30Мар

Почему много лейкоцитов в мазке: Вопрос задает – Василиса, — вопрос-ответ от специалистов клиники «Мать и дитя»

Содержание

Мазок из уретры у мужчин

Взятие мазка на флору из уретры – анализ, который назначается мужчинам при урологическом осмотре. С помощью тонкого зонда врач собирает биологический материал – отделяемое из мочеиспускательного канала. Его помещают на стекло и отправляют в лабораторию, где рассматривают под микроскопом.

 

Что позволяет выявить исследование?

 

Анализ мазка помогает определить, из чего состоит микрофлора уретры, и выявить признаки воспаления или инфекции. От того, насколько остро и долго идет воспалительный процесс, зависит количество клеточных элементов в отделяемом уретры.

 

Что может быть обнаружено в мазке? Прежде всего, элементы, по уровню которых можно судить о здоровье микрофлоры: лейкоциты (в норме до 15 единиц в поле зрения), клетки плоского эпителия – слоя, выстилающего уретру, и палочки. Большое количество лейкоцитов говорит о воспалительном процессе, а отсутствие клеток эпителия – об атрофии эпителиальных клеток. Палочки – единственные микроорганизмы, которые должны присутствовать в мазке. Если же в составе микрофлоры есть и другие микроорганизмы, то это может свидетельствовать о наличии инфекции. Среди патогенов могут быть дрожжевые грибы (признак кандидоза, или молочницы), трихомонады, гонококки – возбудители гонореи.

 

Исследование помогает врачу диагностировать такие заболевания мочеполовой системы, как негонококковые уретрит, гонорея, трихомониаз. Также с помощью этого анализа доктор может на ранних стадиях определить инфекции, передаваемые половым путем, и назначить лечение, предотвращая риск развития осложнений.

 

Кроме того, забор мазка на флору назначается при планировании беременности, подготовке к ЭКО, обследовании на бесплодие.

 

Подготовка к процедуре

 

Уретра – орган, который промывается мочой. Обычно эпителий, лейкоциты, микроорганизмы и патогены вымываются с поверхности уретры при мочеиспускании, и через несколько часов их количество восстанавливается. Поэтому, чтобы результаты обследования были максимально точными, пациенту рекомендуется:

  • не мочиться 3–4 часа перед забором мазка;
  • не принимать антибактериальные препараты и антисептические средства перед походом к врачу.

У нас работают врачи со стажем от 15 лет, кандидаты и доктора наук. Диагностические исследования проводятся на аппаратах экспертного класса от международных брендов (Sonoscape, Samsung, Hitachi). Также выполняем срочные исследования, возможен выезд врача на дом. На базе клиники вы пройдете комплексное обследование за 1 день.

Много лейкоцитов в мазке — Вопрос гинекологу

Если вы не нашли нужной информации среди ответов на этот вопрос, или же ваша проблема немного отличается от представленной, попробуйте задать дополнительный вопрос врачу на этой же странице, если он будет по теме основного вопроса. Вы также можете задать новый вопрос, и через некоторое время наши врачи на него ответят. Это бесплатно. Также можете поискать нужную информацию в похожих вопросах на этой странице или через страницу поиска по сайту. Мы будем очень благодарны, если Вы порекомендуете нас своим друзьям в социальных сетях.

Медпортал 03online.com осуществляет медконсультации в режиме переписки с врачами на сайте. Здесь вы получаете ответы от реальных практикующих специалистов в своей области. В настоящий момент на сайте можно получить консультацию по 74 направлениям: специалиста COVID-19, аллерголога, анестезиолога-реаниматолога, венеролога, гастроэнтеролога, гематолога, генетика, гепатолога, гериатра, гинеколога, гинеколога-эндокринолога, гомеопата, дерматолога, детского гастроэнтеролога, детского гинеколога, детского дерматолога, детского инфекциониста, детского кардиолога, детского лора, детского невролога, детского нефролога, детского онколога, детского офтальмолога, детского психолога, детского пульмонолога, детского ревматолога, детского уролога, детского хирурга, детского эндокринолога, дефектолога, диетолога, иммунолога, инфекциониста, кардиолога, клинического психолога, косметолога, липидолога, логопеда, лора, маммолога, медицинского юриста, нарколога, невропатолога, нейрохирурга, неонатолога, нефролога, нутрициолога, онколога, онкоуролога, ортопеда-травматолога, офтальмолога, паразитолога, педиатра, пластического хирурга, подолога, проктолога, психиатра, психолога, пульмонолога, ревматолога, рентгенолога, репродуктолога, сексолога-андролога, стоматолога, трихолога, уролога, фармацевта, физиотерапевта, фитотерапевта, флеболога, фтизиатра, хирурга, эндокринолога.

Мы отвечаем на 96.87% вопросов.

Оставайтесь с нами и будьте здоровы!

Методы обследования при воспалительных заболеваниях половых органов

Почему результаты мазков не совпадают у парня и девушки, живущих вместе половой жизнью? Почему в одной лаборатории выявили в мазке хламидии, а в другой ничего не нашли? Почему в мазке много лейкоцитов, а никаких инфекций не находят? Какой метод обследования на ИППП самый лучший?

Эти и многие другие вопросы часто возникают у людей, которые приходят со своими проблемами обследоваться к урологу, гинекологу, дерматологу. К сожалению, у врача не всегда хватает времени и желания подробно ответить на них. Надеюсь, следующие рекомендации помогут вам разобраться в данной проблеме.

Перед любым обследованием, прежде всего, необходимо решить: для чего вам обследоваться, с какой целью, что будет, если выявится заболевание? Всех пациентов, обращающихся к врачу по поводу мочеполовых инфекций можно разделить на несколько групп.

  1. Пациенты, которых ничего не беспокоит, обследуются они на всякий случай, по рекомендации товарища или интернета. Одни из них имеют постоянного полового партнера, другие – имеют секс с разными партнерами без презерватива.
  2. Пациенты, которые ранее никогда не болели, но после полового акта через несколько дней почувствовали какие-то неприятные ощущения в половых органах.
  3. Пациенты, которые периодически и неоднократно обследуются и проходят лечение по поводу каких-либо урогенитальных инфекций, причем презерватива не признают.
  4. Пациенты, которые страдают хроническими воспалительными заболеваниями (простатитом, аднекситом, бесплодием), часто обращаются к врачам, а лечение их неэффективное. Обычно такие пациенты давно избегают случайных половых связей и имеют одного полового партнера или вообще отказались от секса.

Меня могут осудить многие больные и врачи, но я считаю, что всех этих разных пациентов необходимо по-разному обследовать и лечить. Какой смысл проводить дорогое обследование углубленными лабораторными методами, а затем назначать полное и эффективное лечение хламидиоза, трихомониаза больному, который никогда не пользуется презервативом и половину своей жизни проводит в клубах и на дискотеках в надежде найти легкий и быстрый секс? В этом случае достаточно простого мазка из уретры на микрофлору, если он ненормальный – назначить короткий курс недорогих антибиотиков по рекомендации всеми уважаемой ВОЗ (Всемирной организации здравоохранения). Все врачи знают эти рекомендации. Во многих случаях таким пациентам даже контрольные мазки не нужны. Где гарантия, что во время лечения он не подхватит еще какую-нибудь заразу?

Нет необходимости в углубленном обследовании и молодых людей, которые недавно начали половую жизнь, и менять партнера не собираются. В таких случаях, если появились признаки уретрита, ИППП, выявить его будет не сложно, так как это свежая инфекция. Здесь необходимо сдать мазок на микрофлору и сделать ПЦР на основные возбудители: хламидии, гонококки, трихомонады, герпес, микоплазму гениталиум. Лечение назначается полным курсом обоим партнерам с обязательным контролем излеченности.

Сложнее всего приходится с обследованием и лечением 4 группы больных. Многие из них страдают месяцами и годами, ходят от одного врача к другому. Каждый раз им назначают разные антибиотики, после которых бывает временное улучшение. В этом случае без углубленного обследования и правильного длительного лечения хорошего результата не будет. Недостаточно сделать только мазок из уретры и бактериологический посев. Обследование должно включать в себя:

  1. Мазок на микрофлору;
  2. Анализ секрета предстательной железы;
  3. Обследование и мазка и секрета на урогенитальные инфекции обязательно несколькими методами одновременно: цитологическим, РИФ, ПЦР, культуральным. Если обследоваться одним методом, результаты часто будут отрицательными, так как при хроническом заболевании возбудителей в мазках очень мало, и выявить их сложно. Если имеются осложнения простатита (бесплодие, артриты), рекомендуется обследовать еще и кровь методом ИФА.
  4. Спермограмма;
  5. УЗИ предстательной железы, семенных пузырьков и яичек;
  6. Обследование кишечника на дисбактериоз;
  7. Иммунограмма;
  8. Обязательное полное обследование партнера у гинеколога теми же методами.

Только по результатам такого обследования врачом может быть разработано эффективное лечение.

Почему же иногда результаты мазков на ИППП у партнеров не совпадают? Во-первых, потому, что ни один метод не имеет 100% достоверности. Все лаборатории закупают реактивы для исследований в России, а качество их может быть разное. Во-вторых, я уже писал, что при хроническом заболевании возбудителей очень мало, и не всеми методами их можно выявить. В-третьих, анализы могут быть взяты не правильно (читай заметку «Как правильно сдать мазки»).

Конкретный случай. Молодой мужчина никаких жалоб не имел. Более месяца встречался с девушкой. Пришел провериться на ИППП. По результатам мазков: лейкоцитов большое количество, выявлены хламидии методом РИФ. Пациент не поверил в результаты и пошел провериться в другую лабораторию. Там он обследовался только на хламидии, которых не нашли. Он вернулся назад и начал скандалить и писать жалобы. В такой ситуации претензии предъявлять не к кому. Результаты обследования в первой лаборатории оказались верными. Не бывает воспаления в уретре или уретрита без инфекции. Во второй лаборатории ее просто не обнаружили. В случаях, когда жалоб нет, воспаления нет, лейкоциты в мазке в норме, но выявляется возбудитель, рекомендуется диагноз подтверждать двумя разными методами, как принято в хороших клиниках.

Разберем достоинства и недостатки всех лабораторных методов исследования на ИППП. Данные представлены в таблице.

Метод

Достоинства

Недостатки

Для выявления каких инфекций применяется

Микроскопический

Простое и быстрое исследование. Определяет воспаление, наличие бактерий

Не выявляет почти все возбудители ИППП

Острая гонорея

Нативная микроскопия

Исследуется секрет простаты на лейкоциты, лецитиновые зерна и др., мазок из уретры

 

Не позволяет выявить почти все возбудители ИППП и атипичные трихомонады. Требует немедленного исследования после забора мазков

Нативный мазок из уретры используется для выявления типичных подвижных трихомонад (редко)

Цитологический

Позволяет дифференцировать клетки крови, эпителия

Требует сложной окраски, квалификации врача-лаборанта

Атипичные трихомонады, гонококки

Бактериологи-ческий

посев

Выявляет бактерии, чувствительно-сть их к антибиотикам

Проводится в бак. лаборато-рии, не выявляет возбудителей ИППП (хламидии, герпес, трихомонады)

Бактериальная микрофлора при циститах, пиелонефритах

РИФ

Проще, дешевле и быстрее ПЦР и ИФА

Важна квалификация врача-лаборанта. Менее точен, чем ПЦР

Хламидии, герпес, уреаплазмы, микоплазмы

ИФА

Выявляет антитела к инфекциям при поражении внутренних органов, осложнениях

Требует специального анализатора, чувствительно-сть невысокая

Антитела к хламидиям, ВПГ, ЦМВ, ЭБВ

ПЦР

Считается самым современным, чаще других используется. Позволяет выявлять многие виды вирусов

Требует сложного оборудования, зависит от качества реактивов, от правильности забора мазков и их хранения. В большинстве случаев не определяет трихомонады

Хламидии, вирусы герпеса разных типов (1,2, ЦМВ, ЭБВ), вирусы гепатитов

Культуральный

Культура клеток МсСоу выявляет все формы хламидийной, трихомонадной, вирусной инфекции

Требует дорогого оборудования. Применяется только в одной лаборатории в РБ, требует высокой квалификации врачей-микробиологов

Все виды урогенитальной инфекции

 

А.Гаврусев, кмн, асс. кафедры урологии БГМУ

Повышенные лейкоциты в мазке

В женских консультациях часто наблюдается такое явление, как сокрытие важной информации о состоянии здоровья пациенток от них самих. Почему врач не объясняет, насколько серьезной является проблема, каковы ее причины, сколько есть вариантов лечения? Почему пациентка должна слепо верить в рекомендации врача-гинеколога? Если информацию не дает специалист, то имеет смысл разобраться самой что и как работает, почему происходят сбои в системе, как с ними бороться.

Важно! Доказано, что чем лучше больной осведомлен о своих проблемах, тем быстрее проходит лечение. Это связано не только с физическими изменениями, но и внутренним настроем на борьбу с болезнью.

Одним из показателей здоровья женщины является наличие в кровяном русле белых клеток крови – лейкоцитов. Они ответственны за общий иммунитет организма, что позволяет безошибочно определить наличие инфекционных агентов. Деятельность бактерий и вирусов подрывает защитные силы, выделяя продукты своей жизнедеятельности. При этом пониженный иммунитет страдает еще больше.

В гинекологии количество лейкоцитов определяют при помощи анализа мазка из цервикально канала. Если они в норме, то переживать не о чем. Но часто случается, что женщина не чувствует никаких изменений в здоровье, а лейкоциты повышаются.

Что такое лейкоциты и как они работают?

На фото – лейкоциты

Лейкоциты – это общее название для группы клеток, которые отслеживают бактерии и поглощают их. Этот процесс называется фагоцитоз. При этом белые клетки погибают. Скопления гноя на определенном участке тела – это погибшие лейкоциты.

Существует несколько видов лейкоцитов:

  • нейтрофилы;
  • базофилы;
  • эозинофилы;
  • лимфоциты;
  • моноциты.

Отличаются они размерами, формой ядра и функциями, которые выполняют в организме.

Алгоритм действия лейкоцита следующий: при попадании инфекции в организм, лейкоциты обнаруживают ее и поглощают. При переваривании бактерий выделяются вещества, которые образуют очаг воспаления. При этом возникает покраснение, повышается температура, появляется припухлость или отек.

Если клетки в состоянии уничтожить всю инфекцию, то человек выздоравливает самостоятельно. Если лейкоциты слабые, их мало или они малоподвижные из-за низкого иммунитета, то появляется абсцесс.

Абсцесс – это местная воспалительная реакция организма на чужеродные микроорганизмы. Организм отграничивает больное место с помощью капсулы. Основное проявление абсцесса – образование гнойной полости.

Для организма человека лучше, когда при наличии инфекции возникает воспаление. Останется выяснить, какая именно бактерия провоцирует процесс и назначить лечение. Отсутствие реакции означает нерабочую иммунную систему и серьезные нарушения в работе организма. Чаще всего в анализах обнаруживается пониженное число белых клеток.

Хроническое воспаление протекает длительно. Это означает, что сил для борьбы с инфекцией не хватает и требуется помощь в виде лекарственных препаратов, которые подавляют инфекцию и стимулируют иммунную систему. Большое значение имеет правильное питание и употребление витаминов – натуральных (овощи, фрукты) и комплексных аптечных средств.

Свойство лейкоцитов проникать через стенки сосудов и обратно в кровяное русло дает повод думать, что наличие очага воспаления на любом участке тела может привести к увеличению общего числа лейкоцитов в организме. При этом они могут оказаться и в мазке из шейки матки.

Нейтрофилы и их функции

Основным показателем наличия инфекции является увеличение количества нейтрофильных лейкоцитов. Их функция – борьба с бактериями, которые чаще всего поражают мочеполовую систему. В норме количество нейтрофилов составляет до 75% от общего количества лейкоцитов. Если этот показатель повышен, то имеет место воспаление. При гинекологическом осмотре слизистая влагалища может быть гиперемирована, присутствуют выделения из цервикального канала.

Исследование мазка на патогенную флору проводится параллельно с исследованием крови. Чтобы определиться с лечением, необходимо также обследовать партнера женщины. Обнаруженные инфекции у женщины в большинстве случаев присутствуют в уретре мужчины.

Количество нейтрофилов повышается, если:

  • имеются острые инфекционные процессы;
  • интоксикация организма;
  • гнойные процессы;
  • злокачественные опухоли;
  • большая кровопотеря.

Вместе с анализами на лейкоциты требуется провести ряд диагностических мероприятий:

  • кольпоскопия;
  • онкоцитология;
  • пробы эпителия;
  • УЗИ органов малого таза на эхогенность;
  • биопсия;
  • исследование мазка на наличие эритроцитов.

Главное место в диагностике занимает расшифровка результатов анализов.

Инфекции мочеполовой системы

Плохие анализы мазка из шейки матки свидетельствуют о попадании и размножении инфекции в половых путях. К особо опасным относятся:

  • хламидии;
  • гонококки;
  • трихомонады;
  • ВПЧ;
  • гарднереллы;
  • уреаплазмы;
  • микоплазмы.

Это далеко не весь список. Осложняют течение женских заболеваний инфекции, находящиеся в мочевом пузыре, мочеиспускательном канале, почках, кишечнике. Причина повышения лейкоцитов в мазке может находиться вне области исследования гинеколога.

Повышенные лейкоциты в мазке при эрозии шейки матки

Повышенные лейкоциты при эрозии шейки матки говорят о том, что в поврежденном эпителии размножается инфекция. При эрозии многослойный эпителий замещается на однослойный, что способствует проникновению микробов в слизистую оболочку. В норме белых кровяных телец  в шейке матки должно быть не более 20 единиц. Это верхний предел, после которого врач ставит диагноз воспаление и назначает анализ на конкретную инфекцию. 35 лейкоцитов – это уже вялотекущее воспаление или его начальная стадия.

Лейкоциты в мазке из шейки матки могут повышаться при беременности. Это связано с общим снижением иммунитета. Поэтому микробы, грибки, которые находились в организме до беременности, в этот период активизируются. Количество нейтрофилов  в шейке матки повышается при молочнице, которая очень часто бывает у женщин на поздних сроках. Иногда их количество достигает 60 единиц.

Эрозия при беременности является дополнительным фактором, который привлекает иммунные клетки в область половых органов. Лейкоциты защищают поврежденную слизистую шейки матки от воздействия микробов.

70 – 80 лейкоцитов в мазке говорит о том, что имеются инфекции в почках и мочевыводящих путях. Следует пройти обследование с помощью УЗИ и сдать анализы мочи. Если при этом повышается температура и мочеиспускание происходит болезненно, то лечить надо не только эрозию, но и почки.

100 – 150 лейкоцитов в мазке при эрозии – это тяжелая форма инфекции с образованием гноя. Процесс является очень опасным, потому как через поврежденный эпителий инфекция проникает в кровь. Выбор препарата в данном случае – антибиотик. Параллельно лечению следует контролировать уровень лейкоцитов, поэтому врач назначает повторные мазки. В острой стадии заболевания могут быть увеличены паховые лимфатические узлы.

При беременности часто бывает, что маточный лейкоцитоз повышается до критических показателей – 200 единиц. При этом никаких микробов не обнаруживается, а выделения – сплошь и рядом. Иногда повышается тонус матки. Это объясняется реакцией организма женщины на чужеродный белок. Особенно это выражено при различии резус фактора матери и плода. По отзывам – обычно все проходит само собой после родов. Уровень гормонов также оказывает влияние на количество белых кровяных телец.

Лейкоциты понижены при эрозии шейки матки

Низкое содержание нейтрофилов во влагалище и шейке матки может означать плохую сопротивляемость инфекции. Такое состояние наблюдается при:

  • эндокринных нарушениях;
  • недостатке питательных веществ;
  • при онкологии;
  • нарушения в работе костного мозга.

Понижение числа нейтрофилов  – опасное явление, которое требует дополнительного обследования крови. Если в крови также присутствует мало лейкоцитов, то стоит провести полное обследование.

Эрозия матки в данном случае может стать входными воротами для любой инфекции, поэтому необходимо соблюдать правила личной гигиены, упорядочить половую жизнь, так как при большом количестве сексуальных партнеров риск попадания микробов увеличивается.

Как понизить количество лейкоцитов в мазке?

Снижать количество белых кровяных клеток  требуется в том случае, когда есть установленная инфекция – бактериальная, вирусная или грибковая. Препаратами выбора против бактерий обычно бывают антибиотики. После курса лечения проводится повторный анализ. Через 2 – 3 недели еще один.

Противовирусная терапия заключается в применении средств, укрепляющих иммунитет. Кандидоз лечится противогрибковыми препаратами.

С осторожностью следует относиться к лекарствам во время беременности, потому что в данный период повышенное содержание лейкоцитов может не иметь отношения к инфекции.

Видео из бесплатных курсов представленных на сайте: Лейкоциты мазке
Видео: Что нашли у меня в мазках
Видео: норма лейкоцитов в мазках

Данная статья размещена исключительно в образовательных целях и не является научным материалом или профессиональным медицинским советом. Всегда доверяйте в первую очередь своему лечащему врачу! У всех методов лечения и препаратов приведенных в статье могут быть противопоказания. Необходима консультация специалиста

Лейкоциты в мазке на флору у женщин: что это значит, норма, причины повышенного количества

Лейкоциты в мазке у женщин определяются всегда. Диагностическое значение имеет не само наличие этих клеток, а их количество. Причины повышения лейкоцитов в мазке определяются с целью выбора эффективной схемы лечения.

Лейкоциты — это клетки (белые клетки крови). В норме они обнаруживаются в любых биологических тканях и жидкостях человека. Лейкоциты призваны защищать от инфекции и удалять продукты разрушения ткани. Поэтому при воспалении традиционно происходит увеличение показателя лейкоцитов в поле зрения (п/зр).

Норма лейкоцитов у женщин во влагалище оценивается в 15 единиц (в идеале, не более 10). Если анализ показывает в поле зрения от 0 до 15 единиц лейкоцитов, то лечение не требуется. Норма лейкоцитов в шейке матки имеет другие показатели. Тут клеток должно быть в поле зрения не более 30 единиц. В уретре норма лейкоцитов 10 (в идеале от 0 до 5). Количество белых клеток оценивается для каждой точки взятия мазка отдельно. В гинекологии мазок на флору берут у женщин при подготовке к любым инструментальным вмешательствам, при проведении диспансеризации, во время беременности и при наличии любых жалоб на интимное здоровье.

Мазок на флору

Гинекологический мазок на флору у женщин в течение жизни сдается не один раз. Обычно анализ берут при каждом гинекологическом осмотре. Исследование флоры показано перед и после инструментальных вмешательств, при планировании беременности и постановке на учет, а также несколько раз в течение беременности. Количество лейкоцитов в мазке важно определять при жалобах женщины на необычные и обильные выделения, неприятный запах в интимной области, болях в малом тазу.

Мазок на флору для определения уровня лейкоцитов назначают каждой женщине, которая пришла на прием к гинекологу. Простой анализ является золотым стандартом профилактических осмотров. Результат исследования позволяет судить о состоянии интимной микрофлоры у женщины. При повышении лейкоцитов в мазке врач назначает дополнительные исследования для определения причины и выбора эффективной тактики лечения.

Мазок на флору — это самый простой и достаточно информативный анализ, который сообщит врачу о состоянии интимного здоровья женщины. При исследовании биоматериала определяют не только количество лейкоцитов. Также учитывают такие показатели, как эпителий, слизь, бактерии, палочки, кокки, различные клетки, дрожжи и прочие. Расшифровать мазок на флору по одним только лейкоцитам невозможно. Для полной оценки состояния здоровья женщины учитывают все показатели. Например, при незначительном повышении лейкоцитов дополнительные включения могут отсутствовать. Так же, как при норме лейкоцитов у женщины в мазке могут присутствовать дополнительные клетки, являющиеся признаком воспалительного процесса.

Подготовка к сдаче мазка на флору

Анализ на флору сдают в любой день, кроме менструации. Лучше проводить обследование в первой половине менструального цикла, незадолго до овуляции. При необходимости анализ выполняют во второй половине цикла, но не позднее, чем за 3 дня до менструации. Мазок не берут непосредственно перед менструацией и во время кровотечения, поскольку его результат будет не информативен.

Перед анализом не требуется серьезной подготовки. За 3 дня до исследования необходимо отказаться от использования любых лекарственных средств для вагинального использования. Необходимо исключить половые контакты. Непосредственно в день сдачи мазка рекомендуется провести гигиенические процедуры, и не мочиться за 2 часа до забора материала.

Как берут мазок для определения лейкоцитов

Лейкоциты в мазке у женщин определяют путем исследования биоматериала, который берут сразу из нескольких точек. Состояние микрофлоры определяется в нескольких местах с целью получения более информативных данных.

  • Мазок из уретры. В гинекологии исследование обозначается символом «U», которым подписывают предметное стекло. Биологический материал берут из мочеиспускательного канала, что может доставить женщине небольшой дискомфорт. Воздержаться от мочеиспускания следует за 2 часа до анализа, чтобы не смыть лейкоциты и другие клетки, которые могут быть выявлены в материале.
  • Мазок из влагалища. Символом «V» обозначают предметное стекло, на которое наносят материал из влагалища. Мазок не доставляет никакого дискомфорта женщине. Материал берут со стенок влагалища.
  • Мазок из цервикального канала. Биологический материал из шейки матки наносят на предметное стекло с символом «C». Забор материала выполняется путем снятия отделяемого из шейки матки. Для этого используют гинекологический расширитель. Взятие материала не доставляет дискомфорт женщине.

Мазок на флору берется с помощью стерильного тампона, шпателя или специального инструмента — ложки Фолькмана. Биоматериал из каждого участка наносится на отдельное предметное стекло, чтобы количество лейкоцитов в поле зрения определить индивидуально. Например, во влагалище лейкоциты 30, а в цервикальном канале 5. Это говорит о том, что воспалительный процесс присутствует во влагалище (вагинит), а воспаление цервикального канала (цервицит) отсутствует. Результаты мазка UVC могут самыми разными. Врачу важно определить, в какой именно зоне мочеполовой системы повышены лейкоциты.

Если в мазке есть лейкоциты — что это значит

Мочеполовая система женщины содержит более 40 видов различных бактерий. Основу всех микроорганизмов составляют молочнокислые бактерии. Их количество варьируется на уровне 95-98% от всей микрофлоры. Молочнокислые бактерии поддерживают кислую среду во влагалище, благодаря чему предотвращают размножение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Так работает местный иммунитет.

Лейкоциты в мазке у женщин присутствуют всегда. Уровень этих клеток в поле зрения позволяет оценить состояние интимной микрофлоры. Если лейкоциты в норме, то можно говорить, что воспаления нет. При увеличении показателя лейкоцитов в мазке врач заподозрит воспаление. При этом важное значение имеет, где лейкоциты выше нормы.

Лейкоциты в мазке могут увеличиться при определенных состояниях организма, не связанных с воспалительными заболеваниями. К ним относится прием некоторых лекарств, беременность, климакс. Если в мазке есть лейкоциты, то это не повод для паники. Лечение назначают только если норма лейкоцитов сильно превышена и в мазке присутствуют дополнительные микроорганизмы.

Норма лейкоцитов в мазке

Норма лейкоцитов в мазке у женщин определяется путем изучения полученного биоматериала при многократном увеличении под микроскопом. Анализ изучают в первые два часа после сдачи, поскольку позднее результат может оказаться неинформативным. При рассмотрении предметного стекла лаборант определяет количество клеток в поле зрения и предоставляет результат врачу, обозначая «Le в п/зр».

Таблица нормы лейкоцитов с учетом зоны взятия мазка

Лейкоциты

Результат, в п/зр

Le «V»                                 

0-10

Le  «U»                               

0-5

Le  «C»                                 

0-30

В некоторых лабораториях могут выдать результат мазка на флору с обобщенными показателями. В этом случае не будет указано, откуда взят биологический материал. Для такого результата норма лейкоцитов оценивается в 0-10 единиц в п/зр.

Каким должен быть результат мазка на флору?

Степени чистоты влагалища у женщин определяют по количеству лейкоцитов и дополнительных включений. Если лейкоцитов менее 10 единиц, то мазок считается хорошим. Когда лейкоциты от 15 до 30, то речь идет о воспалительном процессе. Если показатель более 30, то у женщины острый инфекционный процесс. Степень чистоты влагалища обязательно проверяют при подготовке к любому вмешательству. 1-2 степень чистоты является вариантом нормы и не требует лечения. Если у женщины 3-4 степень чистоты влагалища, то требуется лечение.

Степени чистоты влагалища:

  • Первая степень. Определяется у здоровых женщин, без признаков воспалительного процесса мочеполовой системы. Микрофлору здоровых женщин более, чем на 95% составляют лактобациллы, а лейкоцитов не больше 10 в п/зр.
  • Вторая степень. Определяется у здоровых женщин с кислой средой. Лейкоцитов при второй степени чистоты влагалища не более 15, могут присутствовать в небольшом количестве условно-патогенные микроорганизмы. При этом основа микрофлоры – кисломолочные бактерии.
  • Третья степень. В мазке присутствуют условно-патогенные микроорганизмы, определяется эпителий и лейкоциты 20-30 в п/зр. Количество палочек Дедерлейна снижено. Среда щелочная.
  • Четвертая степень. Лактобациллы в мазке почти отсутствуют. Лейкоцитов много, присутствуют явные признаки воспалительного процесса. При четвертой степени чистоты влагалища лейкоциты 40, 50 и даже больше. Чем более выражено воспаление, тем выше показатель лейкоцитов.

Чем опасны

Лейкоциты в мазке сами по себе не опасны для женщины. Однако высокий уровень лейкоцитов говорит о воспалении, которое опасно для женщины. Отсутствие лечения при воспалении влагалища, уретры и цервикального канала приводит к разного рода осложнениям. Со временем воспалительный процесс распространяется на соседние органы и системы.

Как снизить лейкоциты в мазке

Лейкоциты в мазке необходимо снижать, если их количество превышает норму. Значимым диагностическим моментом является установление причин воспаления. Для этого проводят бактериологическое исследование, ПЦР-трест, посев и другие анализы.

Причины повышенных лейкоцитов в мазке – это, как правило, воспалительный процесс и патологии шейки-матки. При изменении слизистой шейки матки назначают расширенную кольпоскопию и УЗИ.

Схему лечения при повышенных лейкоцитах выбирают на основании результатов дополнительного исследования. Стоит отметить, что для каждого клинического случая методика лечения индивидуальна. То, что помогло одной женщине при повышении лейкоцитов, будет неэффективным для другой пациентки. Поэтому не стоит искать методы лечения при высоких лейкоцитах по отзывам и пытаться справиться с проблемой самостоятельно. Эффективное лечение может назначить только врач. При выявлении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов проводят тест на чувствительность. Он показывает, какие препараты будут эффективны в отношении определенных бактерий. Лекарства при высоких лейкоцитах в мазке назначают для внутреннего и местного применения. Обычно используют антибиотики широкого спектра действия, противопротозойные средства, иммуномодуляторы.

Для предупреждения воспалительного процесса рекомендуется:

  • ответственно подходить к выбору полового партнера;
  • пользоваться барьерными контрацептивами;
  • регулярно обследоваться у гинеколога;
  • сдавать мазок на флору не реже одного раза в год, даже при отсутствии жалоб;
  • вести здоровый образ жизни, поддерживать активность и правильно питаться.

Лейкоциты в мазке при беременности

Во время беременности у женщины сильно меняется гормональный фон, что может повлиять на результаты мазка. У большинства беременных женщин повышены лейкоциты в мазке. Во влагалище может быть до 20 лейкоцитов в поле зрения, что не считается патологией. Если не обнаруживаются бактерии, палочки и другие признаки воспаления, то лечение не проводят.

Подобная практика не относится к мазку из уретры. Если при беременности в уретре лейкоциты 10 и больше, то необходимо определить причину воспаления. Беременные женщины нередко сталкиваются с циститом и уретритом, при которых лейкоциты повышаются.

В течение беременности женщина не один раз сдает мазок на флору. Норма лейкоцитов при беременности – до 20 в поле зрения. Если результат вписывается в норму, но находится на уровне верхней границы, то рекомендуется провести повторное исследование через несколько дней.

Женщинам во время беременности при повышении лейкоцитов в мазке до 25 единиц уже рекомендуют лечение. Препараты выбираются с учетом срока беременности и результата анализа. Как правило, до 12 недель не рекомендуется прием сильнодействующих лекарств, поскольку в этот период происходит формирование плода. Со второго триместра беременности назначают этиотропное лечение.

Во время беременности состоянию интимной микрофлоры уделяют особое внимание. Даже незначительный воспалительный процесс может оказаться опасным для женщины и ее будущего малыша. При отсутствии лечения и высоком уровне лейкоцитов есть риск развития ВУИ (внутриутробной инфекции).

Исследование мазка – eClinpath

Исследование мазка крови является составной частью гемограммы. Анализ мазка крови позволяет количественно определить различные типы лейкоцитов (так называемый дифференциальный подсчет), оценить количество тромбоцитов и обнаружить морфологические аномалии, которые могут быть индикаторами патофизиологических процессов. В некоторых случаях диагноз может быть очевиден. Для получения полной ценности от исследования мазка крови требуется хорошо подготовленный, хорошо окрашенный мазок крови и некоторые базовые навыки в методах оценки.Для получения дополнительной информации о том, как сделать хороший мазок крови, пожалуйста, обратитесь к соответствующим ссылкам ниже. Хотя некоторые автоматические гематологические анализаторы обеспечивают дифференциальный подсчет как часть своих выходных данных, это не полностью заменяет микроскопическое исследование, проводимое опытным наблюдателем.

Компоненты мазка крови

Качественный мазок крови состоит из нескольких областей: оперенного края, монослоя, тела и основания мазка. Все части мазка должны быть исследованы, однако монослой представляет собой область, где клетки исследуются очень подробно и проводится дифференциальный подсчет клеток.Обратите внимание, что у животного с тяжелой лейкопенией вы не найдете достаточного количества лейкоцитов в монослое для проведения дифференциального подсчета лейкоцитов на 100 клеток, и вам, возможно, придется использовать весь мазок, и вы не сможете подсчитать 100 лейкоцитов.

Оперенный край мазка крови

Кромка с оперением

Это конец мазка крови, он должен быть полностью представлен и полностью окрашен (у «слишком длинного» мазка не будет размытых краев). Это должна быть первая часть мазка, которую исследуют при малом увеличении для выявления скоплений тромбоцитов и микрофилярий, но ее следует избегать при оценке клеток крови при более высоком увеличении.Аномально большие клетки, имеющие потенциальное диагностическое значение, также имеют тенденцию располагаться в конце мазка.

  • Тромбоциты частично активированы и агрегированы во многих образцах крови, особенно в крови кошек. Слипание тромбоцитов, если оно не обнаружено, может привести к недооценке количества тромбоцитов, поскольку при исследовании с большим увеличением может быть обнаружено несколько отдельных тромбоцитов.
  • Лейкоциты в оперенном крае чрезмерно распространены и кажутся больше, чем должны.Высокий процент клеток по краю пера µ разрушен (размазан).
  • Эритроциты здесь полностью уплощены и лишены центральной бледности, имитируя сфероциты. Аномальные формы трудно распознать в этой области.

Пример области монослоя на мазке крови

Однослойный

Обычно это расстояние в одно десятикратное поле за размытым краем, и это оптимальная область для исследования клеток, поскольку она быстро высыхает, а клетки хорошо распределяются (не перекрываются) и не разрушаются.Эритроциты разделены или едва соприкасаются, с небольшим перекрытием. У любых видов, кроме лошади, руло, состоящие из стопок из 3 и более эритроцитов, в этой области представляют собой аномалии, свидетельствующие о повышенной концентрации глобулинов, что часто встречается у животных с воспалительными заболеваниями (а также наблюдается у животных с новообразованиями В-клеток). , которые могут продуцировать аномальные иммуноглобулины). Лейкоциты также должны быть равномерно распределены в этом отделе.

  • Обратите внимание, что у очень анемичных животных может быть слишком мало эритроцитов, чтобы иметь хороший монослой этих клеток.Также у животных с полицитемией (высокий уровень эритроцитов) может быть трудно найти область, где эритроциты не соприкасаются или не перекрываются. В этих случаях полезно следовать приведенному выше руководству (1 или 2 поля назад от размытого края), чтобы найти нужную область для исследования.

Область мазка слишком толстая для правильной оценки

Тело и основа мазка

Эти области обычно слишком толстые для оценки ячеек при более высоком увеличении. Толстый участок мазка высыхает слишком медленно для распространения лейкоцитов.Лейкоциты здесь сморщены и кажутся намного меньше, чем в быстро высохших областях — отдельные лейкоциты могут быть трудно идентифицированы в этой области, а изменения эритроцитов трудно оценить. Эту область мазка обычно сканируют при малом увеличении для выявления небольшого количества потенциально диагностических клеток (например, бластов при лейкемии), инфекционных агентов (например, трипаносом, микрофилярий) и определенных изменений эритроцитов (гипохромазия, агглютинаты).

Исследование мазка крови

Систематический подход важен для того, чтобы вся доступная информация была получена из каждого исследованного мазка.Это рекомендуемый нами протокол для исследования мазка крови: сканируйте мазок при малом увеличении, затем используйте большее увеличение для проведения дифференциального подсчета лейкоцитов, подсчета ядерных эритроцитов, оценки количества тромбоцитов и оценки эритроцитов (эритроцитов), лейкоцитов. (WBC) и морфологические особенности тромбоцитов.

Вид скошенной кромки с малым увеличением (100x). Такое плохое распределение лейкоцитов отрицательно влияет на точность дифференциального подсчета

Просканируйте мазок при малом увеличении (объектив 10х).

Количество лейкоцитов можно оценить (при наличии опыта) при сканировании мазка (расплывчатый край через монослой через тело мазка).

  • Проверьте опертый край:  Ищите скопления тромбоцитов, крупные клетки или инфекционные агенты.
  • Сканирование остальной части мазка (включая тело и основу; см. выше): Цели сканирования:
    • Найдите оптимальную область для исследования при большем увеличении, чтобы провести дифференциальный подсчет лейкоцитов и изучить морфологические особенности клеток крови.Эта оптимальная область представляет собой монослой (обычно; см. выше), где клетки равномерно распределены и хорошо распределены.
    • Для проверки того, что лейкоциты равномерно распределены по всему мазку и не слишком сконцентрированы на размытом крае. В некоторых некачественно сделанных мазках большая часть лейкоцитов тянутся к концу мазка (обычно при слишком медленном взятии мазка). Если это так, приготовьте еще один мазок и быстрее перемещайте предметное стекло, что поможет более равномерно распределить лейкоциты.

Как только оптимальная область будет найдена, переключитесь на большее увеличение (50-100-кратное увеличение)

Модель дифференциального счета

  • Выполните дифференциальный подсчет лейкоцитов: Обычно это делается на 100 лейкоцитах. Когда вы закончили сканирование и нашли область мазка, где клетки оптимально распределены, переключитесь на более высокое увеличение (50- или 100-кратный масляный иммерсионный объектив) и начните дифференциальный подсчет и оценку морфологии.Не рекомендуется использовать высокий сухой объектив (40x), так как увеличение слишком мало, чтобы адекватно увидеть все особенности клеток. Начните считать     , двигаясь вперед и назад по мазку по шаблону, который не охватывает одну и ту же территорию (и который максимально удерживает вас в оптимальной области просмотра). Это можно сделать, двигаясь вбок (предпочтительно) или вдоль слайда. Идентифицируйте каждый встречающийся лейкоцит до тех пор, пока не будет подсчитано и отсортировано по типу 100 клеток, что даст вам процент каждого типа клеток или относительное дифференциальное количество лейкоцитов.
    • «Нормальные лейкоциты »: Пять   основных категорий лейкоцитов у млекопитающих – это нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, лимфоциты и моноциты. Мы также подсчитываем незрелые нейтрофилы (палочкоядерные нейтрофилы, метамиелоциты и миелоциты отражают различные стадии зрелости нейтрофилов от наиболее зрелых до наименее зрелых) по мере их обнаружения и помещаем их в отдельную категорию, называемую «палочкоядерными» нейтрофилами. Все незрелые нейтрофилы (независимо от стадии созревания) относятся к категории палочкоядерных нейтрофилов в Корнельском университете, тогда как другие лаборатории могут различать разные незрелые стадии.
    • Другие лейкоциты:  Если встречаются другие лейкоциты, которые в норме не должны присутствовать в крови, например, лейкемический бласт, тучные клетки, гистиоциты (реактивные макрофаги), они могут быть просто отмечены (если в небольшом количестве) как часть оценки морфологических особенностей лейкоцитов или подсчитаны как «другие клетки», если их достаточно для включения в дифференциальный подсчет лейкоцитов. .
  • Перечислите nRBC:  Если во время дифференциального подсчета лейкоцитов обнаруживаются ядерные эритроциты, подсчитайте их в отдельной категории (на 100 лейкоцитов) и не включайте в дифференциальный подсчет лейкоцитов на 100 клеток.Если подсчитано более 5 нэритроцитов/100 лейкоцитов, необходимо скорректировать общее количество лейкоцитов, поскольку автоматические анализаторы (или наши глаза) не могут отличить ядерные нэритроциты от лейкоцитов (все они выглядят как лейкоциты, потому что машины и наши глаза обнаруживают и считать ядра, а не клетки). У здоровых и большинства больных животных должно встречаться небольшое количество нэритроцитов, но у некоторых животных может быть высокое количество нэритроцитов (особенно у животных с регенеративной анемией). Ветеринарные диагностические лаборатории обычно делают эту поправку за вас, но если вы получаете общее количество лейкоцитов и проводите дифференциальный анализ лейкоцитов самостоятельно, вам придется сделать эту поправку.Чтобы исправить количество лейкоцитов, вы умножаете полученное количество на следующее: (100 ÷ [nRBC + 100]).
  • Рассчитайте абсолютный дифференциальный подсчет лейкоцитов: Получают путем умножения процента каждого учитываемого типа клеток на общее количество лейкоцитов (в тысячах/мкл) с поправкой на нэритроциты, чтобы получить количество каждого типа лейкоцитов (в тысячах/мкл). мкл). Когда вы отправляете гемограмму в ветеринарную диагностическую лабораторию, лаборатория обычно сообщает дифференциальный счет в абсолютных числах, т.е.е. они делают этот расчет для вас.
  • Оценка количества тромбоцитов (с объективом 100x): Тромбоциты у млекопитающих представляют собой безъядерные клетки, содержащие мелкие розово-красные гранулы. Попадая в кровь из мегакариоцитов в костном мозге, они являются ключевыми участниками гемостатического процесса. Хотя большинство тромбоцитов меньше эритроцитов, исключения из этого правила нередки у кошек и собак, у которых обычно в крови могут быть большие тромбоциты (особенно у кошек). У лошадей тромбоциты часто бледные и их трудно увидеть.
    • Оценка количества тромбоцитов:  Количество тромбоцитов можно оценить, получив среднее число тромбоцитов, наблюдаемых в нескольких (рекомендуется: 5–10) 100-кратных объективных полях. При таком увеличении каждый тромбоцит примерно равен 15 000 тромбоцитов/мкл. У большинства видов вы должны подсчитать в среднем 12–15 тромбоцитов на поле 100x, что соответствует 180–225 000 тромбоцитов/мкл. Лошади обычно имеют более низкое количество тромбоцитов, чем другие виды, поэтому в среднем 6 тромбоцитов находятся в пределах низких контрольных интервалов для лошадей, что соответствует количеству тромбоцитов 90 000/мкл.Оценка количества тромбоцитов должна выполняться в монослое мазка крови, и на нее будут влиять скопления тромбоцитов, которые снижают количество тромбоцитов, либо оцененных, либо предоставленных машиной. В Диагностическом центре здоровья животных Корнельского университета предоставляется полуколичественная оценка количества тромбоцитов (как указано выше), основанная на контрольных интервалах для рассматриваемых видов (если таковые имеются) следующим образом:
      • Увеличено (Увеличено) : Количество превышает контрольный интервал для вида.
      • Адекватный (Adeq.): Количество находится в пределах контрольного интервала для данного вида.
      • Низкий? : количество находится в пределах нижнего предела референтного интервала для вида или может быть незначительно снижено (т. е. количество «двусмысленно низкое»).
      • Низкий : Количество ниже контрольного интервала для вида.
      • Очень низкий : Количество тромбоцитов ниже предела медицинского решения, связанного со спонтанным кровотечением, т.е.е. < 30 000/мкл.
  • Выполните морфологическую оценку клеток крови (объектив 100x) для выявления аномалий во всех клеточных линиях: Эта часть гемограммы является наиболее субъективной и трудной для количественной оценки. Если обнаружены аномалии, они полуколичественно определяются как легкие, умеренные и выраженные или немногочисленные, умеренные и многочисленные, в зависимости от аномалии. Умение распознавать и интерпретировать морфологические аномалии приходит только с практикой и знакомством с нормальными чертами каждого вида.Важной частью исследования мазка крови является отделение «факта от вымысла» или артефакта от патологических изменений. Это может быть сложной задачей, а также требует опыта и мастерства.
    • Эритроциты: Мы ищем следующие изменения:
      • Форма (пойкилоциты) : Акантоциты, эхиноциты, эксцентроциты, кератоциты, шистоциты, сфероциты, овалоциты, клетки-мишени, стоматоциты. Определяется полуколичественно как мало, умеренно или много.
      • Размер : Макроциты, микроциты.Определяется полуколичественно как мало, умеренно или много. Анизоцитоз (изменчивость размеров) полуколичественно определяется как легкий, умеренный или выраженный.
      • Цвет : Гипохромазия (слишком мало гемоглобина), полихромазия (незрелые клетки, содержащие РНК или ретикулоциты). Полуколичественно определяется как легкая, умеренная или выраженная.
      • Включения : Сидероциты (железо), базофильная зернистость (РНК), тельца Хауэлла-Джолли (сохранившиеся ядра), тельца Хайнца (окисленный гемоглобин). Определяется полуколичественно как мало, умеренно или много.
      • Узоры : Агглютинация (отмечается как присутствующая или отсутствующая), образование руло. Образование руло полуколичественно определяется как легкое, умеренное или выраженное.
      • Инфекционные агенты : напр. Babesia, Anaplasma spp. Определяется полуколичественно как мало, умеренно или много.
    • Лейкоциты : Мы ищем следующие изменения:
      • Токсическое изменение (незрелые признаки): Цитоплазматическая базофилия, тельца Деле, цитоплазматическая вакуолизация, токсическая грануляция, незрелый хроматин.Полуколичественно определяется как легкая, умеренная или выраженная.
      • Реактивные лимфоциты (указывающие на антигенную стимуляцию): полуколичественное определение: мало, умеренно или много.
      • Смазанные клетки : Они позволяют узнать, насколько точен дифференциальный подсчет лейкоцитов. Несколько смазанных клеток не повлияют на подсчет, но от умеренного до большого количества повлияют. Смазанные клетки чаще встречаются в «состаренных» или хранящихся образцах. Определяется полуколичественно как мало, умеренно или много.
      • Аномальные клетки : Наличие лейкемических бластов, диспластических изменений в лейкоцитах, железа в лейкоцитах, гистиоцитах, тучных клетках.
      • Инфекционные агенты : напр. Anaplasma, Ehrlichia spp. Определяется полуколичественно как мало, умеренно или много.
  • Тромбоциты : оценивается размер и степень зернистости, а также наличие инфекционных агентов ( Anaplasma sp., редко).

Ссылки по теме

  • Как сделать хороший мазок крови : информация из лаборатории клинической патологии Центра диагностики здоровья животных Корнельского университета.

Мазок крови — понимание теста

Источники, использованные в текущем обзоре

Genzen, J. and Lehman, C. (май 2018 г., обновлено). HELLP-синдром Апластическая анемия. АРУП Консалт. Доступно онлайн по адресу https://arupconsult.com/content/hellp-syndrome. Проверено 02.06.18.

Брейден, К. (2 августа 2017 г., обновлено). Нейтропения. Медскейп Гематология. Доступно в Интернете по адресу https://emedicine.medscape.com/article/204821-workup#c11. Проверено 02.06.18.

Кле, Д.(октябрь 2017 г.). Мазок крови в эпоху потоковых клеток. Rev Бюстгальтеры Hematol Hemoter. 2017 октябрь-декабрь; 39(4): 295–296. Доступно на сайте https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5693265/. Проверено 02.06.18.

Комар, С. и др. Ал. (31 июля 2017 г.). Оценка критериев ручного анализа мазка крови после автоматизированного полного анализа крови в крупной университетской больнице. Бюстгальтеры Rev Hematol Hemoter . 2017 г., октябрь-декабрь; 39(4): 306–317. Доступно в Интернете по адресу https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5693276/. Проверено 02.06.18.

Adewoyin, A. и Nwogoh, B. (декабрь 2014 г.). ПЛЕНКА ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ – ОБЗОР. Ann Ib Postgrad Med. 2014 Декабрь; 12(2): 71–79. Доступно на сайте https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4415389/. Проверено 02.06.18.

Гулати, Г. и др. (январь 2013 г.). Цель и критерии сканирования мазка крови, исследования мазка крови и обзора мазка крови. Лаборатория Энн Мед . 2013 январь; 33(1): 1–7. Доступно в Интернете по адресу https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3535191/. Проверено 02.06.18.

Бэйн, Б. (4 августа 2005 г.). Диагноз по мазку крови. N Engl J Med 2005; 353:498-507. Доступно на сайте https://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMra043442. Проверено 02.06.18.

Источники, использованные в предыдущих обзорах

Томас, Клейтон Л., редактор (1997). Циклопедический медицинский словарь Таберса. Компания FA Davis, Филадельфия, Пенсильвания [18-е издание].

Пагана, Кэтлин Д.и Пагана, Тимоти Дж. (2001). Справочник по диагностическим и лабораторным тестам Мосби, 5-е издание: Mosby, Inc., Сент-Луис, Миссури.

Эльстром, Р. (28 октября 2001 г., пересмотрено). Периферический мазок. Система здравоохранения Пенсильванского университета, pennhealth.com [он-лайн информация]. Доступно на сайте http://www.pennhealth.com/ency/article/003665.htm.

Биология крови. The Merck Manual Home Edition [Информация в Интернете]. Доступно на сайте http://www.merck.com/mrkshared/mmanual_home/sec14/152.jsp.

Мазок периферической крови. Университетская больница Роберта Вуда Джонсона, Медицинская энциклопедия [он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.rwjuhh.net/Atoz/encyclopedia/article/003665.asp.

Катлер, К. (14 сентября 2003 г.). Мазок крови. Медицинская энциклопедия MedlinePlus [Онлайн-информация]. Доступно на сайте http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003665.htm

.

Brose, M, обновлено (8 мая 2003 г., обновлено). Медицинская информация MedlinePlus, Медицинская энциклопедия [он-лайн информация].Доступно на сайте http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003657.htm

.

Блэквелл, С. и Хендрикс, П. (2001). Распространенные анемии: что скрывается за ними. Clinician Reviews 11(3):53-62 [он-лайн журнал]. Доступно на сайте http://www.medscape.com/viewarticle/436692.

(15 октября 2001 г.). Анемия у детей. Американский семейный врач , 64:1379-86 [Электронный журнал]. Доступно в Интернете по адресу http://www.aafp.org/afp/20011015/1379.html.

Пагана, Кэтлин Д.и Пагана, Тимоти Дж. (© 2007). Справочник по диагностическим и лабораторным тестам Мосби, 8-е издание: Mosby, Inc., Сент-Луис, Миссури. стр. 174-176.

Левин, М. (9 марта 2007 г.). Дифференциал крови. Медицинская энциклопедия MedlinePlus [он-лайн информация]. Доступно на сайте http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003657.htm. Проверено 10.04.07.

Доушен, С. (март 2007 г.). Кровь. Фонд Nemours, Teens Health [Онлайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://kidshealth.org/teen/your_body/body_basics/blood.HTML. Проверено 10.04.07.

Ваджпаи Н., Грэм С.С., Бем С. Базовое исследование крови и костного мозга. Клиническая диагностика Генри и лечение с помощью лабораторных методов, 21-е изд. Ричард Макферсон и Мэтью Пинкус, ред. Сондерс Эльзиевье: Филадельфия. С. 457-483, 2007.

.

Белл А., Саллах С. Морфология клеток крови человека, 7-е изд. 2005. Эбботт, стр. 1–27.

Генри Клиническая диагностика и лечение с помощью лабораторных методов. 21-е изд. Макферсон Р., Пинкус М., ред. Филадельфия, Пенсильвания: Saunders Elsevier: 2007, стр. 468–478, 505–516, 539–541, 549–559.

(4 августа 2005 г.) Бэйн Б. Диагноз по мазку крови, обзорная статья. N Engl J Med 2005; 353:498-507. Доступно на сайте http://www.nejm.org/doi/pdf/10.1056/NEJMra043442. По состоянию на февраль 2011 г.

(9 сентября 2009 г.) Харпер Дж. Педиатрическая мегалобластная анемия. Статья по электронной медицине. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/959918-overview. По состоянию на февраль 2011 г.

(9 сентября 2009 г.) Artz A. Анемия у пожилых людей. Статья по электронной медицине.Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/1339998-overview. По состоянию на февраль 2011 г.

(29 февраля 2010 г.) Дагдейл Д. Мазок крови. Медицинская энциклопедия MedlinePlus. Доступно на сайте http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003665.htm. По состоянию на февраль 2011 г.

Райли Р. и др. Как подготовить и интерпретировать мазок периферической крови. Медицинский колледж Вирджинии, Университет Содружества Вирджинии. Доступно на сайте http://www.pathology.vcu.edu/education/PathLab/pages/hematopath/pbs.HTML. По состоянию на февраль 2011 г.

Герстен, Т. (обновлено 8 февраля 2012 г.). Мазок крови. Медицинская энциклопедия MedlinePlus [он-лайн информация]. Доступно на сайте http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003665.htm. По состоянию на июль 2014 г.

Шик, П. (обновлено 21 февраля 2013 г.). Гемолитическая анемия. Справочник Medscape [Онлайн информация]. Доступно на сайте http://emedicine.medscape.com/article/201066-overview. По состоянию на июль 2014 г.

Карри, К. (обновлено 1 августа 2012 г.).Дифференциальный анализ крови. Medscape Drugs and Diseases [Онлайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://emedicine.medscape.com/article/2085133-overview#showall. По состоянию на июль 2014 г.

Лихтин, А. (обновлено в сентябре 2013 г.). Оценка анемии. Руководство Merck для медицинских работников [Информация в Интернете]. Доступно в Интернете по адресу http://www.merckmanuals.com. По состоянию на июль 2014 г.

Гауэр Р. и Браун М. (15 мая 2012 г.). Тромбоцитопения. Ам семейный врач. 2012 15 марта; 85 (6): 612-622.[Онлайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.aafp.org/afp/2012/0315/p612.html. По состоянию на июль 2014 г.

(© 1995–2014). Оценка морфологии (специальный мазок). Клиника Мэйо Медицинские лаборатории Мэйо [Он-лайн информация]. Доступно в Интернете по адресу http://www.mayomedicallaboratories.com/test-catalog/print/9184. По состоянию на июль 2014 г.

(18 мая 2012 г.). Что такое анемия? Национальный институт сердца, легких и крови [он-лайн информация]. Доступно на сайте http://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/anemia/.По состоянию на июль 2014 г.

Линч, Э. (© 1990) Глава 155 Мазок периферической крови. Клинические методы: анамнез, физические и лабораторные исследования. 3-е издание. Книжная полка NCBI [Онлайн информация]. Доступно на сайте http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK263/. По состоянию на июль 2014 г.

Пагана, К. Д. и Пагана, Т. Дж. (© 2011). Справочник по диагностическим и лабораторным тестам Мосби, 10-е издание: Mosby, Inc., Сент-Луис, Миссури. стр. 168-170.

 

Подсчет лейкоцитов в мазке крови с помощью фурье-птихографической микроскопии

PLoS One.2015 г.; 10(7): e0133489.

, # 1 , * , # 1 , 2 и 1 , 3

Джебом Чунг

1 Департамент электротехники, Калифорнийский технологический институт, Пасадена, Калифорния, Соединенные Штаты Америки,

Сяозе Оу

1 Департамент электротехники, Калифорнийский технологический институт, Пасадена, Калифорния, Соединенные Штаты Америки,

Раджан П.Кулкарни

2 Отделение дерматологии Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе, Лос-Анджелес, Калифорния, Соединенные Штаты Америки,

Чанхуэй Ян

1 Департамент электротехники, Калифорнийский технологический институт, Пасадена, Калифорния, Соединенные Штаты Америки,

3 Кафедра биоинженерии, Калифорнийский технологический институт, Пасадена, Калифорния, Соединенные Штаты Америки,

Хуан Карлос дель Аламо, редактор

1 Департамент электротехники, Калифорнийский технологический институт, Пасадена, Калифорния, Соединенные Штаты Америки,

2 Отделение дерматологии Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе, Лос-Анджелес, Калифорния, Соединенные Штаты Америки,

3 Кафедра биоинженерии, Калифорнийский технологический институт, Пасадена, Калифорния, Соединенные Штаты Америки,

Калифорнийский университет в Сан-Диего, США,

# Внесли поровну.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Задумал и разработал эксперименты: JC XO CY. Выполнял эксперименты: JC XO РПК. Проанализированы данные: JC RPK. Предоставленные реагенты/материалы/инструменты для анализа: XO. Написал статью: JC.

Поступила в редакцию 2 ноября 2014 г .; Принято 28 июня 2015 г.

Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии, что автор и источник оригинала указаны надлежащим образом.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Abstract

Количество лейкоцитов (лейкоцитов) является важным показателем, помогающим в диагностике или прогнозировании различных заболеваний, таких как ишемическая болезнь сердца, диабет 2 типа или инфекция. Подсчет лейкоцитов может производиться как вручную, так и автоматически. Автоматические методы способны подсчитывать большое количество клеток, чтобы дать статистически более точные показания количества лейкоцитов в образце, но специализированное оборудование, как правило, дорого.Ручные методы недороги, поскольку они включают только обычную установку светового микроскопа. Однако это более трудоемко и подвержено ошибкам, потому что небольшое поле зрения (FOV) микроскопа требует механического сканирования образца для подсчета достаточного количества лейкоцитов. Здесь мы исследуем использование Фурье-птихографической микроскопии (FPM), чтобы обойти эти проблемы ручных методов. С объективом 2x FPM может обеспечить поле зрения 120 мм 2 с улучшенным разрешением, сравнимым с разрешением объектива 20x, что достаточно для недифференциального подсчета лейкоцитов всего в одном поле зрения.Специалист смог подсчитать лейкоциты на изображениях FPM со 100% точностью по сравнению с подсчетом, определенным на изображениях с обычного микроскопа. Алгоритм автоматического подсчета также был разработан для идентификации лейкоцитов на изображениях, захваченных FPM, с точностью 95 %, что открывает путь к экономичной настройке подсчета лейкоцитов с преимуществами как автоматического, так и ручного методов подсчета.

Введение

Лейкоциты являются эффекторными клетками иммунной системы и циркулируют в кровотоке и лимфатической системе.Инфекция или физическая травма приводят к воспалительной реакции, которая вызывает повышенную выработку лейкоцитов для устранения травмы или инфекции. Из-за этой связи между лейкоцитами и воспалительной реакцией количество лейкоцитов является ценным показателем для диагностики и прогноза ряда заболеваний. Несколько исследователей обнаружили, что высокое количество лейкоцитов тесно связано с риском ишемической болезни сердца [1–6], что еще больше прояснило связь между сердечно-сосудистыми заболеваниями и воспалением [4].Было обнаружено, что курение вызывает увеличение количества лейкоцитов, но появляется все больше доказательств того, что высокое количество лейкоцитов является предиктором ишемической болезни сердца независимо от статуса курения [5]. Мало того, что высокое количество лейкоцитов предсказывает развитие макро- и микрососудистых осложнений у пациентов с диабетом 2 типа [7], но и будущее начало диабета 2 типа также связано с высоким количеством лейкоцитов [8]. В педиатрии выявлено, что высокий уровень лейкоцитов является индикатором бактериемической инфекции у детей [9].Таким образом, подсчет лейкоцитов может быть ценным инструментом для прогнозирования заболеваний.

В самом широком смысле существует два способа подсчета лейкоцитов: автоматический метод и ручной метод. Проточная цитометрия — это распространенный автоматический метод, который работает путем пропускания лейкоцитов одним файлом через электронные детекторы [10]. Затем детекторы количественно определяют оптические и электрические свойства потока жидкости для дифференциального подсчета пяти типов лейкоцитов. Этот метод удобен для анализа больших объемов образцов крови наиболее эффективным способом и становится все более экономичным с достижениями в области микрофлюидной проточной цитометрии [11].Однако, поскольку он не фиксирует изображения анализируемых клеток, дальнейшее исследование морфологии и изменчивости клеток практически невозможно. Кроме того, он не может идентифицировать клетки с аномальной физиологией, поскольку его метод идентификации зависит от принятых диапазонов сигнатурных характеристик клеток в крови. Цитометрия с изображением позволяет обойти эти проблемы за счет захвата изображений текущих аналитов в дополнение к выполнению проточной цитометрии [12]. Несмотря на то, что он очень мощный, он не подходит для исследовательских лабораторий или клиник с ограниченными ресурсами из-за его высокой цены.

Метод ручного подсчета — это альтернативный способ подсчета лейкоцитов, но с гораздо меньшей производительностью. Ручной метод подсчета лейкоцитов можно проводить либо на образце мазка крови, либо на гемоцитометре с использованием стандартной микроскопической системы. Образец можно либо рассматривать непосредственно через окуляр микроскопа, либо записывать в файлы изображений. Для образца мазка крови области монослоя сканируются механически для подсчета общего количества лейкоцитов [13], в то время как для гемоцитометра область сетки сканируется для подсчета [14].Хотя ручной метод является более трудоемким и требует больше времени, он дает ученым возможность использовать широкий спектр объективов, доступных для стандартного микроскопа, для тщательного визуального анализа образцов. Высококачественные, но недорогие устройства визуализации современных технологий позволяют использовать это приложение в условиях ограниченных ресурсов [15].

Одной из технических проблем, связанных с ручным методом подсчета, является ошибка, связанная с механическим сканированием предметного стекла.Производительность обычного микроскопа ограничена произведением его пространственной пропускной способности, а это означает, что существует компромисс между разрешением изображения и полем зрения микроскопа (FOV). Как правило, для просмотра и недифференциального подсчета лейкоцитов под обычным микроскопом используют объектив с увеличением не менее 10х (0,25 NA) [16]. Для дифференциального подсчета лейкоцитов используется иммерсионный объектив с 100-кратным увеличением (1,4 NA). Однако при таком высоком увеличении поле зрения очень мало, что требует механического сканирования предметного стекла в процессе подсчета.Это неблагоприятно, потому что движение сканирования должно быть точно выровнено и контролироваться, чтобы избежать любого перекрытия областей сканирования. Другим недостатком использования стандартной микроскопии для ручного подсчета является физическая нагрузка на клиницистов, связанная с ручным сканированием предметного стекла и непосредственным наблюдением через микроскоп. Рутинное выполнение анализа образцов под стандартным микроскопом может нанести ущерб клиницистам [17].

Здесь мы исследуем использование Фурье-птихографической микроскопии (FPM) в качестве решения, которое может устранить проблемы, присущие ручному методу подсчета лейкоцитов.FPM — это новый метод микроскопической визуализации, впервые описанный в [18], который может с помощью вычислений сшивать серию изображений с низким разрешением и широким полем зрения в области Фурье для получения изображения с более высоким разрешением и широким полем зрения. С помощью FPM можно визуализировать большую площадь области монослоя мазка крови без каких-либо механических движений, связанных со сканированием. FPM требует минимальных модификаций традиционной микроскопической установки, включая только светодиодную матрицу и ПЗС-камеру. Мы продемонстрировали его жизнеспособность для использования в подсчете лейкоцитов, попросив специалиста по гемоцитометрии сравнить его производительность с обычной установкой микроскопа с 20-кратным увеличением, которая действует как основная правда в нашем исследовании.С установкой, описанной в следующих разделах, проводился только недифференциальный подсчет лейкоцитов. Отмечается потенциал FPM для дифференциального подсчета лейкоцитов. Наконец, обсуждается эффективность алгоритма автоматического подсчета лейкоцитов на изображениях FPM.

Принципы FPM

FPM — это вычислительный метод, который может эффективно увеличить числовую апертуру системы микроскопа для получения изображения образца с высоким разрешением и комплексной амплитудой с преимуществом широкого поля зрения, связанного с объективом с низкой числовой апертурой.В технологии используются два ключевых элемента: (1) тот факт, что освещение образца наклонной плоской волной в установке микроскопа приводит к поперечному смещению спектра Фурье образца в задней фокальной плоскости объектива; и (2) возможность восстановить информацию о фазе образца из его изображения интенсивности с помощью алгоритма восстановления фазы [18]. Установка FPM, как показано на рисунке, включает в себя обычную установку микроскопа с заменой источника света на светодиодную матрицу. Мы предполагаем, что наши светодиоды являются квазимонохроматическими, и более подробный анализ можно найти в [19].Световое поле, излучаемое одним светодиодом, можно аппроксимировать плоской волной в небольшой области на плоскости образца, поскольку большое расстояние (~8 см) между светодиодом и образцом увеличивает пространственную когерентность светодиода. Плоская волна имеет векторные составляющие (kx, ky), связанные с наклонным освещением светодиода на образце. Включение одного светодиода вызывает сдвиг спектра Фурье образца на (kx, ky) в задней фокальной плоскости объектива, а конечная числовая апертура (NA) объектива действует как фильтр нижних частот, который пропускает только небольшая подобласть в центре сдвинутого Фурье-спектра.Низкопроходная компонента Фурье далее распространяется в плоскость изображения и захватывается камерой. Светодиоды загораются последовательно, так что захваченные изображения содержат частично перекрывающиеся подобласти Фурье, которые вместе охватывают весь спектр Фурье образца. Захваченные изображения разбиваются на более мелкие фрагменты пространственно когерентных областей, размерность которых определяется теоремой ван Читтерта-Цернике: L = 0,61 λz/a [20], где λ — длина волны светодиода, z — расстояние от светодиода до образца, а a — радиус активной области светодиода.При размерах светодиода 200 мкм x 200 мкм, расстоянии между светодиодной матрицей и образцом 8 см и длине волны 630 нм длина когерентности составляет ~307 мкм. Также в этом измерении пространственно изменяющиеся аберрации считаются постоянными. Мы реконструируем каждую плитку отдельно, чтобы пространственно меняющуюся аберрацию в поле зрения микроскопа можно было устранить с помощью алгоритма реконструкции, обсуждаемого ниже.

Настройка FPM.

а) Схемы установки ФПМ. Он состоит из обычного микроскопа с объективом, трубчатой ​​линзой, камерой и светодиодной матрицей, заменяющей конденсор для освещения образца.б) Фурье-спектр образца в задней фокальной плоскости объектива. Круглая подобласть соответствует размеру апертуры объектива. Он смещается с изменением угла освещения. в) Смещение угла освещения обеспечивается за счет свечения светодиодов в разных местах на матрице.

Для каждой плитки в FOV можно восстановить расширенный комплексный спектр Фурье из изображений с различной интенсивностью освещения, применяя алгоритм восстановления фазы, описанный в [21], называемый алгоритмом восстановления встроенной функции зрачка (EPRY).Алгоритм итеративно решает расширенный спектр Фурье, используя изображения интенсивности в качестве ограничения в пространственной области и конечную числовую апертуру цели в качестве сдвига ограничения нижних частот в области Фурье. В этом процессе алгоритм способен не только генерировать комплексное амплитудное изображение образца с высоким разрешением, но также отделять функцию зрачка и комплексную амплитудную функцию образца от изображения. Функция зрачка содержит аберрации микроскопа, связанные с его системой линз, и расфокусировку, вызванную смещением образца в фокальной плоскости, оба из которых могут зависеть от положения плитки в поле зрения.Таким образом, комплексная амплитудная функция образца представляет собой сложное изображение образца с коррекцией аберраций и ограничением дифракции. Сшивая плитки вместе в пространственной области, мы получаем изображение интенсивности образца и информацию о фазе, отделенную от аберраций по всему FOV.

Материалы и методы

Заявление об этике

Исследование было одобрено Калифорнийским технологическим институтом (IRB No.14–0464). Все образцы крови, используемые в этом исследовательском проекте, были получены после получения подписанной формы согласия от добровольцев. Добровольцы не идентифицированы с образцами в этом проекте.

Приготовление мазка крови

Мазок крови, окрашенный по Райту-Гимзе, был приготовлен для проверки характеристик FPM по сравнению с обычной микроскопией. К образцу цельной крови добавляли 2,0 мг ЭДТА/мл и 1 мкл смеси равномерно наносили на покровное стекло, используя другое покровное стекло под углом смазывания 30 градусов.После того, как образец был высушен на воздухе в течение 5 минут, для фиксации и окрашивания образца использовался набор для окрашивания HEMA 3 Wright-Giemsa от Fisher Diagnostics. Набор включал последовательное погружение образца на 1 секунду в три банки Коплина, первая из которых содержала фиксирующий раствор HEMA 3 на основе метанола, вторая содержала раствор HEMA 3 I, а последняя содержала раствор HEMA 3 II. Этапы погружения повторялись 5 раз для каждого образца. Затем образец промывали деионизированной водой и сушили на воздухе еще 5 минут.

Визуализация с использованием FPM и обычного метода микроскопии

Микроскоп Olympus BX 41 с 20-кратным объективом (UPlanFL N, 0,5 NA, Olympus) использовался для традиционного метода подсчета лейкоцитов. С помощью цветной КМОП-камеры (MT9P031, размер пикселя 2,2 мкм) было получено изображение 20 различных участков образца мазка крови. Для метода FPM использовался тот же микроскоп с 2-кратным объективом (PlanApo N, 0,08 NA, Olympus) с красными светодиодами (SMD 3528, центральная длина волны 632 нм, полоса пропускания ~10 нм после полосового фильтра) в качестве источника света и теми же 20 области были извлечены из изображения с широким полем зрения, снятого встроенной ПЗС-камерой (Kodak KAI-29050, 5.размер пикселя 5 мм). 15 x 15 светодиодов последовательно загорались для процесса захвата, обеспечивая эффективную числовую апертуру ~0,5 для системы FPM. Весь процесс захвата занял ~3 минуты (ограничено яркостью светодиодов и частотой кадров камеры), а реконструкция ~10 минут (ограничено скоростью обработки компьютера). Мы использовали монохроматические изображения для этого исследования, потому что для идентификации лейкоцитов в образце требовалась только информация о контрасте.

Слепой подсчет лейкоцитов

Изображения 20 участков мазка крови, полученные с помощью обычной 20-кратной микроскопии, были проанализированы обученным специалистом.Количество лейкоцитов для каждого изображения было сведено в таблицу, устанавливая базовое значение для тестирования производительности FPM. Чтобы гарантировать, что исследование было слепым, специалисту было предоставлено 2-недельное временное окно, прежде чем он проанализирует соответствующие 20 областей, полученных с помощью FPM. Кроме того, порядок изображений FPM был случайным. Количество лейкоцитов для изображений FPM было сведено в таблицу, и 20 пар изображений FPM и обычных изображений микроскопа были сопоставлены для сравнения количества WBC соответствующих систем в каждой области.

Результаты и обсуждение

показано сравнение изображений нескольких областей, полученных двумя методами.FOV, обеспечиваемый FPM, соответствует примерно 120 мм 2 в плоскости образца, с эффективной числовой апертурой 0,5 и разрешением полного шага 1560 нм, создавая изображение размером ~ 1 гигапиксель. FOV значительно больше, чем может обеспечить 20-кратный микроскоп, что составляет около 1,2 мм 2 . Сравнивая области окна с FPM и обычной микроскопией с 20-кратным увеличением, мы можем ясно видеть ядра лейкоцитов на обоих изображениях. На самом деле ядра в основном используются для отличия лейкоцитов от мазка крови, потому что лейкоциты являются единственными клетками в крови с ядром.

Полное FOV-изображение предметного стекла мазка крови с SBP ~0,9 гигапикселя с помощью FPM с использованием объектива с числовой апертурой 2x 0,08 (в центре) и его увеличенных участков (окружение).

Красные подобласти извлекаются непосредственно из полного изображения FOV, а соответствующие синие подобласти снимаются с помощью объектива 20x 0,5 NA. Оба они предлагают достаточно деталей, по которым мы можем различить формы и размеры лейкоцитов и их ядер. Синий кружок в середине центрального изображения представляет относительный размер FOV, достигаемый объективом с 20-кратным увеличением, по сравнению с FPM.

В слепом сравнительном исследовании специалист смог подсчитать одинаковое количество лейкоцитов в каждой области как для обычных изображений микроскопии, так и для изображений FPM. Всего для обоих методов было подсчитано 38 лейкоцитов, и не было ложноположительных или ложноотрицательных показаний FPM. Результат подводится в . Это указывает на то, что изображения, полученные с помощью FPM, имеют адекватное, если не превосходящее, качество для процедуры подсчета лейкоцитов и могут ставить точные диагнозы. Таким образом, мы подтверждаем, что FPM является подходящей заменой стандартной микроскопии, которую гематологи могут использовать для подсчета лейкоцитов.

Таблица 1

Эффективность подсчета лейкоцитов в 20 различных областях на предметном стекле мазка крови с использованием 3 соответствующих методов.

Метод Точность (%) Частота ложноположительных результатов (%) Частота ложноотрицательных результатов (%)
2 2 Обычный 100 0 0
ФПМ 100 0 0
FPM + автоматический 95 5.26 0

Основным преимуществом FPM, как показано на рисунке, является его способность разрешать изображения с высоким разрешением и широким полем зрения. В этой установке мы смогли получить изображение мазка крови с FOV, обеспечиваемым объективом 2x 0,08 NA с разрешением, сравнимым с разрешением объектива 20x 0,5 NA. Широкий FOV очень удобен для подсчета лейкоцитов с помощью микроскопа, потому что он устраняет количество механических сканирований образца мазка крови, которое специалист должен был бы выполнить для подсчета достаточного количества лейкоцитов для анализа.Ручное механическое сканирование может привести к ошибкам в процессе подсчета, создавая непреднамеренные перекрытия между областями сканирования вместо того, чтобы отображать идеально смежные области. Однако с помощью FPM такие ошибки значительно уменьшаются за счет уменьшения количества необходимых сканируемых областей или даже устраняются, когда в одном FOV можно подсчитать достаточное количество лейкоцитов. Учитывая, что для достаточной оценки общего количества лейкоцитов в крови обычно требуется около десяти полей микроскопа с увеличением 40x, общее необходимое поле зрения составляет ~5 мм 2 [22].FPM превосходно удовлетворяет этому требованию благодаря объективу с двукратным увеличением, поле зрения которого составляет 120 мм 2 . Для сравнения, объектив 20x 0,5 NA имеет поле зрения 1,2 мм 2 , что требует бокового сканирования предметного стекла.

Следует противопоставить метод FPM другим методам визуализации всего предметного стекла (WSI), которые включают точно выровненные механические компоненты для получения изображения с высоким разрешением и широким полем зрения. Есть несколько преимуществ FPM по сравнению с этими методами. Одним из них является стабильность FPM из-за отсутствия каких-либо движущихся частей.Отсутствие движущихся частей подразумевает меньший износ, поэтому целостность системы может сохраняться в течение более длительного периода времени. Во-вторых, и, возможно, самым большим преимуществом FPM, является устойчивость FPM к возможным ошибкам, возникающим в результате неправильной настройки. В стандартном методе WSI большинство проблем с качеством изображения связаны с фокусировкой [17]. Изображения не в фокусе влекут за собой повторение нового набора изображений после правильной фокусировки объектива. В случае с ФПМ в напряженных повторениях нет необходимости из-за его способности к перефокусировке [18].Поскольку изображение, которое реконструирует FPM, представляет собой сложное изображение, содержащее как его амплитуду, так и фазу, его можно распространить цифровым способом по оси z в его правильную фокальную плоскость, обеспечивая эффективную глубину резкости 300 мкм [18]. В результате FPM может отображать образец с неровным профилем поверхности, так что вся область находится в фокусе отображаемого поля зрения. Образцы мазка крови с пространственно меняющимися уровнями толщины или даже образцы, наклоненные из-за смещения, могут быть успешно визуализированы с помощью FPM. В-третьих, FPM намного дешевле, чем WSI.WSI обычно включает прецизионный механический столик, который может стоить 100 000–150 000 долларов США за штуку [17], тогда как FPM требует только добавления недорогой светодиодной матрицы (50 долларов США) к существующей обычной системе микроскопа.

Наличие ядер в лейкоцитах определяется по изображениям FPM. Кроме того, можно наблюдать морфологию ядер. Большинство лейкоцитов имеют многодольчатую структуру ядра, которая является показателем нейтрофилов, эозинофилов или базофилов, а один лейкоцит показывает эксцентричное ядро, характерное для лимфоцита.В этом исследовании дифференциальный подсчет лейкоцитов не проводился. Тем не менее, изображения FPM с высоким разрешением предполагают, что использование объектива с более высокой числовой апертурой и более широких углов светодиодного освещения в настройке FPM для дальнейшего увеличения эффективной числовой апертуры до ~ 1,4 может позволить дифференциальный подсчет лейкоцитов в нашей системе. Читатели, заинтересованные в реализации системы FPM с высокой числовой апертурой, могут обратиться к [23]. Кроме того, получение полноцветного изображения мазка крови может помочь нашей системе в проведении дифференциального подсчета, поскольку цвет клеток помогает различать различные типы лейкоцитов.

Несколько лейкоцитов из областей изображения с помощью обычного 20-кратного микроскопа (вверху) и FPM (внизу).

Среди этих клеток можно наблюдать различную морфологию. Крайняя левая клетка имеет эксцентричное однодольное ядро, что позволяет предположить, что это лимфоцит, в то время как другие клетки имеют многодольчатую структуру ядра, что позволяет предположить, что они являются эозинофилами, базофилами или нейтрофилами.

Четкое морфологическое различие между лейкоцитами и эритроцитами на изображениях мазков побудило нас применить алгоритм для автоматизации процесса подсчета лейкоцитов.Из-за заметно высокой контрастности лейкоцитов, обусловленной наличием ядра, можно разработать алгоритм для выделения высококонтрастных областей и использования их в качестве маркеров для идентификации лейкоцитов на изображениях мазка крови. Используя MATLAB, мы количественно оценили разницу в контрасте и размере лейкоцитов по сравнению с эритроцитами. С помощью этой информации алгоритм смог идентифицировать лейкоциты с точностью 95% на 20 полученных образцах изображений, как показано на рис. Пример алгоритма идентификации WBC показан на рис.Ошибки подсчета были обнаружены на изображениях, где (1) либо контраст ядер лейкоцитов был невысок на фоне эритроцитов, либо (2) эритроциты были сгруппированы в одной области, создавая такой же высокий контраст, как и ядра лейкоцитов. в их близости. Тем не менее, с точностью подсчета 95% алгоритм может помочь клиницистам вручную подсчитать большое количество образцов крови. Ожидается, что включение в программу дополнительных параметров, кроме контрастности и размера лейкоцитов, приведет к более высокой точности.

Обнаружение лейкоцитов алгоритмом автоматического подсчета.

Алгоритм анализирует часть изображения образца, полученного с помощью FPM (слева), и выводит изображение, наложенное красными метками на обнаруженные лейкоциты.

Заключение

Мы продемонстрировали, что FPM может быть полезен для подсчета лейкоцитов благодаря его большому полю зрения и высокому разрешению, которые требуют только добавления недорогой светодиодной матрицы к обычной установке микроскопа. Это значительно сокращает или даже устраняет объем сканирования образца крови, необходимого для ручного подсчета лейкоцитов.Низкая стоимость FPM может позволить более широкому сообществу получать широкоугольные изображения с высоким разрешением, сравнимые с изображениями WSI, и более эргономично выполнять процедуры подсчета лейкоцитов. Цифровой сбор изображений с помощью FPM также делает его хорошим кандидатом на применение в телемедицине. Дальнейшие улучшения разрешения изображения также позволят проводить дифференциальный подсчет лейкоцитов в системе FPM. Применение большего количества параметров для различения лейкоцитов из образца крови к алгоритму автоматического подсчета приведет к более высокой точности.

Заявление о финансировании

Эта работа была поддержана грантом NIH 1DP2OD007307; Программа Инновационной инициативы Калифорнийского технологического института (CI2) 2014 г. Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Доступность данных

Все соответствующие данные находятся в документе.

Ссылки

1. Yarnell JW, Baker IA, Sweetnam PM, Bainton D, O’Brien JR, Whitehead PJ, et al. Фибриноген, вязкость и количество лейкоцитов являются основными факторами риска ишемической болезни сердца.Совместные исследования сердечно-сосудистых заболеваний Caerphilly и Speedwell. Тираж. 1991;83(3):836–44. 10.1161/01.cir.83.3.836 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]2. Каннел В.Б., Андерсон К., Уилсон П.Ф. Количество лейкоцитов и сердечно-сосудистые заболевания: выводы из фреймингемского исследования. ДЖАМА. 1992;267(9):1253–1256. 10.1001/jama.1992.034800035 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]3. Гримм Р. Х. младший, Нитон Дж. Д., Людвиг В. Прогностическое значение количества лейкоцитов для коронарной, онкологической и общей смертности.ДЖАМА. 1985; 254 (14): 1932–197. 10.1001/jama.1985.033601400 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]4. Бэррон Х.В., Кэннон К.П., Мерфи С.А., Браунвальд Э., Гибсон К.М. Связь между количеством лейкоцитов, эпикардиальным кровотоком, перфузией миокарда и клиническими исходами в условиях острого инфаркта миокарда: подисследование тромболизиса при инфаркте миокарда 10. Тираж. 2000;102(19):2329–34. 10.1161/01.cir.102.19.2329 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]5. Браун Д.У., Джайлз У.Х., Крофт Дж.Б.Количество лейкоцитов: независимый предиктор смертности от ишемической болезни сердца в национальной когорте. Журнал клинической эпидемиологии. 2001;54(3):316–22. 10.1016/С0895-4356(00)00296-1 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]6. Твиг Г., Афек А., Шамисс А., Деразне Э., Цур Д., Гордон Б. и др. Количество лейкоцитов и риск ишемической болезни сердца у молодых людей. ПЛОС ОДИН. 2012;7(10):e47183 10.1371/journal.pone.0047183 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]7. Тонг ПК, Ли К.Ф., Со В.И., Нг М.Х., Чан В.Б., Ло М.К. и др.Количество лейкоцитов связано с макро- и микрососудистыми осложнениями у китайских пациентов с диабетом 2 типа. Уход за диабетом. 2004;27(1):216–22. [PubMed] [Google Scholar]8. Возарова Б., Вейер С., Линдси Р.С., Пратли Р.Э., Богардус С., Татарани П.А. Высокий уровень лейкоцитов связан с ухудшением чувствительности к инсулину и предсказывает развитие диабета 2 типа. Диабет. 2002;51(2):455–61. 10.2337/диабет.51.2.455 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]9. Яффе Д.М., Флейшер Г.Р.Температура и общее количество лейкоцитов как индикаторы бактериемии. Педиатрия. 1991;87(5):670–4. [PubMed] [Google Scholar] 10. Шапиро ХМ. Практическая проточная цитометрия. Нью-Джерси: Уайли-Лисс; 2003. [Google Scholar] 11. Huh D, Gu W, Kamotani Y, Grotberg JB, Takayama S. Microfluidics для проточного цитометрического анализа клеток и частиц. Физиологическое измерение. 2005;26(3):R73 [PubMed] [Google Scholar] 12. Зуба-Сурма Э.К., Куция М., Абдель-Латиф А., Лиллард Дж.В., Ратайчак М.З. Система ImageStream: ключевой шаг к новой эре визуализации.Folia Histochemica et Cytobiologica. 2007;45(4):279–90. [PubMed] [Google Scholar] 13. Кессель РГ. Базовая медицинская гистология: биология клеток, тканей и органов. Нью-Йорк: Издательство Оксфордского университета; 1998. [Google Scholar]14. Турген МЛ. Клиническая гематология: теория и процедуры. Филадельфия: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 2005. 551 стр. [Google Академия] 15. Бреслауер Д.Н., Маамари Р.Н., Свитц Н.А., Лам В.А., Флетчер Д.А. Клиническая микроскопия с помощью мобильного телефона для глобальных приложений здравоохранения. ПЛОС ОДИН.2009;4(7):e6320 10.1371/журнал.pone.0006320 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]16. Беллвуд Б., Андрасик-Каттон М. Справочник ветеринарного техника по лабораторным процедурам. Эймс: Уайли-Блэквелл; 2013. [Google Академия]17. Газнави Ф., Эванс А., Мадабхуши А., Фельдман М. Цифровая визуализация в патологии: визуализация всего предметного стекла и не только. Ежегодный обзор патологии: механизмы заболевания. 2013; 8: 331–59. [PubMed] [Google Scholar] 20. Мандель Л., Вольф Э. Оптическая когерентность и квантовая оптика.Нью-Йорк: издательство Кембриджского университета; 1995. [Google Scholar]22. Фрицма Г.А., Дойг К., Родак Б.Ф. Гематология: клинические принципы и приложения. Сент-Луис: Elsevier Health Sciences; 2008. [Google Scholar]23. Ou X, Horstmeyer R, Zheng G, Yang C. Птихография Фурье с высокой числовой апертурой: принцип, реализация и характеристика. Выбрать Экспресс. 2015;23(3):3472–91. 10.1364/ОЭ.23.003472 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

лейкоцитов — обзор | ScienceDirect Topics

Семейства мультикопийных генов из-за сегментарных дупликаций: эволюция разных, но связанных функций

Гены HLA можно в общих чертах сгруппировать в два типа на основе функциональных и структурных особенностей: класс I и класс II.Филогенетический анализ различных генов HLA класса I и II предполагает, что они, вероятно, разошлись около 500 миллионов лет назад (млн лет назад) от общего предка, при этом разные локусы HLA класса II расходятся друг от друга примерно на 170–200 млн лет назад (Nei et al. др., 1997). Считается, что разные локусы HLA класса I разошлись позже, чем дупликация генов класса II, но молекула, подобная HLA класса I, вероятно, была частью «прото-MHC», учитывая существование MHC класса I, подобного молекулы, а не гены, подобные классу II, на других хромосомах, что предполагает существование предка до крупномасштабных дупликаций генома в эволюции позвоночных (обзор в Parham, 2015).

Локус HLA класса I HLA-F присутствовал в геноме приматов по крайней мере 46–66 млн лет назад, давая начало HLA-G и E, а затем HLA-A и B примерно 35–49 млн лет назад (Piontkivska and Nei, 2003) . Считается, что дублирование HLA-B, дающее начало HLA-C, произошло около 21–28 млн лет назад. Филогенетическая кластеризация последовательностей HLA и гомологичных последовательностей HLA приматов поддерживает эти времена расхождения. Например, ортологи HLA-E присутствуют у обезьян Старого и Нового Света, в то время как HLA-A и HLA-B общие с другими обезьянами и обезьянами Старого Света, а HLA-C общий только с шимпанзе, гориллой и орангутангом. Адамс и Парэм, 2001).Интересно, что в отличие от человека, многие из нечеловеческих приматов имеют дополнительные HLA-A и -B-подобные гены, которые, вероятно, являются клоноспецифичными и могут иметь неперекрывающиеся функции (Adams and Parham, 2001).

Ранние генетические исследования Nei et al. показали взаимосвязь между видами для разных генов HLA, а не тесную связь для разных генов внутри каждого вида (т. е. отдельные локусы образуют отдельные кластеры; как также показано на рис. 13.1 на основе доступных в настоящее время последовательностей HLA на сайте www.imgt.org) (Ней и др., 1997). Эта взаимосвязь предполагала ограниченные доказательства конверсии или рекомбинации межлокусных генов и того, что гены, вероятно, отражают способ эволюции рождения и смерти. В этой модели новые гены создаются путем дупликации генов, при этом некоторые из этих новых генов удаляются из региона или становятся нефункциональными в результате вредных мутаций; выжившие копии могут эволюционировать с развитием различных функций (Nei et al., 1997), что ясно наблюдается для генов HLA.

Рис 13.1. Филогенетический анализ последовательностей экзонов 2 и 3 класса I главного комплекса гистосовместимости (MHC) приматов с использованием метода соседнего соединения. Последовательности MHC получены с сайта www.imgt.org. Обезьяны включают Patr , Обыкновенный шимпанзе; Гого , Западная горилла; Попи , Борнейский орангутан; Папа , Бонобо; Хила Лар Гиббон. Обезьяны Старого Света включают Pacy , Yellow Baboon; Маму , макака-резус; Грива , Южный свинохвостый макак; Паан , Оливковый бабуин; ЧСА , Зеленая Обезьяна.Последовательности человеческого HLA класса I включают все аллели с двузначным разрешением. Полоса расстояний указывает замены/участок.

Гены HLA класса II кодируют гликопротеины, существующие в виде гетеродимера цепей α и β, кодируемых разными, но тесно связанными генами в MHC. Эти молекулы преимущественно экспрессируются на профессиональных антигенпрезентирующих клетках и участвуют в презентации внеклеточных антигенов хелперным Т-клеткам. Локусы включают весьма разнообразные гены HLA-DR, -DQ и менее разнообразные гены HLA-DM, -DP.Напротив, гены HLA класса I кодируют гликопротеины, состоящие из трех внеклеточных доменов, включая домены α1 и α2, образующие область связывания пептидов, и консервативный домен α3, нековалентно связанный с β2-микроглобулином, который кодируется на другой хромосоме. .

Гены HLA класса I могут быть дополнительно разделены на высокополиморфные классические гены класса Ia HLA-A, -B и -C, которые экспрессируются во всех ядерных клетках, и неклассические гены HLA класса Ib HLA-E, -G, и -F, которые являются относительно олигоморфными и обычно экспрессируются в определенных тканях или типах клеток.Существует также ряд псевдогенов HLA класса I (например, HLA-J). Классические белки класса Ia связаны с представлением собственных и чужих пептидов цитотоксическим Т-клеткам, и большая часть различий между аллелями сосредоточена в доменах, связывающих пептиды. Эти гликопротеины также действуют как лиганды для иммуноглобулиноподобных рецепторов (KIR) естественных киллеров (NK), но их склонность действовать в качестве лигандов KIR различается (Wilson et al., 2000; Trowsdale, 2001) только с подмножеством HLA-клеток. Аллели A и -B, способные связывать NK-рецепторы с аллелями HLA-C, вероятно, являются доминирующим лигандом рецептора NK-клеток.Эта двойная функциональность генов HLA класса I представляет собой две совместно эволюционирующие стратегии и отражает развитие неперекрывающихся функций с момента дупликации предковых генов HLA класса I.

Функциональная специализация близкородственных генов HLA класса I после дупликации также подтверждается исследованием, изучающим предпочтения связывания HLA класса I для пептидов, полученных из белков человека и различных семейств вирусов (Hertz et al., 2011). Анализ в этом исследовании показал, что предпочтение связывания аллелей HLA-A и тех линий HLA-B, которые предшествуют расщеплению человека и шимпанзе, отдают предпочтение консервативным эпитопам в белках человека и ДНК-вирусах, таких как Herpesviridae и Adenoviridae , в которых мимикрия хозяина является важным механизмом уклонения от иммунитета.Более длительная совместная эволюция с этими вирусами предполагает, что эта модель нацеливания будет соответствовать таким вирусам, использующим «дыры» в репертуаре зрелых Т-клеток, созданные тимусным негативным отбором аутореактивных Т-клеток (Louzoun et al., 2006; Vider-Shalit et al. al., 2007; Frankild et al., 2008), тогда как аллели HLA-B, как правило, эффективно нацелены на консервативные эпитопы в РНК-вирусах (включая специфичный для человека Paramyxoviridae ), чьи репликативные характеристики позволяют им дополнительно избегать HLA-ограниченных иммунитет за счет мутационного ускользания.Затем тот же анализ был использован на хорошо охарактеризованной когорте ВИЧ-1-инфицированных, чтобы показать, что эффективность связывания HLA-B (на основе генотипа HLA субъекта) с консервативными эпитопами Т-клеток сильно коррелирует с вирусной нагрузкой, что подтверждает известные иммунологические данные, показывающие ответы HLA-B, важны для определения естественного течения ВИЧ-инфекции (Kiepiela et al., 2007). Это и другие исследования предполагают различное эволюционное давление на локусы HLA класса I (Prugnolle et al., 2005; Watkins et al., 1992) и может отражать различные скорости изменений, в том числе за счет внутриаллельной рекомбинации (Piontkivska and Nei, 2003).

Функциональный репертуар неклассических белков класса I не был так хорошо охарактеризован. HLA-E демонстрирует наименьший полиморфизм среди локусов HLA класса I, имея в европеоидных популяциях только два аллеля, отличающихся одной аминокислотой (Ulbrecht et al., 1999). Открытие того, что HLA-E связывает консервативные строго ненамерные лидерные пептиды совместно экспрессирующихся HLA-A, -B, -C и -G и лигирует с ингибирующими CD94/NKG2A NK-рецепторами, позволяет предположить, что этот локус эволюционировал для мониторинга экспрессии HLA класса I, подавления из которых является важным механизмом уклонения от иммунного ответа многих патогенов (Borrego et al., 1998). Цитомегаловирус (CMV) разработал интересную контрмеру для функции иммунного надзора HLA-E, активно повышая экспрессию HLA-E (при этом подавляя экспрессию классического HLA класса I) (Tomasec et al., 2000; Wang et al. ., 2002) и загрузку вирусных пептидов, идентичных лидерным последовательностям HLA, на HLA-E посредством TAP-независимого механизма, что приводит к ингибированию NK-опосредованного лизиса клеток, инфицированных CMV (Wang et al., 2002). HLA-G также связан с иммуномодуляцией функции NK-клеток, особенно в контексте взаимодействия плода и матери, поскольку он может действовать как лиганд для другого типа ингибирующего рецептора NK-клеток ( KIR2DL4 ) (рассмотрено в Amodio et al. др., 2014).

Недавние данные предполагают новый элемент рестрикции HLA-E для Т-клеток посредством презентации неканонических пептидов, полученных из белков, связанных со стрессом и патогенами (обзор в Pietra et al., 2009). Например, исследования продемонстрировали HLA-E-рестриктированные антиген-специфические ответы CD8 + Т-клеток, активируемые через рецепторы αβ Т-клеток, при ряде инфекций, в том числе вызванных вирусом Эпштейна-Барр (EBV), Mycobacterium tuberculosis , Salmonella , вирус гепатита С (HCV) и против опухолей, экспрессирующих HLA-E (Pietra et al., 2010). Кроме того, HLA-E-рестриктированные регуляторные CD8 + Т-клетки подавляли активацию Т-клеток CD4 + , инфицированных вирусом иммунодефицита обезьян (SIV), ингибирующих передачу вируса в модели вакцины против ВИО макака (Andrieu et al., 2014). Эти наблюдения предполагают, что участие в функции NK и Т-клеток является особенностью классических и неклассических генов HLA класса I, но способ действия и вероятная степень участия во врожденном и адаптивном звеньях иммунного ответа различаются.

Подробное изучение процесса дупликации генов HLA класса I показывает, что гены HLA класса I и тесно связанные полиморфные гены MHC класса I, связанные с цепью (MIC), образуют часть сегментов, которые дуплицировались с течением времени, вероятно, благодаря ретроэлементам. включая эндогенные ретровирусы человека (Gaudieri et al., 1999a; Kulski et al., 1999). Этот процесс сегментарной дупликации в области MHC класса I привел к генерации наборов близкородственных семейств генов HLA и MIC, а в некоторых случаях к гаплотипам, имеющим специфические комбинации аллелей для этих семейств мультикопийных генов (обсуждается далее в этой главе). ).Однако в некоторых случаях сегментарные дупликации могут быть несовершенными или связаны с большими делециями, создающими нефункциональные генные продукты. Например, гаплотип HLA-B 48 в популяциях Восточной Азии содержит крупную делецию размером 100 т.п.н. в области между MICB и HLA-B, что приводит к нулевому аллелю MICA и преждевременной остановке MICB (Komatsu-Wakui et al. , 2001). Точно так же у шимпанзе в той же области имеется крупная делеция размером ~95 т.п.н., создающая один слитый ген MICA/MICB (Anzai et al., 2003). Другие крупные вставки/делеции встречаются у людей и других приматов в области, содержащей и окружающей от HLA-A до HLA-F (Watanabe et al., 1997), которая также содержит ряд псевдогенов HLA класса I и фрагментов генов, предполагающих недавнюю экспансию/сокращение. в области с неизвестными функциональными последствиями.

LOINC 49498-9 — Лейкоциты [число/объем] в крови по оценке

Термин Описание

В мире гематологии оценочные подсчеты клеток существовали для многих лун, и они сообщались либо качественно, либо количественно, и проводились строго по анализу мазка крови.

Мазок Расчетное количество лейкоцитов и тромбоцитов, которые не просто сообщаются как сниженные/адекватные/много, но фактически оцениваются в виде числового результата, такого как оценка 4 K/мм3 для WBC или 400 K/мм3 для тромбоцитов. Например, делать подсчет по retic, подсчитывая так много полей в оценке типа мазка.

Этот оценочный подсчет лейкоцитов является количественным подсчетом вручную. Сообщаем число.
См. лабораторную процедуру:

A. Оценка мазка для подсчета лейкоцитов:

1. Используйте масляный иммерсионный объектив 50X.
2. Подсчитайте количество как интактных, так и разрушенных лейкоцитов в каждом из 10 полей микроскопии в разных областях предметного стекла, где эритроциты слегка перекрываются. Разделите общее число на 10, чтобы установить среднее количество лейкоцитов/поле, и умножьте это среднее значение на 3000, чтобы получить расчетное количество лейкоцитов/мм³. Не округляйте среднее значение, например, если среднее значение равно 5,7, не округляйте до 6, а оставьте цифру на один знак после запятой для большей точности.
3. Если количественное количество лейкоцитов составляет 25 000 клеток/мм³.

III. ССЫЛКИ:

A. Атлас цветов и инструкция по морфологии клеток периферической крови, Барбара Х. О’Коннор, 1984, с. 20.
B. Принципы и процедуры, Барбара А. Браун, 6-е издание, 1993 г., с. 104.
Источник: Regentrief LOINC

Деталь Описание

LP14419-3   Лейкоциты
Лейкоциты или лейкоциты (лейкоциты) представляют собой иммунные клетки, которые борются с инфекцией, новообразованиями и другими воспалительными состояниями, а также опосредуют аллергические реакции.В кровотоке обычно присутствуют пять типов лейкоцитов, которые происходят из сходных стволовых клеток костного мозга. Пять типов лейкоцитов делятся на две группы в зависимости от наличия или отсутствия гранул в цитоплазме. Гранулоциты включают нейтрофилы, базофилы и эозинофилы. К негранулоцитам относятся лимфоциты и моноциты. Нейтрофилы борются с инфекцией, поглощая и переваривая бактерии. Эозинофилы и базофилы реагируют на аллергические реакции и способны поглощать комплексы антиген-антитело.Моноциты фагоцитируют бактерии и выделяют интерферон для стимуляции иммунной системы. Лимфоциты делятся на Т-клетки и В-клетки. Т-клеточный иммунитет является клеточным и включает активацию фагоцитов, а В-клеточный иммунитет использует антитела для борьбы с инфекцией. Как повышенное, так и низкое количество лейкоцитов может быть маркером инфекции и злокачественного новообразования, а низкое количество лейкоцитов связано с различными первичными и вторичными иммунодефицитами, в зависимости от типа (типов) лейкоцитов, выходящих за пределы допустимого диапазона. (Руководство Мосби по диагностическим и лабораторным тестам, Кэтлин Деска Пагана; Тимоти Джеймс Пагана, Элзевир Ст.Луи, Мо © 2010) Источник: Регенштриф LOINC

Расчетное количество лейкоцитов у птиц и рептилий

Автоматические счетчики клеток не используются для образцов крови птиц и рептилий, потому что ядросодержащие эритроциты у этих видов мешают точной оценке лейкоцитов. Вместо этого большинство лабораторий обрабатывают общий анализ крови птиц и рептилий путем подсчета окрашенных клеток на гематоцитометре. Недорогой и точной альтернативой является оценка лейкоцитов по мазкам крови.Лейкоциты птиц и рептилий равномерно распределены в стандартном мазке крови. Количество лейкоцитов можно получить с помощью следующего метода:

  1. Приготовьте свежие мазки крови . Мазки крови могут быть сделаны как традиционным, так и методом покровных стекол. Идеальные слайды сделаны из свежей цельной крови; ЭДТА или гепарин могут создавать артефакты образца.
  2. Установите объектив микроскопа на 40X . Сканируйте область, в которой клетки распределены равномерно и не перекрываются.
  3. Начните с подсчета всех лейкоцитов в первом поле . Малые лимфоциты могут напоминать тромбоциты, но тромбоциты будут иметь четкую область внутри клеточной мембраны. Если лейкоциты выходят за край поля, мысленно разделите поле пополам и подсчитайте только те краевые клетки, которые находятся на одной стороне поля. Избегайте подсчета поврежденных клеток. Вы также можете отметить признаки токсичности, кровяных паразитов и тип клеток для дифференциального подсчета.
  4. Продолжайте считать лейкоциты, пока не подсчитаете 10 полей , отмечая сумму в каждом поле отдельно.Разница между полями не должна превышать 10 %. При значительном отклонении вы можете «исключить» выбросы из подсчета и добавить еще одно поле. Если мазок маленький или плохого качества, вы можете подсчитать меньше полей, но подсчет будет не таким точным.
  5. Суммируйте количество всех 10 полей и умножьте на 200, чтобы получить общее количество лейкоцитов . Если вы насчитали менее 10 полей, используйте следующую формулу:
  6. Поскольку этот подсчет основан на относительном количестве лейкоцитов и эритроцитов, у пациентов с анемией подсчет должен быть скорректирован по следующей формуле:

Адаптировано из: Fudge, Alan M., (редактор): Лаборатория медицины птиц и экзотических домашних животных. Филадельфия, У.Б. Сондерс. 2000, стр. 9-15.

VSS-WEB-004-V01 12/10

В то время как мазок периферической крови показывает состояние зрелых клеток крови, мазок костного мозга можно использовать для оценки процесса кроветворения или образования клеток крови.

Активный костный мозг выглядит высококлеточным. Большинство развивающихся клеток станут эритроцитами, которые придают костному мозгу красный цвет.По этой причине активный костный мозг также известен как красный костный мозг. Со временем костный мозг становится менее активным, а его жирность увеличивается. Тогда его называют желтым костным мозгом.

Еще раз, есть несколько важных характеристик, которые следует учитывать при просмотре мазка костного мозга. К ним относятся:

Бластная клетка представляет собой плюрипотентную стволовую клетку, из которой происходят эритроциты, гранулоциты и лимфоциты. Из эритробластов развиваются эритроциты, из миелобластов – гранулоциты, из лимфобластов – лимфоциты.Однако все эти клетки кажутся идентичными — они большие, с круглыми или овальными ядрами, отчетливой ядерной мембраной, видимыми ядрышками и обильной голубой цитоплазмой. По мере дифференцировки бластных клеток полученные клетки могут быть отнесены к определенной клеточной линии.

Эритропоэз – это образование эритроцитов. В этой линии есть несколько узнаваемых стадий:

Гранулопоэз — это процесс развития лейкоцитов. Миелоидный ряд имеет наиболее характерную клеточную линию:

Эозинофилы и базофилы проходят последовательные стадии дифференцировки, очень похожие на нейтрофилы.Их специфические гранулы также образуются на стадии миелоцитов.

Происхождение тромбоцитов аналогично. Крупные, многодольчатые промегакариоциты развиваются в мегакариоциты, которые являются самыми крупными клетками костного мозга (от 30 до 40 мкм). Тромбоциты образуются в результате сегментации этих клеток.

Моноциты развиваются из промоноцитов, а лимфоциты развиваются из пролимфоцитов.