитор Расст. Вода 1,1 0,1 Образец сыворотки Перемешайте и инкубируйте пробирки при 37 ° C ровно 15 мин. NaOH N 0,8 Na HCO N 1,2 4-аминоантипирин Феррицианид калия Перемешайте и сравните пробирки с бланком при 520 нм.

9 Рассчитайте активность ЩФ (v) для каждой концентрации субстрата
, используя следующую формулу: Активность ЩФ (v) = X 10 = мг продуцируемого фенола / 100 мл сыворотки за 15 минут = единиц Кинга Армистронга (КА) / 100 мл О.D-тест — O.D контроль Стандарт O.D — бланк O.D

10 Расчет концентрации субстрата:
Концентрация субстрата = 0,01 M M. Вес субстрата = 254 Концентрация субстрата = 0,01 X 254 = 2,54 [S] = конц. X объем = 2,54 X объем

11 1. Расчет: O.D. B = 0,0 наружный диаметр. С = 0.04
Н.Д. S = [S] = 2,54 X объем Пробирка Дополнительный объем (мл) [S] 1 / [S] ODT T- CV = X 10 S — B 1 / V 1 0,25 0,635 1,575 2 0,50 1,27 0,787 3 0,75 1,905 0,525 4 1,00 2,54 0,394 5 6 7 8 -I + I

12 2. Тип ингибирования: Используя 1 / V и 1 / [S], нарисуйте график Линвивера-Берка для расчета Km и Vmax реакции в присутствии и в отсутствие ингибитора 1 / Vmax (-I) =  Vmax ( -I) = — 1 / Km (-I) =  Km (-I) = 1 / Vmax (+ I) = Vmax (+ I) = — 1 / Km (+ I) = Km (+ I) знак равно

13 Неконкурентный ингибитор
1 / vi Конкурентный ингибитор № — 1 / км Vmax остается таким же в присутствии конкурентного ингибитора Конкурентный ингибитор Кажущийся Km увеличивается в присутствии конкурентного ингибитора Неконкурентный ингибитор 1 / vi 1 / Vmax — 1 / км / [с] без ингибитора + ингибитор 1 / Vmax ‘1 / vi 1 / Vmax — 1 / км / [с] без ингибитора + ингибитор неконкурентоспособный ингибитор

14 3.