10Май

Мочи расшифровка: Ваш браузер устарел

Содержание

Сдать анализ мочи животного: как собрать, расшифровка

В современной ветеринарной медицине без диагностики – никуда! Ведь многие болезни имеют схожие признаки. Это касается и болезней мочевой системы. Далеко не все они выглядят так, как написано в книжках. Поэтому ветеринарный врач может попросить сдать анализ питомца. Что же врач видит на бланке?

При проведении общего анализа мочи проводится оценка её физико-химических свойств и микроскопия осадка. Эти данные могут много дать для диагностики состояния мочевого пузыря и почек. К тому же на результаты анализа влияют не только болезни животного, но и другие факторы. Это вид животного (кошка, собака, кролик), его пол, возраст, тип кормления (натуральное или готовый корм), а также физиологическое состояние питомца. Так, при беременности или физических нагрузках в моче появляется белок.

Что можно определить по физико-химическим свойствам мочи

Количество мочи зависит от того, сколько воды получает животное, а также от концентрационной способности почек. Например, при сахарном диабете и нефрите больной питомец пьёт много воды и часто, обильно мочится.

  • Цвет мочи определяется растворёнными в ней окрашивающими веществами, их концентрацией. В норме моча у кошек и собак имеет различные оттенки жёлтого – от соломенного да канареечного. Конкретный оттенок зависит от типа питания. При пониженной способности почек концентрировать мочу, её оттенок меняется в светлую сторону. При обезвоживании моча темнеет. Примеси крови и свободного гемоглобина придают ей красноватый или коричневатый оттенок. При некоторых патологиях печени в моче появляется билирубин, что меняет её цвет на зеленовато-коричневый или даже тёмно-коричневый. Некоторые лекарства могут влиять на цвет мочи, придавая её оранжевый, кирпично-красный или зеленоватый оттенок.

В норме моча у животных прозрачная. Мутность ей придают различные примеси, которые изучают при микроскопии осадка.

  • Относительная плотность мочи у здоровых собак варьирует от 1,020 до 1,025 г/л, а у кошек – до 1,030 г/л. Изменения плотности мочи можно увидеть только при различных болезнях. Пониженная плотность мочи сопутствует хроническим заболеваниям почек, а также бывает при повышенном артериальном давлении и некоторых болезнях матки. Плотность повышается при кровопотере, рвоте, диарее, эндокринологических заболеваниях. Существую препараты, изменяющие эти цифры в большую или меньшую сторону.
  • pH указывает на реакцию среды. У здоровых кошек и собак моча имеет слабокислую реакцию (pH 6,3-6,8) и изменяется при многих болезнях. Например, при инфекциях мочевого пузыря pH мочи смещается в щелочную сторону.
  • Белок, сахар и кетоновые тела в нормальной моче отсутствуют. Однако их появление в анализе может указывать не только на болезнь, но и на изменение физиологического состояния животного. Например, кошки при стрессе способны выделять небольшое количество сахара с мочой. Поэтому анализ обычно собирают в спокойной домашней обстановке.

Микроскопия осадка – что видно на стекле

Моча здоровых собак и кошек содержит небольшое количество клеток, которые вышелушиваются со стенок почечной лоханки, мочеточника, мочевого пузыря и уретры, а также единичные лейкоциты. При воспалениях различной природы клеток становится в разы больше. Цилиндры в моче появляются при серьёзном повреждении почек. Например, при отравлении. Именно состав цилиндра может подсказать врачу, насколько тяжело протекает процесс.

Кристаллы – это осадок солей в моче. Наиболее часто встречаются струвиты (триппельфосфаты), которые появляются в моче при цистите, рвоте, а также избыточным кормлении рыбой. Оксалаты (соли щавелевой кислоты) встречаются реже. Они присутствуют в моче при сахарном диабете или длительном голодании. Также существует множество других типов кристаллов, появляющихся при различных патологиях.

Наличие в моче струвитов, оксалатов и уратов может свидетельствовать о мочекаменной болезни. Однако для постановки столь тяжёлого диагноза важно оценивать количество кристаллов в моче, а также наличие осадка в мочевом пузыре, которое определяют по УЗИ.

Микробы появляются в моче только при инфекциях.

Как собрать анализ мочи у животного

Для того чтобы правильно собрать мочу, нужно подготовить специальную тару. Это стерильная пробирка или баночка, приобрести которую можно в любой аптеке.

У кошек моча собирается из лотка, который перед этим нужно хорошо помыть. Ведь в загрязнённом лотке уже есть кристаллы и микробы.

Собранную мочу нужно доставить в лабораторию в течение двух часов. Если тара с анализами слишком долго стояла, моча мутнеет, даже если она собрана у здорового животного. Также в ней в значительных количествах могут оседать струвиты. Это может повлиять на постановку диагноза.

Для тех, у кого не получается быстро доставить мочу на анализ, продаются специальные пробирки с консервантом. В них моча может храниться в холодильнике до суток.

Бакпосев мочи + антибиотикограмма — расшифровка анализа, норма

Общая характеристика

Воспалительные заболевания мочевыделительной системы человека, вызываемые инфекционными микроорганизмами могут иметь рецидивирующее течение с развитием осложнений. Поражаются уретра и мочевой пузырь, инфекция может переходить на верхние отделы, поражая мочеточники и почки. В норме мочевой тракт является стерильным, за исключением дистального отдела уретры, который заселен бактериями с кожных покровов промежности, а у женщин – и микроорганизмами с вульвы. Исследование мочи направлено на выделение возбудителя заболевания и на количественное определение степени бактериурии. Возбудителями воспалительных процессов в мочевой системе наиболее часто являются условно-патогенные бактерии Escherichia coil, S. faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Citrobacter, Klebsiella pneumoniae, Serratia, несколько реже – Staphylococcus aures, S. epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Streptococcus pyogenes. Развитию инфекций мочевыводящих путей также могут способствовать структурные и неврологическиенарушения, которые мешают нормальному оттоку мочи, и системные заболевания (например, сахарный диабет и неоплазии). Основной задачей при интерпретации полученных данных бакисследования является доказательство этиологической роли условно-патогенных микроорганизмов. Учитывают комплекс тестов: степень бактериурии, вид выделенных культур, повторность их выделения в процессе заболевания, присутствие в моче монокультуры или ассоциации микроорганизмов. Степень бактериурии позволяет дифференцировать инфекционный процесс в мочевых путях от контаминации мочи нормальной микрофлорой. С этой целью используют следующие критерии: степень бактериурии, не превышающая 10
3
микробных клеток в 1 мл мочи, свидетельствует об отсутствии воспалительного процесса и обычно является результатом контаминации мочи.
Аналитическая чувствительность бак. посева мочи составляет 103 КОЕ/г, т.е. если количество микроорганизмов в данном материале на момент исследования ниже этой чувствительности, то, соответственно, роста на питательной среде не будет.

Показания для назначения

1. Инфекции мочевыводящих путей.
2. Контроль после лечения (на 5 — 7 день после отмены антибиотиков или уросептиков).

Маркер

Оценка наличия возбудителей инфекции в исследуемом биоматериале с определением чуствительности к антибиотикам.

Клиническая значимость

Комплексная оценка бактериологического состава исследуемого биоматериала с определением чуствительности к антибиотикам.


Состав показателей:

Бак. посев мочи + антибиотикограмма

: Микробиологический

Диапазон измерений: 0-0
Единица измерения: Колониеобразующих единиц на грамм

Выполнение возможно на биоматериалах:

Биологический материал

Условия доставки

Контейнер

Объем

моча

Условия доставки:

24 час. при температуре от 20 до 25 градусов Цельсия

Контейнер:

Уриновакуэт с борной кислотой

Объем:

9 Миллилитров

моча-порция 1

Условия доставки:

24 час. при температуре от 20 до 25 градусов Цельсия

Контейнер:

Уриновакуэт с борной кислотой

Объем:

9 Миллилитров

моча-порция 2

Условия доставки:

24 час. при температуре от 20 до 25 градусов Цельсия

Контейнер:

Уриновакуэт с борной кислотой

Объем:

9 Миллилитров

моча-порция 3

Условия доставки:

24 час. при температуре от 20 до 25 градусов Цельсия

Контейнер:

Уриновакуэт с борной кислотой

Объем:

9 Миллилитров

Правила подготовки пациента

Стандартные условия подготовки (если иное не определено врачом): За 24 часа Прекратить прием местных антибактериальных и антисептических препаратов. Непосредственно перед обследованием провести туалет наружных половых органов. Примечания: После тщательного туалета наружных половых органов среднюю порцию первой утренней мочи собрать в стерильный контейнер. Из стерильного контейнера в соответствии с Инструкцией мочу перенести в транспортную пробирку с консервантом борная кислота (пробирка Vacuette Bac). Доставить в лабораторию при температуре 20-25 °С в течение 24 часов, в стерильном контейнере — в течение 2 часов.

Вы можете добавить данное исследование в корзину на этой странице

Интерференция:

  • Приём антимикробных препаратов оказывает влияние на достоверность результата.
  • Приём антимикробных препаратов оказывает влияние на достоверность результата.

Интерпретация:

  • Оценивается факт обнаружения микроорганизма, активность роста и характер антибиотикограммы.

Клинический анализ мочи, норма, расшифровка основных показателей » Лахта Клиника

Введение

В диагностическом плане кровь и моча – важнейшие, наиболее информативные биологические жидкости человеческого организма. Поэтому общий (клинический) анализ мочи и клинический анализ крови являются наиболее востребованными исследованиями из всех существующих сегодня методов диагностики.

Гораздо легче перечислить заболевания и состояния, при которых лабораторный анализ мочи не нужен (список получился бы очень коротким и касался бы, в основном, пограничных расстройств психики… да и то еще не факт!), чем обозреть бесчисленные медицинские ситуации, где такой анализ является абсолютным показанием и назначается в обязательном порядке.

Состав мочи

Моча – результат функционирования экскреторной (выделительной, выводящей) системы. Образуется в почках из кровяной плазмы, в процессе т.н. ультрафильтрации, затем по мочевым путям выводится из организма. До 96% состава мочи – вода. Сухая фракция, на долю которой приходится оставшиеся проценты, представлена отработанными продуктами белкового метаболизма (мочевина, аммиак, креатинин и т.д.), различными солями, токсическими соединениями, эпителиальными клетками и следовыми факторами клеточного распада.

Заметим попутно, что ничего полезного в моче нет; организму для того и нужна почечная ультрафильтрация, чтобы своевременно и регулярно избавляться от вредоносных, опасных или, в лучшем случае, бесполезных веществ. Поэтому уринотерапия (лечение мочой) с точки зрения природы является чистым абсурдом, – в любых своих модификациях, будь то пероральные или местные. Можно, конечно, свято верить в целебные свойства ядовитого жидкого шлака, можно обладать очень высокой внушаемостью, однако «лечение» уриной вскоре оборачивается тяжелыми отравлениями и рядом других последствий, которые описаны многократно и изучены подробно, – тогда как польза, хотя бы психотерапевтическая, от подобного применения мочи объективно не была подтверждена нигде и никем.

Интерпретация результатов

Следует понимать, что каждый из приведенных здесь показателей (а приведены лишь основные) в действительности представляет собой куда более сложную количественную и/или качественную характеристику, для которой разработаны нормативные и диагностические критерии, а также методики интерпретации с перекрестным учетом всех прочих показателей. Вообще, интерпретация клинического анализа мочи, – при всей рутинности, стандартности и распространенности этого исследования, – очень непростая задача, требующая не только медицинского образования, но и значительного диагностического и терапевтического опыта. Поэтому доверимся хоть в чем-то не интернету, а сотрудникам лаборатории и лечащим врачам: какая бы то ни было самодиагностика на основании результатов анализа мочи, пусть даже самая приблизительная и оценочная, для неспециалиста совершенно недоступна.

Подготовка к исследованию

Как правило, для анализа собирается натощак утренняя порция мочи. Необходимо прислушаться к рекомендациям, которые подробно разъясняются пациенту перед каждым таким анализом: обязательна предварительная гигиена наружных половых органов; накануне не следует употреблять определенные пищевые продукты (см. выше), по возможности (и по согласованию с врачом) временно отменяется прием некоторых медикаментов; перед сбором материала следует воздержаться от тяжелых физических нагрузок и половых контактов; если время терпит, женщинам не следует сдавать анализ во время менструации, и т.д. Тем самым обеспечивается максимальная точность, достоверность и полнота результатов, которые зачастую имеют неоценимое диагностическое значение и не могут быть заменены никаким иным исследованием.

Анализ ХТИ (справка ХТИ)

 

Кому и для чего нужна справка ХТИ? 

Химико-токсикологический анализ может понадобиться в различных ситуациях, например, при расследовании обстоятельств ДТП, уголовного дела или в любых других ситуациях, когда необходимо оценить адекватность человека.

Однако чаще всего справка ХТИ требуется в обычных «мирных» обстоятельствах. Документ прежде всего необходим для получения разрешения на оружие:

  • Физическим лицам (для охоты, самообороны)
  • Сотрудникам ЧОП (частным охранникам)
  • Преподавателям специализированных курсов по пользованию оружием. 

 

Какие вещества выявляет ХТИ? 

В случае положительного результата в справке ХТИ указывается подробная расшифровка о выявленных веществах и их концентрациях в биоматериале. 
Список запрещенных веществ включает в себя следующие их разновидности:

  • Алкоголь
  • Опиаты (кокаин, героин, морфин, дезоморфин и т.д.)
  • Барбитураты (фенобарбитал, барбамил, циклобарбитал)
  • Бензодиазепины (диазепам, реланиум, нитразепам)
  • Амфетамин, метамфетамин, метилендиоксиметамфетамин (МДМА, MDMA, «экстази»)
  • Канна-биноиды (марихуана, гашиш)
  • Опиоиды (трамадол, фенициклидин, метадон) и др.

В отдельных случаях экспертиза способна показать ложноположительный результат. Необходимо исключить употребление некоторых видов лекарственных препаратов:

  • валокордин
  • корвалол
  • фенобарбитал
  • нурофен плюс
  • пенталгин
  • пенталгин –Н
  • коделак
  • кодипронт
  • кодтерпин
  • седал –М
  • седалгин нео
  • терпинкод
  • тетралгин
  • каффетин и аналоги.

 

Особенности сбора биоматериала для исследования

Проведение анализа ХТИ требует соблюдение ряда условий:

  • Объем собранной мочи должен быть не менее 50 мл
  • Контейнер должен быть стерильным и герметичным, объемом не более 200 мл
  • Сроки предоставления мочи в лабораторию не должны превышать 1 суток с момента сбора. 

Очень важно, чтобы анализ проводился в легальной лаборатории, обладающей правом на осуществление такого вида деятельности. Медицинское учреждение, выполняющее экспертизу, обязано иметь лицензию. Справка ХТИ должна оформляться на установленном бланке, заверяться подписями и печатями лаборатории. В противном случае документ будет считаться недействительным. 

 

Сколько времени наркотики сохраняются в моче? 

Сроки обнаружения запрещенных веществ зависят от многих факторов, включая тип самого вещества, его дозы и частоты употребления, веса человека и т.д. При этом существуют подтверждённые временные рамки сохранения наркотиков в организме, позволяющие проводить анализ с высокой степенью точности.

Так, с наибольшей вероятностью следы включений определятся:

  • Для амфетаминов – в течение 2-х дней
  • Для кокаина и героина – в течение 3-х дней
  • Для марихуаны – в течение 4-х дней. 

Цифры справедливы в случае нерегулярного (однократного) употребления наркотического вещества. При постоянном приеме следы наркотика будут присутствовать в организме дольше. 

Оформление справки на оружие в Санкт-Петербурге почти всегда требует отдельного посещения специализированной лаборатории для сдачи анализа ХТИ. Однако такая необходимость отсутствует при обращении в центры «Медкомиссия №1». Мы берем материал на месте и отправляем его в лабораторию самостоятельно. 

Филиалы «Медкомиссия №1» открыты в 8 районах города и обладают всеми необходимыми лицензиями. Справки, выданные в наших центрах – официальные документы, оформленные в полном соответствии с законодательством РФ.

Подробнее об оформлении оружейной справки можно узнать на этой странице или по телефону +7 (812) 380-82-54

Порядок и сроки оформления, перечень обследований, стоимость оружейной справки >>>

Анализ мочи кошки: как взять, расшифровка анализа

В ветеринарной лаборатории проводится ряд исследований, включающий в себя оценку физико-химических свойств пробы мочи кошки, а также микроскопирование осадка.

Плотность мочи (удельный вес) определяется специальным устройством (ареометром) и позволяет судить о функциональной способности почек, прочих патологических состояний органов и возможных эндокринных расстройствах.

Далее ветеринар-лаборант специальными исследованиями оценивает химические свойства образца мочи кота. Для диагностики тех или иных заболеваний ветеринарному врачу необходимо знать рН мочи (кислотность) а также иметь представление о наличии или отсутствии в анализе мочи кошки таких веществ, как белок, сахар, билирубин, кетоновые тела, нитриты, кровь и гемоглобин.

Микроскопия осадка мочи проводится для определения наличия в моче клеток или иных продуктов воспаления, клеток крови, кристаллов солей, а также микрофлоры. Для этого необходимо открутить в специальной центрифуге пробирку с мочой, слить надосадочную жидкость и исследовать под микроскопом осадившиеся под действием силы тяжести на дно пробирки клетки. В зависимости от локализации и тяжести воспалительных процессов в осадке мочи могут обнаруживаться эритроциты, лейкоциты, клетки мочевого пузыря, мочевыводящих путей и даже эпителий почек. Также в осадке можно отмечать наличие белковых цилиндров, кристаллов солей (триппельфосфаты, оксалаты, ураты), бактерии (кокки, палочки) и грибки, у некастрированных котов — спермии.

Значительное количество клеток в осадке мочи — явный признак патологического процесса в организме. В норме образец мочи здоровой кошки может содержать лишь единичные клетки, допустимы также посторонние включения, попавшие из окружающей среды при взятии образца. Поэтому при сдаче мочи кошки на анализ владельцу нужно обязательно уточнить, каким способом был взят образец.

Не секрет, что наши любимые питомцы семейства кошачьих из-за определенных особенностей организма очень подвержены заболеваниям почек и мочевыводящих путей.

Мы рекомендуем сдавать анализ мочи кошки или кота не реже раза в год, даже если животное не испытывает затруднений при мочеиспускании. Своевременная диагностика на ранних стадиях позволит предотвратить тяжелые проявления заболеваний животного и сэкономить владельцу финансовые средства на лечение и уход.

Расшифровка анализа трехстаканной пробы мочи

Расшифровка анализа трех-стаканной пробы мочи


Биологическую жидкость, которую вырабатывают почки и выделяют органы мочеполовой системы, называют мочой (или уриной). Ее исследование используют в медицинской практике для диагностирования происходящих в человеческом организме патологических процессов.


Для этих целей существуют множество различных лабораторных методов, наиболее специфичным и информативным считается трех-стаканная проба урины. Эта дополнительная дифференциальная методика позволяет определить локализацию воспалительной реакции в отделах мочевыделительной системы.

С помощью данного исследования можно оценить функциональную деятельность уретры, мочеточников, простаты, мочевого пузыря, почек. Анализ представляет собой лабораторное изучение трех порций мочи, собранных за одно мочеиспускание.


Показания к проведению

Практикующие специалисты – терапевты, урологи, нефрологи назначают трех-стаканное исследование мочи при:

  1. подозрении на воспалительный процесс в мочеполовых органах – уретрит, острый бактериальный или хронический простатит, цистит, пиелонефрит;
  2. онкологических заболеваниях мочевого пузыря, почек, простаты;
  3. жалобах пациентов на болевые ощущения, чувство жжения и рези при микции (опорожнении мочевого пузыря), частые позывы к мочеиспусканию;
  4. наличии крови и гноя в моче;
  5. обнаружении большого количества лейкоцитов в общеклиническом анализе мочи.

Подготовка и методика проведения анализа

Биологический материал для исследования – первая утренняя порция мочи. Для получения точных данных анализа, за сутки до собирания биоматериала, пациенту необходимо выполнить некоторые условия:

  1. Исключить из рациона питания продукты, окрашивающие урину (шпинат, ревень, свеклу, тыкву, морковь) и обладающие мочегонным эффектом (например, арбуз).
  2. Отменить лекарственные препараты, содержащие пищевые красители, мочегонные и антибактериальные средства.
  3. Ограничить курение, употребление кофе и большого количества жидкости.
  4. Запрещено принимать алкоголь.
  5. Приобрести в аптечной сети три специальных стерильных контейнера и подписать их – I, II, III.

Перед собиранием образца биоматериала необходимо произвести туалет гениталий без использования бактерицидных средств. Затем нужно помочиться в I контейнер — около 25%, во II– 50%, остальную часть порции – в III (в каждой пробе должно быть не менее 15 мл мочи). Далее образцы биоматериала как можно скорее доставляют в лабораторный центр. В лабораторных условиях проводится общеклиническое исследование с микроскопией осадка каждой порции урины.

При подозрении у мужчины на простатит или аденому простаты сбор биоматериала проводится с массажем предстательной железы. Манипуляция проводится в медицинском центре квалифицированным специалистом.


Норма и отклонения

В норме урина:

  • прозрачная, имеет соломенно-желтый цвет;
  • белок, эритроциты, бактерии – отсутствуют;
  • количество лейкоцитов и клеток плоского эпителия колеблется от 1 до 4 в п/зр;
  • удельный вес – от 1006 до 1026 г/л.

Для дифференциального диагностирования воспалительных процессов диагностическое значение имеет не только обнаружение в моче большого количества эритроцитов и лейкоцитов, но и место их нахождения – в первой, второй или третьей порции:

  • I проба выявляет патологии уретры;
  • II проба указывает на воспаление мочевого пузыря;
  • отклонения в III пробе наблюдаются при локализации патологического процесса в простате или шейке мочевого пузыря.

Как расшифровать результат анализа


  1. Повышение численности лейкоцитов в I пробе и нормальных показателях во II и III характерно для воспаления мочевыводящего канала. Наличие в ней эритроцитов наблюдается при онкологических патологиях, патологическом сужении наружного или внутреннего просвета уретры.
  2. Увеличение количества лейкоцитов в III порции и норме в I и II указывает на простатит.
  3. Повышение лейкоцитов в трех порциях свидетельствует о пиелонефрите или цистите.
  4. Большое количество лейкоцитов в I и III пробе и нормальном анализе во II наблюдается при сочетании воспалительного процесса в предстательной железе и уретре.

Тест на 10 наркотиков: амф., мар., морф., мет., барб., бенз., кокаин, фенцикл., метадон, МДМА

Тест-панель предназначена для качественного определения в моче человека следующих специфических наркотиков и их метаболитов: амфетамин (АМP), марихуана (THC), морфин (MOP), метамфетамин (МЕТ), барбитураты (BAR), бензодиазепины (BZO), кокаин (COC), фенциклидин (РСР), метадон (MTD), экстази (МDМА).

СБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦА

Собрать образец мочи в специальный стаканчик. Образцы мочи можно охладить до 2-8°C и хранить до 48 часов. Для более длительного хранения заморозить образцы (− 20°C или ниже). Перед тестированием следует заранее вынуть охлажденные или замороженные образцы, чтобы они приняли комнатную температуру.

Для тестирования использовать только прозрачные образцы мочи.

ПРОВЕДЕНИЕ ТЕСТИРОВАНИЯ

Тест следует проводить при комнатной температуре (18ºC − 30ºC).

Вскрыть запаянный пакет, потянув за надрезанный край.

Достать тест из пакета.

Погрузить абсорбирующий конец в образец мочи приблизительно на 10 секунд.

Следует удостовериться, чтобы уровень мочи не оказался выше отметки “MAX”, нанесенной на лицевую сторону теста.

Положите тест плоской стороной на чистую, сухую, негигроскопичную поверхность.

На 5-й минуте зафиксируйте результат.

Не считывайте результат по истечении 10 минут.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Положительный (+)

Бледно-розовая полоса видна в каждой контрольной зоне. В зоне нанесения образца цветная полоса не появляется. Это указывает на положительный результат наличия соответствующего наркотического вещества на той конкретной тестовой зоне.

Отрицательный (-)

Бледно-розовая полоса видна в каждой контрольной зоне и в соответствующей тестовой зоне. Это указывает на то, что концентрация соответствующего наркотического вещества в той тестовой зоне ниже нуля или предела обнаружения теста.

Недействительный

Если цветная полоса не видна на каждой контрольной зоне или видна только на всех тестовых зонах, тест является недействительным. Необходимо провести другой тест, чтобы перепроверить образец. Свяжитесь с дистрибьютором или магазином, где вы купили продукт, указав номер партии.

Примечание:

Интенсивность цвета или ширина линии не имеют значения.

ОГРАНИЧЕНИЯ ПРОЦЕДУРЫ

  • Этот тест был разработан только для тестирования образцов мочи. Эффективность теста с использованием других образцов не обоснована.
  • Фальсифицированные образцы мочи могут привести к ошибочным результатам. Сильные окисляющие средства, такие как хлорная известь (гипохлорит) могут окислять образцы тестируемого материала. Если есть подозрения на фальсификацию, возьмите новый образец.
  • Этот тест является качественным скринингом.
  • Тест не предназначен для количественного определения концентрации наркотических веществ или уровня интоксикации.
  • Возможно, что технические либо процедурные ошибки, а также другие интерферирующие вещества в образце могут привести к ошибочным результатам.
  • Отрицательный результат не обязательно указывает на отсутствие наркотиков в моче. Отрицательные результаты могут быть получены, когда концентрация наркотического вещества ниже порогового уровня (чувствительности теста).
  • Тест-система не отличает наркотические вещества от некоторых лекарственных препаратов. Положительный результат может быть получен от некоторых пищевых продуктов или пищевых добавок.

Количественное определение CK20 и IGF2 в моче для неинвазивного обнаружения рака мочевого пузыря

Цель: Ранее предполагалось, что цитокератин 20 (CK20) и инсулиноподобный фактор роста 2 (IGF2) повышены в клинических образцах пациентов с раком мочевого пузыря (BCa). Проверочное исследование с двумя когортами было использовано для оценки релевантности обнаружения РМЖ путем количественного определения обоих маркеров в образцах мочи.Их диагностическая ценность оценивалась в сравнении с цитологическим исследованием мочеиспускательного канала (VUC).

Методы: Выделение РНК проводили с использованием клеточных осадков образцов мочи 196/103 гистологически положительных пациентов с РМЖ, а также 97/50 контрольных субъектов для тестовой (TC) и валидационной когорты (VC) соответственно. Уровни транскриптов CK20 и IGF2 в моче определяли с помощью количественной ПЦР.

Результаты: Относительные уровни транскриптов были значительно повышены в 3,4/11 раз для CK20 и в 188/64 раза для IGF2 (p <0,001) в осадках мочи пациентов с РМЖ по сравнению с контрольной группой в ОК и VC соответственно. В комбинированном анализе результирующая чувствительность (SN) (SN TC : 77,9; SN VC : 90,3%) и специфичность (SP) (SP TC : 88,0; SP VC : 84.0%) были аналогичны VUC. Чувствительность VUC в комбинации с CK20 и IGF2 была значительно повышена (SN TC : 94,6; SN VC : 93,2%), а специфичность снижена (SP TC : 72,0; SP VC : 82,0%) по сравнению с только на VUC в тестовой и проверочной когорте.

Выводы: Уровни транскрипта IGF2 и CK20 позволили обнаружить BCa с диагностической эффективностью, аналогичной VUC.Комбинированный анализ цитологического анализа мочеиспускания вместе с измененными уровнями транскриптов CK20 и IGF2 повышал чувствительность, но не улучшал общую производительность теста.

Ключевые слова: цитокератин 20; инсулиноподобный фактор роста II; КРТ20; Онкомаркер; моча; Уротелиальная карцинома.

1699- Дайан Ньюман (моча не уходит)

Дайан Ньюман : Добро пожаловать.Я Дайан Ньюман. Я практикующая медсестра. Я также являюсь специалистом по недержанию мочи и специализируюсь на дисфункции тазового дна. Я практикую в области урологии более 35 лет. Я также с гордостью сообщаю вам, что являюсь редактором Центра здоровья мочевого пузыря на сайте UroToday.com. В рамках этого центра я создал подцентры ресурсов для людей, которые заходят на наш веб-сайт UroToday и хотят узнать об управлении мочевым пузырем. Что я обнаружил в урологии, так это очень мало информации о том, как вести пациентов с задержкой мочи или неполным опорожнением мочевого пузыря и как вести их с такими катетерами, как постоянный катетер, периодическая катетеризация и наружные катетеры.Поэтому, если вы зайдете на наш веб-сайт, вы найдете ресурсный центр по ним, и он предоставляет много информации. Здесь вы найдете дополнительную информацию о постоянных мочевых катетерах. И я хочу представить, что делать, когда эта моча не уходит.

Вы встречаете пациента, возможно, в больнице или на дому, или члены семьи звонят вам, вы патронажная медсестра и говорите: «Эй, катетер моего отца не дренируется. Что мне делать?» Или вы можете находиться в доме престарелых с пациентом, у которого вставлен катетер в течение длительного периода времени, и вы обнаружите, что он не дренируется.Итак, что я хочу дать вам, так это то, в чем может быть проблема и какие действия вы можете предпринять. Если вы можете, и если у вас есть портативный сканер мочевого пузыря, вы должны сканировать мочевой пузырь. Потому что, если моча не стекает по катетеру, скажем, в дренажный мешок, вам нужно действительно убедиться, что моча действительно находится в мочевом пузыре. Один из способов подтвердить это — сканирование мочевого пузыря. Если в мочевом пузыре есть остаточная моча, вы знаете, что в катетерной системе есть некоторая закупорка.Он может быть либо выше в катетере Фолея, либо ниже в дренажной системе.

Вы хотите проверить положение дренажного мешка и трубки, и я хочу это подчеркнуть, но очень часто она перегибается. Трубка может быть под ногой пациента, а может быть буквально под колесами инвалидной коляски, и она в основном перекручена, и поэтому не дренирует. Его также можно скрутить. Итак, вы хотите, возможно, отрегулировать положение мешка, но на самом деле вы хотите следить за этим катетером, конечно, с хорошей гигиеной высокого класса, вы хотите надеть перчатки.Вы действительно хотите проследить этот катетер от порта, где он прикреплен к дренажной трубке, до самого мешка, чтобы убедиться, что в системе нет препятствий для свободного прохождения. Он также может быть в промежности, особенно у женщин, он может быть перекручен, поэтому вы также должны проверить это, насколько он вставлен.

Слизистая оболочка мочевого пузыря может загораживать отверстия катетера. Если у вас был постоянный катетер в течение длительного периода времени, емкость мочевого пузыря действительно уменьшилась до размера этого 10-кубового баллона.И на самом деле слизистая оболочка мочевого пузыря, прокладывающая мышцу мочевого пузыря, может на самом деле загораживать глаза. Так что просто чтобы убрать эту слизистую оболочку мочевого пузыря с тех глаз, которые помнит, отверстия — это место, где моча стекает в катетер. Вы можете переместить мешок с катетером выше уровня мочевого пузыря, чтобы уменьшить давление всасывания, а затем, конечно, только на несколько секунд и снова опустить его.

Это также может быть связано с тем, что есть бактерии, и это могут быть отложения, минералы, кристаллы, которые могут блокировать отверстия мочевого пузыря.Я предлагаю вам осторожно доить катетер по всей его длине. Если он по-прежнему не сливается, возможно, вы действительно хотите изменить всю систему. И что вы обнаружите, так это то, что на самом деле он начинает стекать, потому что, возможно, по какой-то причине он был там слишком долго и, возможно, у него слишком много отложений вокруг отверстий, которые позволяют моче стекать. А у меня на той стороне коробка там по поводу накипи и засора. И одному я всегда учу медсестер, которые меняют катетеры, может быть, каждые 30 дней, что является практикой, которая действительно началась только из-за возмещения расходов.Но некоторые пациенты могут блокироваться раньше, а это значит, что они начинают реагировать на этот катетер, и им требуется новая смена системы через три или две недели. Таким образом, вам нужно определить, насколько это может происходить слишком часто, и вам нужно изменить этот изменяющийся график на более частый интервал.

Это могло быть снова, заблокировано застрявшим стулом. Есть много проблем, которые мы наблюдаем из-за закупорки стула, особенно у пожилых людей или у тех, кто возвращается домой после операции с постоянным катетером и принимает опиоиды, скажем, такие как оксикодон или что-то еще, что вызывает запоры, и у них есть закупорка стула. .Что вам нужно сделать, так это сменить катетер, снять воздействие с этого человека, а затем, конечно же, перевести его на режим кишечника.

Там могут быть камни, и у меня было много случаев пациентов, у которых были катетеры в течение двух, трех, пяти, десяти лет, у которых действительно развились камни в мочевом пузыре. И в основном эти камни блокируют отверстия и не позволяют моче стекать. И именно поэтому я действительно рекомендую пациентам проходить цистоскопию, по крайней мере, каждые один-два года, потому что чем дольше у вас есть катетер, тем больше вероятность того, что у вас появятся камни, конкременты, которые в основном образуются в мочевом пузыре.

Если это не необъяснимо, я всегда говорю, что вы пробуете вещи, просто меняете катетер, записывайте и смотрите, возможно, вам нужно изменить этот интервал между катетером, сделать его короче, чтобы вы меняли чаще, вы меняете его до того, как эта блокировка может произойти.

Еще одна вещь, которую следует учитывать, это то, что иногда закупорка происходит часто из-за аллергии на латекс. Приобретенная аллергия на латекс наблюдается у многих урологических пациентов, потому что мы используем много продуктов с латексом.Так что, возможно, смените катетер на полностью силиконовый. Мне очень не нравится, когда вы переходите с 14 французов, но это может быть необходимо для некоторых пациентов. Так что вам может понадобиться изменить размер катетера. Другой способ, если вы думаете, что это закупорка, побудите этого человека увеличить ежедневное потребление жидкости.

И затем, конечно, в конечном итоге избавиться от катетера, попробовать какой-либо другой вид альтернативного лечения мочевого пузыря, например, прерывистую катетеризацию, если у них есть задержка мочи или если у них есть катетеры в связи с недержанием мочи, что является нет показаний, но мы видим пациентов с постоянными катетерами в связи с недержанием мочи.Рассмотрите некоторые другие альтернативные методы, такие как наружный катетер у пациентов мужского пола. Спасибо большое.

Использование экспрессии генов из осадка мочи для диагностики рака предстательной железы: разработка нового мультиплексного анализа мочи на мРНК и проверка существующих биомаркеров | BMC Cancer

  • Stamey TA, Caldwell M, McNeal JE, Nolley R, Hemenez M, Downs J. Эпоха специфических антигенов простаты в Соединенных Штатах закончилась для рака простаты: что произошло за последние 20 лет? Дж Урол.2004; 172:1297–301.

    Артикул пабмед Google ученый

  • Heidenreich A, Bastian PJ, Bellmunt J, Bolla M, Joniau S, Mason MD, Matveev V, Mottet N, van der kwast TH, Wiegel T, Zattoni F. Руководство по раку простаты. В: Руководство Европейской ассоциации урологов. издание, представленное на 28-м ежегодном конгрессе EAU. член Руководящего бюро Европейской ассоциации урологов (EAU), редактор. Милан: 2013. https://uroweb.орг/рекомендации/.

  • Тайра А.В., Меррик Г.С., Гэлбрет Р.В., Андрейни Х., Таубенслаг В., Кертис Р. и др. Эффективность трансперинеальной картирующей биопсии под контролем шаблона при выявлении рака предстательной железы при первичной и повторной биопсии. Рак простаты Prostatic Dis. 2010;13:71–7.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Hessels D, Klein Gunnewiek JM, van Oort I, Karthaus HF, van Leenders GJ, van Balken B, et al.Молекулярный анализ мочи на основе DD3(PCA3) для диагностики рака предстательной железы. Евр Урол. 2003;44:8–15.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Хесселс Д., Шалкен Дж.А. Использование PCA3 в диагностике рака предстательной железы. Нат Рев Урол. 2009; 6: 255–61.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Дейкстра С., Малдерс П.Ф., Шалкен Дж.А.Клиническое использование новых биомаркеров рака предстательной железы на основе мочи и крови: обзор. Клин Биохим. 2014;47:889–96.

  • Зили П.Дж., Мобли Дж.А., Эбб Р.Г., Цзян З., Блют Р.Д., Хо С.М. Новый диагностический тест на рак предстательной железы основан на определении альфа-метилацил-коэнзима рацемазы в секрете предстательной железы. Дж Урол. 2004; 172:1130–3.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Laxman B, Tomlins SA, Mehra R, Morris DS, Wang L, Helgeson BE, et al.Неинвазивное обнаружение транскриптов слияния TMPRSS2:ERG в моче мужчин с раком предстательной железы. Неоплазия. 2006; 8: 885–8.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Хесселс Д., Смит Ф.П., Верхаг Г.В., Витжес Дж.А., Корнел Э.Б., Шалкен Дж.А. Обнаружение транскриптов слияния TMPRSS2-ERG и антигена рака простаты 3 в осадках мочи может улучшить диагностику рака простаты. Клин Рак Рез. 2007; 13:5103–8.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Лаксман Б., Моррис Д.С., Ю Дж., Сиддики Дж., Цао Дж., Мехра Р. и др. Мультиплексный биомаркерный анализ мочи первого поколения для раннего выявления рака предстательной железы. Рак рез. 2008; 68: 645–9.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Оуян Б., Бракен Б., Берк Б., Чанг Э., Лян Дж., Хо С.М.Дуплексный количественный анализ полимеразной цепной реакции, основанный на количественном определении транскриптов альфа-метилацил-КоА-рацемазы и антигена 3 рака предстательной железы в осадках мочи, повысил точность диагностики рака предстательной железы. Дж Урол. 2009; 181:2508–13.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Ригау М., Мороте Дж., Мир М.С., Баллестерос С., Ортега И., Санчес А. и др. PSGR и PCA3 как биомаркеры для выявления рака предстательной железы в моче.Предстательная железа. 2010;70:1760–7.

    ПабМед Google ученый

  • Mengual L, Ars E, Lozano JJ, Burset M, Izquierdo L, Ingelmo-Torres M, Gaya JM, Algaba F, Villavicencio H, Ribal MJ, Alcaraz A. Профили экспрессии генов при раке простаты: идентификация кандидата не -инвазивные диагностические маркеры. Актас Урол Esp. 2014;38:143–9.

  • Собин Л.Х., Господаревич М., Виттекинд Х. Классификация злокачественных опухолей по TNM.Международный союз борьбы с раком UICC. Нью-Йорк: Уайли; 2009.

    Google ученый

  • Эпштейн Д.И., Оллсбрук-младший В.К., Амин М.Б., Эгевад Л.Л. Консенсусная конференция Международного общества урологической патологии (ISUP) 2005 г. по шкале Глисона для карциномы предстательной железы. Ам Дж. Сург Патол. 2005; 29:1228–42.

    Артикул пабмед Google ученый

  • Ригау М., Ортега И., Мир М.С., Баллестерос С., Гарсия М., Ллаурадо М. и др.Панель из трех генов в моче увеличивает специфичность ПСА при обнаружении рака предстательной железы. Предстательная железа. 2011;71:1736–45.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Варамбалли С., Ю Дж., Лаксман Б., Родс Д.Р., Мехра Р., Томлинс С.А. и др. Интегративный геномный и протеомный анализ рака предстательной железы выявляет признаки метастатического прогрессирования. Раковая клетка. 2005; 8: 393–406.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Райс К.Р., Чен Ю., Али А., Уитмен Э.Дж., Блейз А., Ибрагим М. и др.Оценка мРНК гена, связанного с ETS, в моче для выявления рака предстательной железы. Клин Рак Рез. 2010;16:1572–1576.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Оуян Б., Леунг Ю.К., Ван В., Чанг Э., Левин Л., Бракен Б. и др. Варианты сплайсинга альфа-метилацил-КоА-рацемазы и их экспрессия в нормальных и злокачественных тканях предстательной железы. Урология. 2011;77:249. е1-7.

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Shaw JL, Diamandis EP.Распределение 15 калликреинов человека в тканях и биологических жидкостях. Клин Хим. 2007; 53:1423–32.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Сорг Д., Дановски К., Коренкова В., Руснакова В., Куффнер Р., Циммер Р. и др. Микрожидкостная высокопроизводительная RT-qPCR измерения иммунного ответа первичных эпителиальных клеток молочной железы крупного рогатого скота, культивируемых из молока, на возбудители мастита. Животное. 2013;7:799–805.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Cohen Freue GV, Hollander Z, Shen E, Zamar RH, Balshaw R, Scherer A, et al.MDQC: новый метод оценки качества микрочипов на основе отчетов о контроле качества. Биоинформатика. 2007; 23:3162–9.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Эфрон Б., Джонстон И., Хасти Т., Тибширани Р. Регрессия наименьшего угла (с обсуждением). Энн Стат. 2004; 32: 407–99.

    Артикул Google ученый

  • Джаван Б., Ремзи М., Шульман К.С., Марбергер М., Злотта А.Р.Повторная биопсия простаты: кто, как и когда? Обзор. Евр Урол. 2002; 42: 93–103.

    Артикул пабмед Google ученый

  • Лейтен Г.Х., Хесселс Д., Яннинк С.А., Смит Ф.П., де Йонг Х., Корнел Э.Б., де Рейке Т.М., Верганст Х., Кил П., Книпшеер Б.К., ван Оорт И.М., Малдерс П.Ф., Хюльсберген-ван де Каа К.А., Шалкен Дж.А. Проспективная многоцентровая оценка слияний генов PCA3 и TMPRSS2-ERG в качестве диагностических и прогностических мочевых биомаркеров рака предстательной железы.Евр Урол. 2014;65:534–42.

  • Chen X, Xu S, McClelland M, Rahmatpanah F, Sawyers A, Jia Z, et al. Точный предсказатель рака предстательной железы, использующий сигнатуру семи генов плюс шкалу Глисона и принимая во внимание гетерогенность клеточного типа. ПЛОС Один. 2012;7:e45178.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Шатнави А., Норрис Дж.Д., Шаверу С., Джаспер Дж.С., Шерк А.Б., Макдоннелл Д.П., Жигер В.ELF3 является репрессором действия рецептора андрогена в клетках рака предстательной железы. Онкоген. 2014; 33:862–71.

  • Браун Л.Ф., Пападопулос-Сергиу А., Берс Б., Мансо Э.Дж., Тоньяцци К., Перруцци К.А. и др. Экспрессия и распределение остеопонтина в карциномах человека. Ам Джей Патол. 1994; 145:610–23.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Haese A, de la Taille A, van Poppel H, Marberger M, Stenzl A, Mulders PF, et al.Клиническая полезность анализа мочи PCA3 у европейских мужчин, которым запланирована повторная биопсия. Евр Урол. 2008; 54:1081–8.

    Артикул пабмед Google ученый

  • van Gils MP, Hessels D, van Hooij O, Jannink SA, Peelen WP, Hanssen SL, et al. Флуоресцентный тест PCA3 с временным разрешением для мочевых отложений после пальцевого ректального исследования; Голландская многоцентровая проверка диагностической эффективности. Клин Рак Рез. 2007; 13: 939–43.

    Артикул пабмед Google ученый

  • Джамаспишвили Т., Краль М., Хомерики И., Выгнанкова В., Мгебришвили Г., Студент В. и др. Модель Quadriplex улучшает обнаружение рака предстательной железы на основе анализа мочи. Рак простаты Prostatic Dis. 2011;14:354–60.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Салами С.С., Шмидт Ф., Лаксман Б., Риган М.М., Рикман Д.С., Шерр Д. и др.Сочетание обнаружения в моче TMPRSS2:ERG и PCA3 с уровнем ПСА в сыворотке для прогнозирования диагноза рака предстательной железы. Урол Онкол. 2013; 31: 566–71.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Казанова-Салас И., Рубио-Брионес Дж., Калатрава А., Манкарелла С., Масиа Э., Казанова Дж. и др. Идентификация миР-187 и миР-182 в качестве биомаркеров ранней диагностики и прогноза у пациентов с раком предстательной железы, перенесших радикальную простатэктомию.Дж Урол. 2014; 192: 252–9.

    КАС Статья пабмед Google ученый

  • Рекомендации рабочей группы EGAPP: улучшает ли тестирование PCA3 для диагностики и лечения рака предстательной железы результаты лечения пациентов? Генет Мед. 2014; 16:338–46.

  • Для африканских слонов моча может быть мощным указателем пути

    Christopher Intagliata: Мы, люди, часто ориентируемся, используя дорожные знаки и GPS.Но слоны?

    Конни Аллен, поведенческий эколог из Университета Эксетера в Великобритании, говорит, что они перемещаются на большие расстояния, используя свою невероятную память. (Слон никогда ничего не забывает, верно?) 

    Конни Аллен: Но тут и там высказывались предположения, что, возможно, обоняние и обоняние имеют решающее значение для этих дальних перемещений.

    Вид на оживленную слоновью тропу в национальном парке Макгадикгади Панс в Ботсване.Изображение было получено с помощью фотоловушки, предназначенной для записи движений и поведения африканских слонов. Предоставлено: Конни Аллен

    Печать: Аллен и ее коллеги исследовали эту идею, проверяя способность африканских слонов настраиваться на очень специфический запах: мочу. Видите ли, слоны много писают — от 12 до 15 галлонов за день — и эта моча может содержать ряд химических сигналов.

    Но сначала им нужно было пописать. Поэтому они направились к месту на берегу реки Ботети в Ботсване и стали ждать.

    Аллен: Мы ждали, пока слоны помочятся, и через 20 минут собирали эти свежие образцы мочи.

    Интальята: Затем они установили фотоловушки на семи слоновьих тропах. Наблюдая за естественным поведением слонов на тропинках, они заметили, что большинство из них исследовали запахи вдоль тропы, особенно слонов, путешествующих в одиночку, что указывает, по словам исследователей, на то, что запахи могут служить указателями на тропе.

    Затем они разместили эти образцы мочи вдоль троп.И они обнаружили, что в течение как минимум двух дней проходящие мимо слоны наводили свои хоботы на образцы, особенно на образцы взрослых особей, — еще одно указание на то, что запах может быть мощным навигационным сигналом.

    Их выводы опубликованы в журнале Animal Behavior . [Конни Р. Б. Аллен и др., Полевые данные, подтверждающие мониторинг химической информации о путях самцов африканских слонов]

    Основываясь на этих результатах, они надеются, что защитники природы смогут использовать слоновью мочу в качестве приманки.

    Аллен: Если мы сможем обмануть слонов, заставив их думать, что путь других слонов проходит по этому пути, может быть, мы сможем перенаправить их с этого пути в тот момент, когда они вступают в конфликт с людьми.

    Интальята:  Им просто нужно посмотреть, что произойдет, как только слоны почувствуют этот план.

    [ Приведенный выше текст является расшифровкой этого подкаста .]

    Случайное шоу – пить мочу, исследовать Японию и разбираться в жизни) – Блог автора Тима Ферриса

    Пожалуйста, наслаждайтесь этой стенограммой эпизода The Random Show с Кевином Роузом, серийным предпринимателем и инвестором мирового уровня.Стенограммы могут содержать несколько опечаток — некоторые эпизоды длятся более 2 часов, поэтому сложно найти какие-то мелкие ошибки. Наслаждаться!

    Прослушайте выпуск здесь или выбрав любой из вариантов ниже.

    # 224: Случайное шоу — пить мочу, исследовать Японию и разбираться в жизни

    ИЗ-ЗА НЕКОТОРЫХ ГОЛОВНЫХ БОЛЕЙ В ПРОШЛОМ, ПОЖАЛУЙСТА, ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ НА ЮРИДИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ:

    Тим Феррисс владеет авторскими правами на все содержание и стенограммы подкаста Шоу Тима Феррисса, все права защищены, а также его право на публичное использование.

    ЧТО ВЫ ДОЛЖНЫ ДЕЛАТЬ:

    Вы можете поделиться приведенной ниже стенограммой (до 500 слов, но не более) в статьях СМИ (например, The New York Times, LA Times, The Guardian), на своем личном веб-сайте, в некоммерческой статье или блоге. публикации (например, Medium) и/или в личной учетной записи в социальной сети для некоммерческих целей, при условии, что вы указываете авторство «Шоу Тима Феррисса» и ссылаетесь на URL-адрес tim.blog/podcast. Для ясности средствам массовой информации с рекламными моделями разрешено использовать выдержки из стенограммы в соответствии с вышеизложенным.

    ЧТО ЗАПРЕЩЕНО:

    Никто не имеет права копировать какую-либо часть содержимого подкаста или использовать имя, изображение или подобие Тима Ферриса для любых коммерческих целей или использования, включая, помимо прочего, включение в любые книги, электронные книги, аннотации или синопсисы книг или на коммерческий веб-сайт или сайт социальной сети (например, Facebook, Twitter, Instagram и т. д.), который предлагает или продвигает ваши или чужие продукты или услуги. Для ясности средствам массовой информации разрешено использовать фотографии Тима Ферриса из медиа-комнаты на tim.блог или (очевидно) лицензионные фотографии Тима Ферриса из Getty Images и т. д.

    Тим Феррис: Здравствуйте, дамы и микробы. Это Тим Феррис, и это ночной выпуск Шоу Тима Ферриса, и я записываю это из сельской местности Японии, стараясь не разбудить дружелюбных соседей, поэтому я постараюсь быть кратким. Это специальное издание Random Show, и для тех из вас, кто не видел The Random Show, это следует из названия; случайный набор обменов между мной и Кевином Роузом, предпринимателем; один из лучших сборщиков акций как на публичных рынках, так и среди инвесторов на ранних стадиях стартапов, которых я когда-либо встречал.

    Он невероятный, а также веселый. Мы действительно просто шутим и говорим о наших любимых вещах, новых открытиях, о том, чем мы занимаемся. В этом конкретном выпуске мы обсуждаем Японию и как сделать это дешево, как сделать это очень, очень весело, разные рекомендации. Мы говорим о создании приложений. Кевин очень хорош в этом. И точный процесс, мы проводим мозговой штурм вслух и обсуждаем вещи, в которые мы раньше не вникали.

    Мы будем говорить о питье мочи – долгая история; до этого дойдем — любовь и брак и трудности в них и из них, красота и нелепость в 2017 году; почему у Кевина нет новогодних обещаний в этом году, любимых книг и многого другого.Мы довольно много говорим о Японии, но чтобы не утомить какой-то процент из вас, ребята, которые на самом деле не увлекаются Японией, я бы также рекомендовал вам ознакомиться с некоторыми из моих собранных мыслей о моих любимых рекомендуемых предметах списка, а также о дешевых или бесплатные развлечения и невероятные возможности в таких местах, как Токио.

    И вы можете найти это в записи блога, состоящей из двух частей. Вы можете перейти на tim.blog/japan; это все бесплатно, и это показывает вам, как получить максимальную отдачу от Токио меньше, чем, скажем, поездка в Нью-Йорк.Итак, это забавный пост; это то, над чем я много думал, и мне помогали друзья: tim.blog/japan. Если вы когда-нибудь думали о Японии, мечтали о поездке в Японию, почему бы нам не внести это в календарь для вас, и это поможет вам спланировать многое и очень, очень разумно потратить свои деньги. Тим.блог/япония.

    Итак, без лишних слов, пожалуйста, наслаждайтесь этим выпуском The Random Show с Кевином Роузом, @kevinrose в Твиттере и во всех социальных сетях. Поздно; Я выпил много саке.Наслаждаться.

    Привет мальчики и девочки. Это Тим Феррис.

    Кевин Роуз: А я Кевин Роуз. Привет друзья; давно не переписывались.

    Тим Феррис: Давно не общался, [говорю по-японски]. Последнее по сути означает «давно не виделись» на японском языке, что уместно, потому что мы здесь на специальном выпуске Random Show в Канадзаве, Япония.

    Кевин Роуз: Верно.

    Тим Феррис: Почему мы в Японии, Кевин?

    Кевин Роуз: Хороший вопрос.Прошло некоторое время с тех пор, как мы были. Последний раз, когда мы были на этой стороне света, был Китай. Нет нет.

    Тим Феррис: Это было, когда вы обручились.

    Кевин Роуз: Верно! Вы были здесь. Я обручился в Токио на фестивале цветения сакуры, и ты был здесь, и в итоге мы тусовались. Но вчера мне исполнилось 40 лет, что немного безумно. Итак, мы совершили небольшое путешествие, пригласили шестерых или около того, действительно близких друзей, и да, это было очень весело.

    Тим Феррис: Мы сидим здесь, в очень традиционной японской гостинице, рёкане, и мы сидим на татами. Перед нами низкий столик, мы сидим, скрестив ноги, и выпиваем. Мы уже выпили изрядное количество саке, поэтому вместо этого мы переключили передачу. У меня есть немного красного вина, у тебя есть что угодно.

    Кевин Роуз: У меня есть солодовое пиво премиум-класса Suntory, которое варится с гордостью, как написано там снаружи.

    Тим Феррис: Японцы делают все с гордостью.

    Кевин Роуз: Все с гордостью.

    Тим Феррис: Мне нравится.

    Кевин Роуз: Мне нравится. Ваше здоровье.

    Тим Феррис: Канпай.

    Кевин Роуз: Канпай.

    Тим Феррисс: Итак, канпай, мы сделаем пару языковых вещей, а затем перейдем к нашим обычным случайным вещам, кусочкам и кусочкам. Но кампи — это «пустой стакан», и это ура на японском и китайском языках; одни и те же персонажи.Гамби тоже «пустой стакан».

    Кевин Роуз: Но самое смешное, что ты сказал мне это; это не значит чихать.

    Тим Феррис: Это не значит пыхтить.

    Кевин Роуз: Нет, большинство людей думают, когда вы говорите кампи, вы просто кладете его обратно, пыхтите, бум, готово, хлопаю стеклом, вот и все.

    Тим Феррис: Что неправда, да.

    Кевин Роуз: Но есть еще одно слово.

    Тим Феррис: Есть.

    Кевин Роуз: Что опять?

    Тим Феррис: Ики.

    Кевин Роуз: Ики. Итак, если вы пойдете ики, ики…

    Тим Феррис: Ики, ики, ики. Ики, ики — это один вздох, один вздох. А это значит чихать.

    Кевин Роуз: Хорошо.

    Тим Феррис: Итак, различные варианты использования, которые можно использовать редко или постоянно, в случае с К. Роуз. И мы в Адайе, как называется это место. И если вы слышите какие-либо звуки водопада на заднем плане, это потому, что у нас есть естественный онсэн, доставляющий воду в комнаты, где есть деревянные ванны, которые фактически находятся внутри или снаружи.Есть открытая стена, так что вы смотрите на лес / склон холма, и пар выходит на улицу. Это зима, так что тонны тумана и мглы и так далее; это просто волшебное место.

    Кевин Роуз: Это просто прекрасно. Одна из причин, по которой я выбрал это место для проживания, заключается в том, что я никогда раньше не останавливался в рёканах, таких как традиционные японские дома, и я всегда хотел это сделать.

    И № 2, когда вы говорите об онсэне, как о природном источнике, это очень сложно, потому что в Японии, если у вас есть какие-либо татуировки, вам запрещено делать онсэн.

    Тим Феррис: Общественные бани.

    Кевин Роуз: Общественные бани, потому что они говорят, что ты якудза.

    Тим Феррис: Да, это связано с организованной преступностью. Итак, если у вас есть татуировки, как у Кевина — мой маленький пони на обеих дельтовидных мышцах…

    Кевин Роуз: Они прекрасны. Мне досталась длинноволосая с кисточками; это довольно захватывающая вещь.

    Тим Феррис: Это захватывает дух. Вам не разрешается ходить в общественные бани, или в большинство из них.Также актуально, скажем, в отелях, где есть выход на пляж. Вам не разрешается ходить на пляж, если у вас открытые татуировки.

    Кевин Роуз: Да, а также отели, когда вы собираетесь просто воспользоваться их спа. Потому что я был там один раз, я останавливался, кажется, на полуострове, и я пошел в спа, и она спросила: «Татуировки?» и я сказал: «Да». Она протянула мне скотч телесного цвета, вроде маленького квадратика скотча.

    У меня есть несколько, и я подумал: «Мне понадобится весь рулон.На самом деле этого не произошло; Я не вошел. Меня бы выгнали. Но это приятно. Это в комнате. В каждой комнате есть собственная маленькая ванная, горячая вода подается по трубопроводу, и это очень расслабляет.

    Тим Феррис: Я также должен сказать, что мы не будем говорить о Японии все время, но я думаю, что Японию стоит выделить по нескольким причинам. Я был здесь студентом по обмену, когда мне было 15, и это был мой первый раз за границей. Тот год полностью изменил мою жизнь.Я жил в принимающих семьях; Я ходил в японскую школу. Я был единственным американцем в своем классе. На фото было очень просто: «Где Уолдо?» все в школьной форме.

    Стрижка под ежик, белая голова, потом все японские детишки, около 5000. Это оказалось такой тонкой и тонкой культурой; одновременно вы можете прийти сюда как человек, не говорящий по-японски, совершенно потеряться, быть совершенно сбитым с толку. Уровень английского здесь, как правило, довольно низкий, поэтому это может быть совершенно чужая среда, где вы не можете прочитать никаких знаков, и это не опасно.

    Кевин Роуз: Правильно. И люди сделают все возможное, чтобы попытаться расшифровать то, что вы говорите руками.

    Тим Феррис: Мало того, почему бы тебе не рассказать историю о Тони и наушниках?

    Кевин Роуз: Какие наушники?

    Тим Феррис: Наушники, которые он уронил в [неразборчиво] —

    [Перекрёстные помехи]

    Кевин Роуз: О да. Итак, два дня назад — ну, было две истории.Это классический Токио для вас. Это одна из причин, почему я так сильно люблю Японию. Люди здесь просто такие, дружелюбные и действительно заботятся о вашем благополучии. Тони, один из участников, который путешествует с нами, уронил наушники.

    Речь идет о стандартных наушниках Apple; белый шнур, что угодно. Мы зашли в кофейню.

    Тим Феррис: Просто для контекста: это одна из самых оживленных улиц в торговом районе Токио.

    Кевин Роуз: Да.

    Тим Феррис: Пятая авеню в Нью-Йорке.

    Кевин Роуз: Да, так же, как и повсюду, наверное, наступая на наушники и все такое. Кто-то на втором этаже здания напротив выглянул в окно, увидел, что у него из кармана выпали эти маленькие белые наушники, сбежал по лестнице, схватил наушники, сообразил, в какую кофейню мы зашли, и пошел дальше. войти и вернуть наушники, что было просто безумием.А потом, вдобавок ко всему, та же самая кофейня, я вышла из такси, оставила в такси свой мобильник. Конечно, когда ты в Штатах, ты как дерьмо, мой сотовый пропал; Я больше никогда этого не увижу.

    Итак, я использовал «Найти мой телефон», встроенную функцию Apple, чтобы вы могли видеть, где находится ваш телефон; Я использовал его с мобильного телефона моей жены. Это 20, 25 минут езды на такси от того места, где мы находимся. Я такой: о, черт возьми, как я когда-нибудь верну это обратно? Я нажал кнопку, которая посылает сигнал на мобильный телефон, и он посылает звуковой сигнал, чтобы все, кто находится рядом, могли это услышать.Вдруг смотрю по GPS, телефон начинает все ближе и ближе и ближе.

    Этот водитель едет обратно, 20 с лишним минут, поднимается по лестнице в кофейню, где я его оставил, и возвращает мне мой телефон. Я пытаюсь дать ему чаевые. Я думаю, в Штатах вы даете кому-то 20, 40, 50 долларов; Спасибо большое. Он не принял мои чаевые и был так вежлив; поклонился мне и ушел. Чувак, когда ты живешь в Штатах, ты такой же, как и все, что случилось?

    Тим Феррис: У нас есть несколько друзей, и это также заставляет вас во многих, многих случаях чувствовать себя нецивилизованным, волосатым дикарем.

    Кевин Роуз: Вот что я хочу сказать!

    Тим Феррис: Вы просыпаетесь, зная, что вам будет стыдно как минимум за 17 вещей, которые вы сделаете сегодня.

    Кевин Роуз: Верно.

    Тим Феррисс: Но это замечательная обстановка. Одна вещь, которую я хочу подчеркнуть, прежде чем мы двинемся дальше, и я уверен, что мы еще вернемся к ней, заключается в том, что вам не нужно иметь много денег или тратить много денег, чтобы насладиться Токио. Это распространенное заблуждение.Это может быть очень дорого, но это не обязательно должно быть очень дорого. И, конечно же, Япония в целом не должна быть очень дорогой. Когда я был здесь в 15 лет, у меня вообще не было денег. Вы можете, например, найти магазины, которые вы узнаете, например, 7-11, которые полностью отличаются от эквивалентов дома.

    Вы можете пойти в 7-11, например, и вы можете взять один из моих любимых перекусов на ходу, онигири; это рисовые шарики, завернутые в сухие водоросли и наполненные различным мясом, овощами или рыбой; скажем, тунец или что бы это ни было.Обычно они стоят около 110 иен, так что давайте просто назовем это 1 долларом. Вы можете найти их по адресу 7-11, в магазине Sunkus или Lawson. Он упакован таким образом, что вы отрываете пластик, который отделяет морские водоросли, и он автоматически заворачивает рисовый треугольник, и у вас тут же получается полноценный обед где-то между 1 и 2 долларами.

    Кевин Роуз: Знаете, это забавно. Я не знаю, говорил ли я вам это, но я был здесь с Дэвидом Чангом, которого я бы назвал — я уверен, что многие люди знакомы с ним, но он, вероятно, один из пяти лучших шеф-поваров в Соединенных Штатах. .

    Тим Феррис: Очень известный, Момофуку, молочный бар.

    Кевин Роуз: Да, молочный бар. Мы оказались здесь в одной поездке с друзьями. Хью как разглагольствования и бред о сэндвиче с салатом из 7-11 яиц

    Этот шеф-повар имеет три звезды Миссии в одном из своих ресторанов; шеф-повар с мировым именем сходит с ума из-за 7-11. Другие 7-11, чем в Соединенных Штатах. Ни в коем случае не с высоким содержанием пищи; пара баксов за этот бутерброд с яичным салатом, но приготовленный, как говорит мое пиво, «приготовленный с гордостью».

    Тим Феррис: Еще пару мест, которые я бы посоветовал посетить в Токио. Если у вас есть билет, сходите в музей Гибли. Думайте об этом как о музее Диснея Уолта Диснея из Японии. Это Миядзаки Хаяо; он снялся в «Пути духа», моем любимом фильме «Мой сосед Тоторо»; целый длинный список блокбастеров и определяющих жанр аниме-фильмов. Это один из самых невероятных музеев, в которых я когда-либо был. Он находится посреди того, что они называют лесом Митака, который находится прямо рядом с Инокаширой Коэном.

    В Японии тоже многое бесплатно. Вы можете отправиться в Харадзюку, где по выходным можно увидеть имитаторов Элвиса, танцующих. Это продолжается уже несколько десятков лет. И вы также можете пойти на Такэсита Дори, это, я думаю, улица Такэсита или переулок, где вы найдете десятки или сотни подростков и старшеклассников, занимающихся косплеем. Итак, они носят эти сумасшедшие наряды и ходят по улицам, демонстрируя самые странные наряды, какие только можно себе представить.

    Кевин Роуз: Некоторым это нравится.

    Тим Феррис: Многие этим увлекаются.

    Кевин Роуз: Когда вы видите косплей… Потому что это похоже на секс.

    Тим Феррис: Я думаю, что для некоторых людей это может быть частью этого, но я думаю, что это просто форма гипервыражения в культуре, где многие люди большую часть времени чувствуют себя подавленными из-за чрезмерной вежливости.

    Итак, по выходным они зажигают, надевают розовые контактные линзы, седые волосы, 12-дюймовые туфли на платформе и носят самое дурацкое дерьмо, в котором можно вальсировать.

    Кевин Роуз: Может быть, в Штатах косплей популярнее… Они одеваются, как персонажи видеоигр, и тому подобное, вроде Comic-Con и еще чего-то.

    Тим Феррис: О да.

    Кевин Роуз: Но это не совсем японский косплей.

    Тим Феррис: Есть много вещей, которые являются обычными в других странах, которые в конечном итоге перенимаются странными нишевыми группами в США и приобретают, в некоторых случаях, более жуткие и странные элементы.Как танго в Аргентине, нормально. Танго в некоторых местах в США; супер странно. Я просто говорю это как человек, который любит танго и танцует во многих местах, но прежде всего в Аргентине в былые времена.

    То же самое с японскими вещами; это как о, манга, круто, а потом вы находите небольшую субкультуру в данном городе в США, и вы типа, подождите секунду, это все 40-летние парни, которые читают жуткую, полупорно-ханта мангу. Ладно, не думаю, что буду здесь больше торчать.

    Кевин Роуз: Правильно.

    Тим Феррис: Переход. Как нам выйти из этого? Начнем с Хенты. Хенту можно поискать. Есть две книги, которые помогли мне просмотреть и подготовиться к этой поездке с точки зрения японского языка, и я хотел бы предложить людям прочитать, если вы интересуетесь японским языком. Очень короткие, и я смог пройти через них очень быстро. Первый, вероятно, предназначен для людей, которые говорят по-японски на более среднем уровне, поэтому сначала вам понадобятся некоторые основы.Но это 13 секретов свободного разговора по-японски , и это Джайлз Мюррей.

    Итак, 13 секретов свободного разговора по-японски ; очень, очень полезно. Второй может быть немного суховат для некоторых людей, но мне нравятся очень краткие грамматические сводки, которые можно быстро найти. Это Японские глаголы и основы грамматики Риты Лэмпкин.

    Вы упомянули, прежде чем мы начали записывать приложение, приложения и разработку приложений.

    Кевин Роуз: Да.

    Тим Феррис: Ты сказал, что хочешь поговорить об этом.

    Кевин Роуз: Да, мы можем как бы перейти к тому, чем мы занимались в последнее время, потому что это то, чем мы занимаемся на The Random Show, если вы настроились на предыдущие эпизоды, где мы просто забиваем и говорим о странных вещи. Я хотел узнать, что вы думаете об этом, и в режиме реального времени поболтать. Потому что я ничего тебе об этом не говорил. Что ж, я немного рассказал вам об этом, но я думаю, что было бы забавно сделать помощь в прямом эфире и показать людям, каково это проводить мозговой штурм некоторых из этих вещей.

    Тим Феррис: Конечно.

    Кевин Роуз: Итак, вот в чем дело. За свою карьеру для людей, которые меня знают и не знают, я создал множество различных программных приложений, как для Интернета, так и для мобильных устройств, и несколько лет работал в Google, занимался инвестициями и подобными вещами. .

    Недавно я вернулся к созданию приложений, поэтому я создал приложение о голодании, которое помогает людям выполнять прерывистое голодание, которое я хотел раздать бесплатно, так что это совершенно бесплатное приложение.Зовут Зеро. Затем я недавно захотел сделать еще одно приложение, посвященное медитации. Медитация время от времени была моим хобби, как и большинство наших друзей, которые медитируют, последние три или четыре года. Я прошел здесь курс трансцендентальной медитации, наверное, полгода назад, мне очень понравилось. Медитация на основе мантры, поэтому, когда я говорю мантру, я говорю о том, что вы получаете слово, вы повторяете это слово снова и снова.

    Очевидно, ты делал это раньше, Тим. И вы как бы входите в более… как бы вы назвали это состояние? Это похоже на состояние гипноза, когда вы повторяете слово снова и снова, очень расслабляясь.

    Так или иначе, другая форма медитации по сравнению с общей медитацией внимательности. Одна из вещей, о которых я думал для этого приложения, — это полностью опубликовать информацию о создании приложения от супа до орехов. Итак, начнем с показа каркасов, еженедельного видео и демонстрации того, как вы принимаете определенные решения в отношении дизайна приложения, как вы делаете юзабилити, компромиссы; что входит в приложение, а что исключается.

    Как вам приходится перезаписывать аудио, потому что вам не нравятся определенные фрагменты аудио, которые вы собираете; есть тысячи вещей, которые входят в создание приложения.Но это также очень страшно, потому что в то же время, когда кто-то, любой новый предприниматель разрабатывает что-то новое, вы как бы хотите держать это в секрете, потому что это своего рода ваш собственный секретный соус; это ваши собственные проприетарные вещи. Что ты думаешь о том, чтобы выйти в свет, стать очень публичным?

    Потому что ты очень осторожный парень.

    Тим Феррис: О некоторых вещах, да.

    Кевин Роуз: Но, зная вас уже много лет, когда вы работаете над новой книгой, и я видел вас сейчас во многих книгах, вы даже не делитесь главами книги.Ты держишь эти вещи очень близко и очень крепко. Что вы думаете о том, чтобы сделать что-то подобное?

    Тим Феррис: Книги для меня — уникальное животное в этом отношении, где я чувствую, что мемы могут непреднамеренно выпуститься в дикую природу и набрать обороты непредвиденным образом, если вы начнете говорить о книге, которая потенциально будет иметь успех. три года делать, слишком рано. Тогда это может создать…

    Кевин Роуз: Подделки.

    Тим Феррис: Подделки и, возможно, продвижение вперед таким образом, что вы гребли в идеальном месте, а теперь вы опоздаете на шесть, 12 месяцев или более на вечеринку, где у вас будет превосходный продукт. .

    Но поскольку вы не первый, кто выходит на рынок, вы не первый, кто делится мыслями. Я думаю, что в случае с книгами краудсорсинг идей и отзывов наиболее ценен, по моему опыту, когда у вас сначала есть четкое представление о том, что вы хотели бы сделать, а затем вы используете мудрость толпы, чтобы выбрать из вариантов, которые в равной степени привлекательны для вас. ты. Другими словами, если вы согласны, мы собираемся включить одну из этих трех функций, но у нас есть ресурсы, чтобы сосредоточиться только на одной, мне нравятся все три в равной степени; пусть решает толпа.

    Я нахожу это очень действенным и полезным во многих случаях. Но о чем мне писать, и пусть я просто выбираю и делаю монстра Франкенштейна; Я нахожу это очень, очень трудным. Но в случае с приложением, от того, где вы сейчас находитесь, до потенциального запуска, какой тип временной шкалы мы рассматриваем?

    Кевин Роуз: Три месяца.

    Тим Феррис: Я бы вообще не волновался.

    Кевин Роуз: Да, меня это не слишком волнует.Мне просто любопытно. Очевидно, что это большая работа, чтобы транслировать все это, потому что вы не хотите быть односторонним общением, когда вы просто продвигаете контент и не принимаете отзывы. Итак, я собирался создать специальную группу в Slack, куда я пригласил несколько сотен человек, чтобы они слушали различные медитации по мере их разработки, потому что я собираюсь исполнять как мужские, так и женские голоса, управляемые медитации. Я хочу быть первым приложением, которое на самом деле обучает мантра-медитации.

    Тим Феррис: Начос, начос, начос.

    Кевин Роуз: Начос. Это не будет одной из мантр. Так или иначе, для меня это что-то новое. Потому что при создании множества разных программ за годы, когда я основал Digg десять лет назад и читал его, у нас были конкуренты; мы очень осторожно относились к тому, какие функции запускать, потому что их очень быстро клонировали.

    Почти как вы сказали, тогда как если вы предложите эту идею для жанра, внезапно у вас может появиться десять или 15 других книг, прежде чем ваша на самом деле будет там, и они завоюют умы.Итак, я не знаю. Возможно, здесь я просто немного стесняюсь оружия.

    Тим Феррис: Я бы сказал, что занимаюсь небольшой, я бы сказал, тестовой групповой разработкой большей части контента, который входит в мои книги.

    Кевин Роуз: Это то, что вы сделали для обложки своей первой книги, верно, или ее название?

    Тим Феррис: Я провел тестирование Google AdWords.

    Кевин Роуз: Разве вы не распечатывали обложки и не наклеивали их на книгу? Расскажите людям эту историю.

    Тим Феррис: Да. Это история, которую мало кто знает. Многие слышали о том, как я использовал Google AdWords. У меня было около полдюжины заголовков и подзаголовков, одинаково привлекательных для Четырехчасовой рабочей недели .

    Я протестировал их в Google AdWords за 150 или 200 долларов в течение недели и очень быстро выяснил — или Google понял за меня — какая комбинация лучше всего работает для максимизации кликов. Затем это просто перешло на страницу незавершенных работ.Но другой способ, который я тестировал, заключался в том, что я распечатывал образцы обложек, разные обложки после того, как было определено название, и оборачивал их вокруг книг одинакового размера, и расставлял их на полках в Бордерах, которые раньше существовали на Юниверсити-авеню в Пало-Альто. И я сидел и следил за тем, сколько людей взяли разные обложки.

    Кевин Роуз: Судя по названию.

    Тим Феррис: На основе обложки.

    Кевин Роуз: На основе дизайна обложки.

    Тим Феррис: Верно.

    Кевин Роуз: Хорошо, потому что вы уже выбрали название.

    Тим Феррис: Да. Так что я менял обложки каждый час или около того и просто стоял и смотрел.

    Кевин Роуз: Какие были обложки? Вы помните, как они выглядели?

    Тим Феррис: В основном это была цветовая схема. Были некоторые элементы дизайна.

    Но я тестирую, я тестирую.Я бы сказал несколько вещей. № 1, вы можете зафиксировать процесс, а затем опубликовать его после запуска приложения. Я думаю, что это все равно будет иметь равную ценность. Я не думаю, что вам нужно транслировать их, пока вы все еще находитесь в разработке. Я не думаю, что это необходимость. Быстрый вопрос к вам, потому что я сам задавался этим вопросом. Я использую Slack для внутренней работы с моей командой.

    Но я слышал неоднозначные отзывы о каналах Slack для сообществ. Некоторым кажется, что это нравится.У меня были и другие люди, чьи имена останутся неназванными, которые говорили: не делай этого; это огромная головная боль. Зачем использовать канал Slack, а не, скажем, частную группу в Facebook?

    Кевин Роуз: Отличный вопрос. Я на самом деле думал об обоих. Я мог бы пойти Facebook. Проблема со Slack связана с тем, что это просто чат в реальном времени, я думаю, что ожидание — это более немедленный ответ от вас, а не просто общий пост в группе Facebook, к которому вы можете вернуться в день или два.Мы с тобой оба очень занятые люди. У меня есть ощущение, что я пойду Facebook. И у Slack тоже есть кепка.

    Тим Феррис: Slack также не имеет вложенных комментариев.

    Кевин Роуз: Неделю назад что-то подобное добавили.

    Тим Феррис: Были? Потому что это сводит меня с ума.

    Кевин Роуз: Это не вложенные комментарии, а что-то вроде подтем вокруг одного комментария.

    Тим Феррис: Верно, это то, что я имею в виду.

    Кевин Роуз: Однако это не отображается как прямое гнездо на временной шкале; вы как бы щелкаете по нему. Это немного забавнее, чем стандартный вложенный комментарий. Но да, они добавили это.

    Тим Феррис: Могу я добавить примечание?

    Кевин Роуз: Ага.

    Тим Феррис: На всякий случай, если кто-то из Facebook слушает это, попросите — пожалуйста, очень пожалуйста — могу ли я отсортировать свои комментарии по наиболее понравившимся или получившим наибольшее количество голосов; это сделало бы мою жизнь намного, намного проще.

    Кевин Роуз: Где?

    Тим Феррис: На моей фан-странице на Facebook.com/timferriss. Когда я опрашиваю людей или когда я прошу свою аудиторию высказать мнение о таких вещах, как: эй, для 1000 квадратных футов или меньше, какую юрту или небольшой дом я должен построить на таком-то участке? Затем я получаю все эти невероятные ответы. Я спрашивал об этом некоторых людей в Facebook; Я не нашел четкого способа сортировки по количеству лайков. Разве это не безумие?

    Кевин Роуз: Разве у них нет сортировки по самому интересному или что-то в этом роде?

    Тим Феррис: У них есть сортировка по лучшему, или лучшему, или что-то в этом роде, но это алгоритм; это не самый популярный индикатор.Итак, разберитесь. Но почему медитация? Что побуждает вас это делать и как для вас выглядит успех? Допустим, вы запустите его через три месяца, а через три месяца как вы узнаете, было ли оно успешным или нет?

    Кевин Роуз: Пара вещей. Да ведь я видел изменения в своем собственном теле, в своих собственных чувствах, с точки зрения просто уменьшения беспокойства и общего счастья в целом, и просто предоставления мне небольшого пространства. Честно говоря, есть много отличных приложений. Я думаю, что Calm и Headspace — две отличные игры.

    Тим Феррис: Определенно.

    Кевин Роуз: Я использовал их обоих на протяжении многих, многих сеансов. Когда я начал заниматься ТМ, этой трансцендентальной медитацией, которая учит медитации на основе мантр, это был очень дорогой процесс. Для большинства людей трата 1500 долларов на трехдневный курс — это большая часть их зарплаты. Медитация с мантрами, не поймите меня неправильно; ТМ дает много коучинга, который я считаю действительно ценным. Но я думаю, что концепция довольно проста.

    Честно говоря, я нахожусь в той точке своей карьеры, когда постучу по дереву, я неплохо справился с инвестициями и другими вещами, которые я сделал, и речь не идет о создании большого многомиллионного бизнеса. Речь идет о том, чтобы выпустить что-то, что понравится миру, что бесплатно, что люди могут получить. Я хочу сделать приложение, которое обучает как осознанности, так и медитации осознанности, основанной на работе с дыханием, а также медитации с мантрами. Я должен был выделить работу с дыханием в отдельную категорию; Итак, обучение дыханию в йоге, а затем способ наслоения некоторых легких социальных функций.Одна из вещей, которую не делает ни одно из этих приложений, — это возможность по-настоящему участвовать в сообществе с друзьями в социальной сфере.

    Это очень сложно, потому что вы хотите убедиться, что это не движимо эго; это не о том, что я медитировал больше, чем ты, поэтому я лучше. Это больше о поощрении друг друга к регулярной практике. Я создал много социальных приложений в прошлом, и я надеюсь, что смогу легко ступить на них и получить правильное сочетание функций, которые являются как высококачественными, управляемой медитацией, так и неуправляемой медитацией, для которой у меня есть некоторые действительно удивительные и красивые различные звуки курантов и гонга, которые вернут вас в ваше сознание.

    Тим Феррис: Как насчет утиных звуков? Кря кря.

    Кевин Роуз: Мы можем поставить уточек Тим Феррис: вот, если хочешь. Мы можем немного покричать Тим-Тим, если хотите; что бы вы ни хотели. Это одна из тех вещей, когда вы разработчик приложений и начинаете использовать приложения, они никогда не подходят вам, потому что вы их не создавали.

    Итак, я смотрю на эти приложения и понимаю, что они мне нравятся, они великолепны, но это не то, что я хотел бы создавать, поэтому я просто хочу иметь свой собственный взгляд на них.Для меня успех не означает, что его используют 10 миллионов человек. Если я смогу привлечь еще несколько людей к медитации и найти немного больше места в их жизни и немного меньше стресса, я буду счастлив.

    Тим Феррис: Что мотивирует желание поделиться шаг за шагом? Как вы сказали, это много работы, чтобы сделать это хорошо.

    Кевин Роуз: Одна из вещей, если вы взглянули на подкасты, которые я делал в прошлом самостоятельно через подкаст Journal или серию Foundation, это была тема интервью с предпринимателями, чтобы поощряйте других людей и дайте другим людям понять, что предприниматели такие же, как и все остальные.

    Итак, если они увидят, как мы совершаем ошибки на этом пути, потому что, чтобы добраться до конечного продукта, чтобы добраться до версии 1.0, которую вы запускаете, вы передумаете 50, 75, 100 раз, прежде чем действительно что-то запустите. Будет так, много раз, где что построю, возьму в руки; то есть построить его в каркасах, построить его в дизайне.

    Тим Феррис: Просто для тех, кто не знает этого термина, что такое вайрфреймы?

    Кевин Роуз: Вайрфреймы — это то, что я использую и большинство людей используют в качестве своего первого макета.Допустим, вы собираетесь создать главную страницу Instagram в виде приложения. Вы должны были нарисовать коробку и ввести «картинка идет сюда». Вы нарисовали бы круг и сказали: «Фото профиля пользователя здесь».

    Тим Феррис: Это как раскадровка.

    Кевин Роуз: Да, это план. Это план дома.

    Тим Феррис: Наглядная блок-схема с различными действиями.

    Кевин Роуз: Точно. Если «нажмите на это» перейдет на эту страницу, если «нажмите на это» перейдет на ту, если «включить уведомления о публикациях» сделает то… Итак, это очень сложная серия.

    Они называют это вайрфреймами, потому что это похоже на проволочные коробки. Затем вы получаете это по телефону, так что вы можете как бы постукивать. Итак, вы делаете эти макеты, по которым можно просто нажать пальцем и пройтись по ним. Часто вы будете думать, что это неправильно, или, черт возьми, я бы хотел, чтобы этот значок был здесь, или это не имеет смысла. Итак, есть много итераций, которые входят в это. Я знаю, что многие люди или потенциальные предприниматели, которые разговаривали со мной в прошлом, всегда говорили, что я боюсь совершить этот прыжок, и я не думаю, что он у меня есть.

    И я думаю, что если я смогу показать людям, сколько ошибок мы все делаем при создании этих вещей, то, может быть, они подумают, черт возьми, я тоже смогу это сделать. Я просто хочу поощрять больше творчества среди потенциальных предпринимателей, если это имеет смысл.

    Тим Феррис: Это имеет смысл. Позвольте мне задать вам вопрос, который я уже задавал вам, но мы на самом деле не вникали.

    Я был очарован и очень долго использовал приложения для самых разных целей. И, как и у многих людей, у меня есть несколько идей для приложений.У меня были слушатели и читатели, которые запрашивали у меня приложения для разных целей.

    Кевин Роуз: У вас легко может быть приложение, очень популярное приложение, я уверен.

    Тим Феррис: Но мой страх не был связан с необходимостью разработки хорошего приложения, что я думаю, с людьми, которых я знаю, с людьми, которых вы знаете, с людьми, к которым у меня есть доступ, и, возможно, даже с людьми, которые слушают это подкаст, которые хотят помочь, что разработка хорошего приложения достижима. Я всегда боялся сделать это, а затем оказаться на крючке из-за бесконечного обновления до конца моей жизни каждую неделю, каждый день, что бы это ни было; что вы как раз в этот момент попали в очень обременительный и трудоемкий режим обслуживания.И вы сказали нет, вам просто нужно спроектировать это правильно с первого раза или что-то в этом роде.

    Не могли бы вы уточнить это? Потому что страх, и это исходит из места, которое, возможно, уже не актуально, но, например, использовало vBulletin в качестве доски объявлений…

    Кевин Роуз: vBulletin, о, Боже мой.

    Тим Феррис: Каждый день был пожарной тренировкой; была какая-то уязвимость или что-то напортачил.

    Кевин Роуз: Объясните людям, что это такое, для тех, кто не знает.Вот это разговор старой школы.

    Тим Феррис: vBulletin был очень популярным программным обеспечением для досок объявлений.

    Кевин Роуз: Доска объявлений.

    Тим Феррис: Доска объявлений. Если вы хотите создать форум или что-то в этом роде, вы можете использовать vBulletin. Количество головной боли, проникновения спама, модерации и ерунды, с которой мне и моей команде приходилось иметь дело, вероятно, еженедельно, было просто невероятным, в первую очередь из-за обновлений, которые либо выполнялись неправильно, либо иногда дорабатывались, либо требовалось дополнительное исправление ошибок. .Это была действительно большая головная боль.

    Конечно, когда я беру в руки свой iPhone почти каждый день, это как 37 уведомлений в магазине приложений.

    Кевин Роуз: Новые обновления, да.

    Тим Феррис: Новые обновления для каждого приложения. Как вы можете свести к минимуму объем обслуживания, связанного с чем-то подобным?

    Кевин Роуз: Позвольте мне сказать вам вот что. Некоторые вещи стали чертовски лучше. Некоторые вещи по-прежнему требуют небольшой работы.Начну с того, что стало лучше. Когда-то, когда вы создавали приложение для Интернета или что-то еще, вам приходилось размещать собственное программное обеспечение. Итак, запускайте свои собственные серверы, были времена, когда Digg набирал обороты, и, черт возьми, у нас было 38 миллионов человек, использующих наш сайт каждый месяц. У меня было, я хочу сказать, от 75 до 100 серверов, которые мы физически перемещали в место и монтировали в стойку; вкрути их, соедини их. Приходилось прикасаться к настоящему металлу. Итак, Amazon был первым, кто действительно взял верх.

    Тогда, возможно, Rackspace и еще пара решили, что все в порядке, мы знаем, что это головная боль.Давайте избавимся от этой проблемы и позволим системным администраторам взаимодействовать с серверами, но на самом деле им не нужно прикасаться к металлу; мы сделаем для них весь монтаж в стойку. Итак, теперь, перенесемся в сегодняшний день, многое из этого волшебно.

    Когда я говорю «волшебство», я имею в виду, что Google, Amazon и некоторые другие действительно создали эти автоматически масштабируемые базы данных и сервисы, которые, по сути, можно автоматически масштабировать, если вы заплатите им достаточно денег. Я приведу вам пример. Допустим, вы создаете приложение, и вы согласны, что это выглядит как небольшое забавное приложение для обмена фотографиями в социальных сетях.Раньше у вас был один небольшой арендованный сервер, за который вы платили 99 долларов в месяц.

    А если ты станешь популярным, твой сервер рухнет, перестанет работать, тебе пиздец. Вы бегаете повсюду. Вы платите людям за то, чтобы они устанавливали для вас больше серверов в стойку. Google и многие другие — Microsoft и все крупные игроки в наши дни — поняли, что они справятся со всем этим и автоматически масштабируют вещи для вас. Они создали определенные типы баз данных и другие сервисы, которые более или менее автоматически масштабируются.Так что, если вы станете Snapchat в одночасье, это всего лишь вопрос поступления долларов.

    Тим Феррис: Это просто вопрос вашего кредитного лимита на вашем Amex, который у вас есть в файле.

    Кевин Роуз: Точно. Таким образом, больше нет этой заботы, и это хорошая часть, о которой позаботились.

    Тим Феррис: Итак, мы говорим о веб-сервисах Amazon? Каковы некоторые из других?

    Кевин Роуз: Microsoft, в некоторой степени Heroku, хотя он немного более управляемый и находится поверх Amazon.У Oracle есть кое-что, что играет роль в этом пространстве; все крупные игроки.

    Тим Феррис: Все обычные подозреваемые.

    Кевин Роуз: Точно. Итак, что сложно, что сложно, так это то, что вы по-прежнему управляете приложением. Итак, если вы создаете приложение, скажем, например, Snapchat, и хотите внести изменения в функцию в своем приложении. Итак, если у вас есть приложение Тима Ферриса, и вы согласны, я хочу показывать подкасты, но знаете что, теперь я также хочу добавлять сообщения в блог.Вы должны написать это дополнительное изменение. Или, если в вашем приложении есть ошибка, вы должны исправить эту ошибку и выпустить новую версию.

    Или, если выходит новая версия IOS, в которой некоторые из старых функций, которые были в вашей старой версии IOS, устарели, вам необходимо обновить свою версию программного обеспечения, переписать некоторый код, а затем повторно выпустить его. Итак, короче говоря, и, пытаясь не останавливаться на технических вопросах, вы поддерживаете приложение; бэкенд, который масштабируется и позволяет людям его использовать, гораздо легче масштабировать.Но вы все равно должны поддерживать свое приложение и поддерживать его в актуальном состоянии.

    Тим Феррис: Чего тогда ожидать? Не будем делать это абстрактно. Если я устраивал долгий джем-сейшен на выходных, придумывал несколько вайрфреймов с парой компетентных людей, просто заправлял их большим количеством кофеина и затем шел в разработку. Вы сказали три месяца; скажем, я дал себе и команде от трех до шести месяцев на то, чтобы выпустить продукт и довести его до конца. Хорошо, бум, он гаснет. Каковы должны быть мои ожидания относительно технического обслуживания в следующем году, если он будет иметь умеренную популярность? Это не Snapchat, но он просто не умирает на корню.

    Кевин Роуз: В течение первых 48 часов появится куча багов просто потому, что масса людей использует его впервые. Этого следовало ожидать.

    Тим Феррис: Кстати, с книгами тоже бывает. О, черт, я неправильно написал свое имя на титульном листе; отличный.

    Кевин Роуз: Верно, немного проще исправить в мире приложений.

    Итак, это произойдет, и после этого вам придется выпустить довольно быстрый релиз.Но опять же, это несколько небольших исправлений кода, и вы отправляете их в магазин приложений, и они тут же выходят, и все получают обновление, по крайней мере, те, кто решил обновиться. Тогда это просто вопрос использования в долларах. Итак, с аудиторией вашего размера, скажем, у вас есть несколько сотен тысяч человек, использующих его.

    Если это довольно интенсивное изображение, это будет стоить вам денег; вы могли бы быть тысячи долларов в месяц. Это не исключено. Знаете, у меня есть приложение Zero, маленькое приложение для голодания.Он не требует какой-либо серверной части, и это здорово, потому что все локализовано на телефоне. Так что мне не нужно ничего платить за это; он просто работает.

    Тим Феррис: Это как программа, которая работает на телефоне.

    Кевин Роуз: Верно, точно. Он хранит все данные локально; все эти хорошие вещи. Итак, это действительно легко. Если вы просто загружаете RSS-канал и предоставляете людям действительно простой способ общаться и наслаждаться вашим подкастом, это довольно простая вещь, которая не будет стоить вам больших денег.

    Возможно, для всего этого вам даже не понадобится серверная часть. Таким образом, это просто стоимость фактической разработки приложения. Это может варьироваться от нескольких тысяч долларов до 10 или 15 000 долларов.

    Тим Феррис: С точки зрения стоимости меня это не волнует, большая часть стоимости полосы пропускания.

    Кевин Роуз: Обслуживание не так уж и много, кстати.

    Тим Феррис: Это больше управление разработчиками. Это как: о дерьмо, Apple переписала книгу и выпустила ОС, которая делает половину приложения устаревшим.

    Кевин Роуз: Однако никогда не бывает так радикально. Они всегда уделяют тебе много времени. Каждый раз, когда Apple вносит серьезные изменения, и они говорят, что это будет устаревшим, это всегда год, и вы не собираетесь переписывать вещи с нуля. Был момент, когда это происходит каждые несколько лет, например, Apple переходит с Objective C на Swift, который является их новым языком программирования, который они сделали несколько лет назад. Но тем не менее, они поддерживают старые вещи. Значит, это не конец света.

    Потенциал огромен. У вас есть возможность отправлять уведомления. Каждый раз, когда кто-то слушает это, когда вы получаете одно из этих push-уведомлений, это очень мощный способ вернуть людей к вашему бренду и обратно к вашему продукту. Тогда ты на высоте. Например, как еще прямо сейчас Тим Феррисс может рассказать вам о чем-то новом в своей жизни? Через твиттер? Конечно, но сколько людей на самом деле будет в Твиттере?

    Тим Феррис: Нет, Твиттер — это как бросить мячик для гольфа в Ниагарский водопад и надеяться, что кто-нибудь его увидит.

    Кевин Роуз: Верно, надеюсь, кто-нибудь это увидит. На Facebook вы можете продвигать публикацию и привлечь к ней внимание еще нескольких человек, и вы заплатите там несколько долларов. Но когда у вас есть собственное приложение и вы заставляете людей подписаться на эти push-уведомления, это настоящие, действенные вещи, на которые люди нажимают, а затем возвращаются к вам. Так что вовлеченность действительно высокая и стоящая.

    Тим Феррисс: Я мечтал, например, о том, чтобы иметь возможность централизовать все различные части экспериментов, и поэтому я провожу их в одном месте.Итак, у вас будут социальные каналы и все такое в приложении, но тогда у вас будет подкаст. И когда я путешествую, а я много путешествую, будь я в Нэшвилле, или я в Токио, или я в Детройте, где бы это ни было, я мог бы фактически отправлять уведомления о публикациях на основе местоположения людям. в радиусе 100 миль.

    Кевин Роуз: О, абсолютно. Это называется геозоной.

    Тим Феррис: Ага, геозоны. Итак, через два дня я собираюсь купить напитки для всех, кто хочет зайти в бар Joe’s Bar в это время этой ночью, и просто подтолкнуть их к людям, которые находятся в этой зоне.

    Кевин Роуз: Я говорил вам, что вы должны создать свое собственное приложение. Это не должно быть таким сумасшедшим. Начните с чего-то, на что люди могут просто подписаться, получайте от вас отличные обновления, и со временем вы сможете постепенно расширять это. Это единственное, к чему я всегда стараюсь и призываю людей, это то, что это не должно быть все в первый же день.

    В этом вся прелесть обновлений программного обеспечения. Возьмите свой подробный список из 15 функций, которые вы хотели бы увидеть в ближайшие два года, сократите его до трех-пяти, которые должны быть у вас в версии 1.0, и приступайте к запуску с этим.

    Тим Феррис: Ну, кто это, сказал Рейд Хоффман, если вас не смущает первая версия вашего продукта, значит, вы выпустили его слишком поздно?

    Кевин Роуз: Верно. Это отличный совет.

    Тим Феррис: Кстати, это не обязательно относится к книгам, но, конечно же, к программному обеспечению, которое можно быстро обновить. Итак, что еще нового, чувак?

    Кевин Роуз: Чёрт возьми, сейчас я как раз на этом сосредоточен.Я мотался по разным направлениям, консультируя совет директоров, немного инвестируя в бизнес-ангелов, помогая HODINKEE, где провел много времени, и создавая приложения. Итак, это будет моя новая вещь. Я хочу заняться вашими делами, но последнее, что я скажу, это то, что если люди действительно хотят присоединиться ко всему этому, у меня есть информационный бюллетень по электронной почте под названием The Journal.

    Просто зайдите на thejournal.email, и вы сможете зарегистрироваться там, и я пришлю вам способ принять участие в этом приложении для медитации.Я бы хотел, чтобы вы попробовали это и сказали мне, что вы думаете. Но я хочу знать, чем ты занимался, потому что ты был чертовски занят! Мне кажется, что когда я впервые пригласил тебя на день рождения здесь, в Японии, я не знал, придешь ли ты туда, потому что ты был в безумном туре по запуску книги.

    Тим Феррис: Да, с этим покончено. Чего многие люди не понимают, так это того, что я никогда не путешествовал с техническими книгами. Я на самом деле скоро выпущу мини-документальный фильм об этом.Я впервые нанял видеооператора, чтобы тот сопровождал меня в течение первой недели презентации книги Tools of Titans , в результате чего книга заняла первое место в New York Times .

    Впервые за несколько недель подряд я возглавляю книгу с самого начала The New York Times No.1, и он отслеживал все это, так что вы можете заглянуть за кулисы. Я хотел подчеркнуть, что я провел две недели в Нью-Йорке, обычно в конце ноября, начале декабря.Затем я делаю передышку на каникулах, а потом снова берусь за дело на Западном побережье, на этот раз на две недели. Вот и все. По сути, это запуск книги, учитывая, что многое было настроено и приведено в действие за несколько месяцев до фактической даты публикации.

    Итак, есть вещи, которые заблокированы, загружены и готовы к работе в первый или нулевой день, я думаю. Презентация книги — это работа 24/7, по крайней мере, я так к этому отношусь. Потому что я лучше переусердствую или перевыполню обязательства на 20 процентов и почувствую, что оставил все на игровом поле, чем наберу все обратно, выложусь на 80 процентов и нажму «Нет».2 или № 3. Я очень конкурентоспособен, поэтому я плохо реагирую на это.

    Кевин Роуз: Поздравляю, чувак. Вы попали.

    Тим Феррис: Спасибо. Но это как если бы я предпочел переусердствовать в течение короткого периода времени и не оставить сомнений в том, что я сделал все, что могло бы быть эффективным, вместо того, чтобы работать на 70 или 80 процентов, не достигая цели, а затем каждый раз спрашивая себя после этого: что если? Например, что, если бы я сделал эти дополнительные 20 процентов? Это был захватывающий опыт.Теперь это эффективно завершено. На самом деле два последних события, связанные с Джимми Фэллоном, были фантастическими; занимался акро-йогой с Джимми, который слушает подкаст – привет, Джимми. Я прекрасно провел время.

    Кевин Роуз: Джимми классный.

    Тим Феррис: Вы проводили с ним время. Для людей, которым интересно, Джимми — это все, на что вы надеетесь, что он будет.

    Он самый милый, самый ободряющий, самый позитивный парень, которого только можно себе представить. Это так, заметно, и я не буду называть имен, но я был во многих СМИ.Работа на телевидении действительно тяжелая работа. Я не говорю о Джимми, хотя работа у него очень тяжелая; Я говорю обо всех. Это действительно тяжелый бизнес. Персонал этого шоу — счастливые люди. Как будто они шутили, хорошо проводили время. Это была очень, очень захватывающая и вдохновляющая культура, за которой я наблюдала, когда я шла на шоу. Был Джимми Фэллон, а потом было мероприятие Castro Theatre, которое я провел в Сан-Франциско. Это был фактически конец этого. Так что сейчас у меня период затишья.

    Кевин Роуз: Что ты чувствуешь при этом?

    Тим Феррис: Знаешь, я учусь привыкать к этому. Мне нравится иметь большое дело в работе. Мне нравится иметь патрон в патроннике наготове. Мы оба хорошо умеем ставить цели, а затем возвращаться к ним, устанавливая временные рамки; точно так же, как вы работаете над своими приложениями, верно? Вы думаете об этом очень методично, и это здорово для достижения, но это делает вас очень ориентированным на будущее.Я думаю, что вы можете оставить признательность и счастье на столе большую часть времени, если вы всегда ориентированы на будущее. Итак, я пытаюсь намеренно не иметь немедленного, огромного проекта, чтобы перейти к следующему. Как это заставляет меня чувствовать? Я буду честен; временами очень беспокойный. Потому что я чувствую, что все раскалено докрасна. Я чувствую, что многие люди поощряют ковать железо, пока горячо. И я думаю выборочно, это неплохой совет.

    Я помню, Би Джей Новак сказал мне однажды в этом подкасте, и я перефразирую, но он сказал, что если Уилл Смит не снимется в фильме через три года, люди не будут такими: где Уилл Смит? Этот парень ничего не сделал.Если у вас есть определенный талант или способности, вы можете снова привлечь внимание других людей, если потребуется. Итак, я думаю, что это чувство безотлагательности, когда вроде бы нет, я должен заняться другим важным делом или еще чем-то; или еще что?

    Я не думаю, что давление по своей природе полезно или полезно. Сейчас я только что закончил читать эту книгу. Я думаю, что это Кэл Ньюпорт написал книгу под названием « Глубокая работа », в которой рассказывается о том, как действительно смягчить реакцию, которую многие люди испытывают ежедневно или еженедельно, чтобы сосредоточиться на различных типах глубокой работы.

    Будь то выделение трех часов утром, выделение дня в неделю, выделение нескольких недель в году, как это делает Билл Гейтс, чтобы эффективно отключиться от сети и много читать и глубоко размышлять; иметь какие-то обязательства и заранее планировать, что позволит вам сделать это, — это то, о чем я много думал. Итак, в этом году я активно просматривал 2017 год и блокировал длительные периоды времени для неизвестных целей.

    Кевин Роуз: Мне было любопытно узнать об этих неизвестных целях, потому что я бы сказал, что впервые встретил вас, когда вы представили свою первую книгу на вечеринке по случаю запуска, Четырехчасовая рабочая неделя .

    Тим Феррис: Ага, Охота на Красный Октябрь.

    Кевин Роуз: Да, на лодке.

    Тим Феррис: На рабочем корабле СС «Иеремия» Службы национальной безопасности. Он сдается в аренду в Сан-Франциско.

    Кевин Роуз: Вы можете арендовать лодку для вечеринки.На самом деле это довольно неприятный старый военный корабль. Но единственное, что я видел у тебя, это то, что ты находил свою следующую вещь каждые несколько месяцев, или каждые шесть месяцев, или около того, или что-то в этом роде.

    Тим Феррис: Конечно.

    Кевин Роуз: Что ты хочешь, чтобы было написано на надгробии?

    Что будет, когда ты подведешь итог и умрешь? Мы все умрем. Что такое Тим Феррис в конце концов?

    Тим Феррис: Не думаю, что это будет что-то грандиозное.Я думаю, это был бы учитель, который всегда хотел, чтобы его ученики были лучше, чем он. Я думаю, что это все; что-то в этом духе.

    Кевин Роуз: Значит, ты считаешь себя учителем?

    Тим Феррис: Определенно больше, чем писатель. Письмо — это просто способ поделиться тем, чему я научился.

    Кевин Роуз: Ваше письмо — это учение, и все, что вы делали, было связано с обучением, верно?

    Тим Феррис: В каком-то качестве, абсолютно.Или это инструмент, который я использую для обучения. Я всегда думал, что буду учителем девятого или десятого класса. Я думаю, что это очень важное окно для многих детей; Я знаю, что это было для меня.

    Так уж получилось, что книга — и тем более подкаст, потому что он может быть второстепенным занятием по сравнению с книгой — дает возможность охватить больше, чем, скажем, класс из 30–50 детей или меньше, и занимает вместо этого миллионы, что является огромной возможностью. И я много думаю об этом.Это огромная возможность; это огромная ответственность не растратить его.

    Кевин Роуз: Чему вы хотите научить людей?

    Тим Феррис: Я хочу научить людей мыслить шире, подвергать сомнению ограничения, которые они сами для себя установили и которые были восприняты окружающими, будь то семья, друзья, критики и т. д., и проводить разумные испытания; разумно экспериментировать.

    Я думаю, что если вы сделаете эти три вещи, вы готовы ко многим вещам, по крайней мере, с точки зрения достижения цели.Если вы тренируетесь сами, и под тренировкой, я имею в виду систематическую практику, мыслите масштабно, подвергайте сомнению ограничения, которые вы накопили или усвоили от других людей, а затем разумно экспериментируйте и зная, как ограничить свои потери и как к этому недостатку без страха, если это имеет смысл.

    По сути, научиться спрашивать, что самое худшее может случиться, а затем планировать эксперименты в пределах границ; Я думаю, вы готовы ко многим вещам.Будь то изучение языка, построение крупного бизнеса, помощь группе людей в преодолении наркозависимости; что бы это ни было, я думаю, что эти трое очень, очень важны.

    Кевин Роуз: Когда люди смотрят на то, что вы сделали за последние несколько лет, вы запустили серию успешных книг, вы только что попали на обложку журнала Entrepreneur Magazine, это потрясающе, я думаю, со стороны in, и мне также повезло, что люди задают мне очень похожий вопрос, который я хочу задать вам.Они склонны думать, что люди, которые добились хоть немного успеха, сами во всем разобрались. Люди, у которых есть немного успеха, они все поняли. Я думаю, что на самом деле, по крайней мере для меня, это никогда не было так. Что вы не разобрались?

    Тим Феррис: Я думаю, вы могли бы спросить меня, что вы выяснили, и мне было бы трудно найти ответы, и этот список немного проще.

    Кевин Роуз: С чем вы боретесь? Я хочу немного углубиться здесь сегодня вечером.

    Тим Феррис: Думаю о женитьбе и детях, конечно.

    Кевин Роуз: Ладно, брак и дети, отношения сложные.

    Тим Феррис: Это сложно, потому что если я смотрю на это эмпирически, скажем, как инвестор в определенные социальные конструкции…

    Кевин Роуз: Почему для тебя это сложно?

    Тим Феррис: Подожди. Поскольку брак обычно оформляется или организуется, он не имеет большого успеха; это просто не так.Эмпирически управляемых данных в США просто нет.

    Кевин Роуз: Но мне кажется, что это та сторона, управляемая данными, что вы не можете… Как вы можете применить данные к любви?

    Тим Феррис: Думаю, любовь… Я хотел сказать, что это необходимо, но недостаточно. Но даже любовь не обязательно необходима для успешного брака. Я знаю, что это звучит странно, но я знаю людей, которые заключали браки по договоренности, научились любить друг друга, скажем, за 20 лет и создали замечательные семьи.

    Я также знаю, что более высокий процент людей, которые были страстно влюблены, не думали о долгосрочной совместимости или ценностной ориентации и заканчивали тем, что взорвались в сверхновую психологического и финансового разрушения. Итак, я не исключаю брака; хотя я думаю, что во многих отношениях это в значительной степени ненужные и бесполезные юридические конструкции. Дети мне интереснее. Это несколько областей моей жизни, в которые вовлечено множество переменных, меняя переменные, как известные, так и неизвестные, что сложно.Это сложно. И мне нравится быть действительно хорошим во всем, что я делаю.

    Кевин Роуз: Я знаю.

    Тим Феррис: Итак, погружаемся во что-то и говорим: ну, если получится, это будет круто; если этого не произойдет, это может стать полной катастрофой для меня и тех, кто мне дорог больше всего.

    Для меня это нелегкий прыжок веры. Итак, это два примера. Есть много вещей, которые я не понял.

    Кевин Роуз: Позвольте задать вам вопрос о любви.

    Тим Феррис: О боже.

    Кевин Роуз: Давай.

    Тим Феррис: Да, я сделаю это. Я сделаю это.

    Кевин Роуз: Позвольте мне пойти немного глубже, здесь. Выпейте немного вина.

    Тим Феррис: Я выпил так много саке, что этот пино нуар на вкус как саке, что действительно странно.

    Кевин Роуз: Сегодня мы выпили много саке. Итак, ты знаешь, что ты странный чувак, и это одна из причин, почему мы друзья, и я думаю, что это так здорово, потому что нам обоим нравится влезать в действительно странное дерьмо и экспериментировать со странностями. вещи.Я должен рассказать эту историю. Прости, Тим.

    Тим Феррис: О, Боже.

    Кевин Роуз: Не вырезайте это из серии. У вас есть окончательный файл, но не вырезайте его. Ты сказал мне сегодня в машине…

    Тим Феррис: О-о.

    Кевин Роуз: Могу я сказать это?

    Тим Феррис: Конечно. Я не знаю, что грядет.

    Кевин Роуз: Что ты пил свою мочу только потому, что тебе было любопытно, какая она на вкус.

    Тим Феррис: Дайте мне вернуться. Позвольте мне дать некоторый контекст, здесь. У меня есть друг…

    Кевин Роуз: Дамы не бегут, они стучат в вашу дверь. Может быть, несколько, но я не знаю, брачный ли это материал.

    Тим Феррис: Нет в моем запутанном профиле. Обычно это не то, с чем я веду. Мочевая кислота вперед. За относительно короткий период времени я познакомился с несколькими разными людьми. Один парень, который сказал, что его тетя, я думаю, была, он был индийцем, и он сказал, что его тетя пьет свою мочу где-то раз в месяц в лечебных целях, что не имело для меня особого смысла.Но я читал различные отчеты о людях, пьющих мочу, будь они в спасательной шлюпке или заполняют пробел, верно?

    Кевин Роуз: Конечно.

    Тим Феррис: Из всех странных вещей, которые я делал, я брал образцы цельной крови, вращал их в центрифугах и повторно вводил локально в раны.

    У меня были такие вещества, как соединения BMP, которые я импортировал для инъекций в соединительную ткань. Я делал очень странные вещи; действительно, очень странная вещь.Я понял, что никогда не делал глотка собственной мочи.

    Кевин Роуз: А еще ты никогда не ел бутерброд с дерьмом. Это не значит…

    Тим Феррис: Я знаю. Мы говорили об этом ранее, потому что один из наших друзей сказал, что это скользкий путь. Я такой: да, прежде чем ты это узнаешь, ты уже ешь бутерброды с дерьмом на обед. Вроде нет, не совсем. Итак, да, я странный парень, и я сделал это над раковиной, потому что подумал, что меня может стошнить, после дня фантастического увлажнения сделал глоток или два моей собственной мочи, и это было не так уж плохо, я должен сказать вам.Урожай Тима Ферриса 2016 года был вполне сносным.

    Кевин Роуз: Бутыль. У вас должно быть несколько поклонников, которые заплатят за это.

    Тим Феррис: Это было вполне терпимо. Но куда ты собирался с этим? Так что да, я упоминал об этом. Сегодня я выпил немного слишком много кофеина и добровольно делился всевозможной информацией.

    Кевин Роуз: Единственное место, куда я ходил с этим…

    Тим Феррис: И кстати, просто так, люди там не начинают пить свою мочу каждый день, я не рекомендую, ребята.Мне просто было любопытно.

    Кевин Роуз: Чертовски любопытно. Это весело.

    Тим Феррис: Я могу гарантировать вам, что не могу вспомнить ни одного законного врача, которого я знаю, который рекомендовал бы вам пить собственную мочу.

    Кевин Роуз: Верно. Так что, дети, не пытайтесь повторить это дома.

    Тим Феррис: Да, не пытайтесь повторить это дома.

    Кевин Роуз: Думаю, я имел в виду, что, будучи такими странными утками, какими являемся мы оба, свидания и поиск нужного человека должны быть трудными.У вас, вероятно, другой стандарт, у них, вероятно, другой… трудно ли найти совпадение?

    Тим Феррис: Вы знаете ответ; Это. Конечно, это является. И я также думаю, что я совсем не убежден, а на самом деле я совершенно убежден, вероятно, в обратном, что мне нужно или я хочу встречаться с длинноволосой версией Тима Ферриса. Я думаю, что это был бы полный кошмар; наверное, это был бы полный кошмар. Я ищу больше дополнения, чем совпадения, если это имеет смысл.

    Кевин Роуз: Это честно. Это умно. Я могу быть слишком хардкорным.

    Тим Феррис: В свою защиту скажу, что за последнее десятилетие у меня было несколько прекрасных отношений. У меня было много длительных, очень здоровых отношений.

    Кевин Роуз: Так что насчет работы? Что вы не разобрались?

    Тим Феррис: Спасибо за спасательный плот. Рабочие вещи, я скажу вам, я думаю, что я не озабочен работой. Есть много микродеталей, в которых я не разобрался, например, Slack или Facebook, или, может быть, я не знаю точно, какие из них.Но это показуха; это не материально. Это тривиальная, обыденная вещь, о которой я буду думать, потому что я нахожу ее технические аспекты интересными.

    Но на макроуровне нет надвигающихся, неприятных рабочих вопросов, с которыми я борюсь в данный момент.

    Кевин Роуз: Похоже, ты нашел дело своей жизни.

    Тим Феррис: В каком-то смысле я чувствую себя как подкаст… Он начался как перерыв в писательстве и творческая отдушина, способ свести к минимуму словесные тики и улучшить свое мышление, а также научиться задавать более правильные вопросы.Я с самого начала понял, что это была моя любимая часть процесса написания книги без написания; иметь возможность брать интервью у экспертов и слышать их мысли, лучше понимать их рутину и то, что заставляет их работать, а также неочевидные решения и все такое.

    А также для развития и совершенствования собственного мышления. Я думал об этом как о моей любимой части написания книг без написания. Но теперь это само по себе, и сам подкаст — это то, что мне очень нравится.

    Никогда не ожидалось, что он исчезнет, ​​пока его нет. Сейчас у меня 225, 250 серий. Это безумие, чувак. Мы сделали первый.

    Кевин Роуз: Да, я знаю. Это был пьяный эпизод.

    Тим Феррис: Это был очень пьяный эпизод.

    Кевин Роуз: Я помню, как ты пришел ко мне и сказал: «Я думаю о том, чтобы сделать подкаст». Я был в порядке, вы знаете, потому что я сделал более 500 эпизодов Diggnation, так что я был в порядке, как бы то ни было.Давайте практиковаться; давайте выпьем вина. Это оказалось дерьмовым шоу, но было весело.

    Тим Феррис: Это было такое дерьмовое шоу. О чувак.

    Кевин Роуз: Я рад, что был там. Для меня большая честь начать это с вами, так что это потрясающе.

    Тим Феррис: Да, было весело. Итак, что касается работы, я бы сказал, что вопрос, который я задаю себе, в этом, 2017 году, я решил много думать об абсурдности и красоте как о критериях для проектов, за которые я берусь.

    Потому что ни один из них не поддается очень хорошо, и мы могли бы обсудить это, но ни один из них сразу не поддается очень чистому аналитическому количественному определению, на которое я так сильно полагаюсь. Имеет ли это смысл? Я хорош в этом.

    Кевин Роуз: Приведите пример абсурда и красоты.

    Тим Феррис: Абсурд, я бы сказал простыми словами, это делать что-то просто так, черт возьми, что со стороны или, может быть, для кого-то, кажется, не имеет никакого смысла.

    Кевин Роуз: Моча.

    Тим Феррис: Нет, даже у этого есть история.

    Кевин Роуз: Ни для кого это не имеет смысла.

    Тим Феррис: Но повествование, стоящее за этим, имеет смысл. Например, если бы вы рассказали эту историю любому, кто действительно меня знает, они бы сказали: «Конечно, Тим выпил свою чертову мочу; большой сюрприз. Этот парень сумасшедший». Но я действительно хочу получать больше удовольствия, играя с так называемыми правилами, будь то крупномасштабные розыгрыши, неправильное направление или просто общая странность.

    Кевин Роуз: С какой целью? Чего вы надеетесь достичь?

    Тим Феррис: Нет никакой надежды на достижение.

    Кевин Роуз: Но я полагаю, что если вы собираетесь сделать что-то абсурдное, у вас должна быть гипотеза о том, чего вы хотите добиться от этого.

    Тим Феррис: Я думаю, что это расширит мой разум так, как я не мог раньше. Почти в каждой культуре, если вы посмотрите на мифологию и традиционные церемонии, есть человек, назначенный, почти как придворный шут, чтобы говорить правду власти, играть в царстве абсурда, быть шутником.А в некоторых случаях они будут поступать прямо противоположно тому, что принято в обществе. Итак, если вы там, в очень строгом обществе, например, где люди никогда не едят с открытым ртом, и я просто выдумываю.

    Но они могут бегать, скажем, есть рис и ронять его изо рта на этот временный период, как Карнавал в те времена, когда они делают все, что им не разрешено делать в остальное время. год. В некотором смысле они выступают в роли тестера границ и посредника между мирами.Это прозвучит странно, но я уже признался, что пил собственную мочу. Я думаю, что есть много силы; Я просто чувствую, что в этом пространстве есть много скрытых потенциальных возможностей, и мы недостаточно играем в этом пространстве. Я, конечно, нет. Это гиперлогично, и я думаю, что у этого есть определенные ограничения.

    Вместо того, чтобы пытаться мыслить масштабнее, мыслить масштабнее, мыслить масштабнее, что имеет место быть; что мысли о незнакомце, незнакомце и незнакомце на самом деле дадут мне больше того, что я хочу или в чем нуждаюсь, кое-что из того, в чем я, возможно, даже не осознаю, что мне нужно.Итак, вот что. И вы видели меня сегодня утром в машине, когда я был в огне. Я шутник, и я не сделал многого из этого. Я действительно не принял это. Это часть абсурда.

    А потом красота, и это может быть связано с абсурдом, я очень хорошо помню свой подкаст с Би Джеем Миллером, один из моих любимых подкастов, которые я делал. Врач хосписа или врач паллиативной помощи, который помог умереть более чем тысяче человек.

    Кевин Роуз: Я слушал его TED Talk.Это было замечательно.

    Тим Феррис: Да, это невероятно. Мы проговорили два часа, что бы это ни было.

    Я спросил его, везет ли он пациента, который умрет через недели или месяцы и не будет ли он очень общительным, не будет ли он взаимодействовать с другими пациентами и, скажем, печь печенье, например, что является одним из наиболее терапевтических видов деятельности, которые он упомянул по целому ряду причин. И в то же время я должен сказать, что, когда кто-то находится в хосписе, люди, которые приходят в гости, ожидают, что иногда у них будут эти вторники с Мори , широкомасштабные, философские, экзистенциальные наблюдения, которые полны смысла. на каждом обороте фразы, и это просто не то, что происходит.

    Многие умирают, просто выполняя свою повседневную рутину, например, чистя зубы, испражняясь, смотря телевизор и просто ожидая конца. Это не все огромные философские прорывы. Вот тут-то и появляется выпечка печенья, потому что она служит не чем иному, как вкусу, запаху и общему взаимодействию этих разных пациентов в их нынешнем состоянии и настоящем моменте.

    Но я его спросил, если кто-то не собирается этого делать, не заниматься, что бы ты им дал, если бы ты мог дать им три вещи? И он упомянул комедию, он сказал много места, много времени и места для того, чтобы просто смотреть и думать; а затем книга картин Марка Ротко.Я спросил его конкретно о картинах Марка Ротко, и он объяснил, что картины Марка Ротко, по сути, представляют собой чрезвычайно дорогие нарисованные квадраты.

    Около 80 миллионов долларов за огромную картину, состоящую из двух оранжевых квадратов на холсте. Я спросил его, почему? Он сказал — и я перефразирую — на самом деле, он хотел, чтобы люди задумались и обдумали, насколько красивым может быть что-то потенциально бессмысленное или бессмысленное; красота в бессмысленности.

    И, наоборот, когда люди приближаются к смерти, они сталкиваются с некоторыми из этих очень важных вопросов, на которые могут быть не очень хорошие ответы.Итак, что будет после того, как я умру? Почему я? Почему сейчас? Эти вопросы вызывают сильный стресс и могут привести к очень трудным и очень неприятным временам вплоть до самой смерти. Поэтому вместо этого подумайте о том, что, возможно, на это нет ответа, и, возможно, это неплохо, и что вам не нужны все ответы.

    Вы можете испытать красоту, вы можете увидеть красоту в обыденности и в этих чертовых нарисованных квадратах, которые продаются за 80 миллионов долларов. Вы можете смотреть на это, и вы можете попытаться понять это, и, скорее всего, вы не сможете понять это, но в то же время вы можете узреть некоторое ощущение эстетической красоты и впитать это.Я много думал об этом, потому что считаю, что люди — это машины для распознавания образов, и мы ищем ответы, смысл, смысл и логику во всем, что нас окружает.

    И иногда это приносит больше боли, чем радости, я думаю. Безусловно, это верно для меня. Так что, я думаю, это несколько причин, по которым я хочу делать больше художественных проектов, в некотором смысле. И, может быть, этот год не год больших событий для меня. Может быть, это год мелочей.

    Кевин Роуз: Да, я с тобой.Недавно я посещал занятия по деревообработке, которые проводились всего один вечер в неделю в течение нескольких недель. Деревообработка была чем-то, чем мой отец действительно увлекался до того, как он скончался, и у меня никогда не было хорошей возможности… Честно говоря, я был слишком занят, чтобы обращать на это внимание. Папа просто всегда в твоей памяти, он всегда будет рядом навсегда, а оказывается это не так и запах опилок до сих пор напоминает мне моего отца.

    Я вернулся к этому, и это было довольно круто.На самом деле, когда я вернусь в Нью-Йорк через пару дней после того, как мы взлетим, я также собираюсь пойти на традиционный японский урок столярного дела.

    Тим Феррис: Не хочешь рассказать людям о том, куда мы ходили сегодня днем?

    Кевин Роуз: О, чувак. Мы пошли и увидели одно из живых сокровищ Японии.

    Тим Феррис: Это правда? Дарья сказала мне, что да, я тоже занимаюсь деревообработкой.

    Кевин Роуз: Он? Нет, я этого не говорил.Как это вообще могло указать ему на это? Я не знаю, почему он так сказал.

    Тим Феррис: Мы посетили Кавагиту, мистера Кавагиту, живого национального достояния Японии.

    Кевин Роуз: С точки зрения деревообработки, и я думаю, что всего семь, и он был самым молодым, кто когда-либо получал Национальное достояние в 59 лет, а теперь ему 82 года. Прекрасная вещь.

    Тим Феррис: Да, потрясающе.

    Кевин Роуз: Мы оба увлеклись и купили несколько его вещей.

    Тим Феррис: Я так рад этому.

    Кевин Роуз: Да, значит, я.

    Тим Феррис: В некоторых случаях на изготовление этих деталей уходит пять-десять лет, потому что они должны медленно строгать огромный кусок дерева, превращая его во все меньшие и меньшие формы, и на каждом этапе они должны эффективно давать дереву высохнуть. , между прочим, так, с ним можно эффективно работать. Я не знала об опилках. Итак, когда вы вошли в мастерскую, повсюду были опилки и стружка.

    Кевин Роуз: О, абсолютно, это просто напоминает мне моего отца, на 100 процентов. Это круто. Я люблю делать такие вещи, хотя, в том же смысле, как заталкивать себя в неудобные ситуации. Дарья, моя жена, думает, что я сумасшедший, потому что я пытаюсь найти хотя бы три-пять вещей в год, которые подталкивают меня в новых направлениях. Например, недавно в Нью-Йорке шел снег, а я люблю гулять в Биркенштоках по снегу, и у меня мерзнут ноги.

    Не знаю, зачем я это делаю, но мне нравится, как это переносит меня в настоящий момент.Звучит безумно, но одна из вещей, которые мне действительно нравятся в медитации, это то, что я могу успокоить ум…

    Тим Феррис: Это тоже из тех, что «не пытайтесь повторить это дома, дети».

    Кевин Роуз: Да, я знаю.

    Тим Феррис: Не теряй пальцы на ногах.

    Кевин Роуз: Не то чтобы я пробыл там четыре часа. Но я выхожу туда и выгуливаю свою собаку, и мне кажется, что люди смотрят на меня немного странно. Но это так же, как вы чувствуете жизнь.Ты чувствуешь этот момент. Я прямо чувствую это, понимаешь? Я думаю, именно поэтому я тренировался на льду Вима Хофа. Это также, почему я сделал расширенное голодание. Подобные вещи действительно заставляют вас погрузиться в этот очень, очень настоящий момент, который потрясающий. И попасть туда непросто. Я не собираюсь вести себя как какой-то дзен-учитель буддизма, потому что в 99,9% случаев я таковым не являюсь.

    Но вы понимаете, о чем я говорю. Вы погружаетесь в медитацию, и в большинстве случаев, если быть откровенным, медитация — это просто ваш ум, прыгающий повсюду, будучи обезьяньим умом.

    Тим Феррис: Начос, начос, начос.

    Кевин Роуз: Но время от времени начос начос…

    Тим Феррис: Шарлатан.

    Кевин Роуз: Я никогда не делал утку. Но время от времени это просто превращается во что-то прекрасное, и это то, чего я хочу больше.

    Тим Феррис: Итак, как вы думаете о том, чтобы сделать больше для себя в этом году?

    Кевин Роуз: Боже мой, это первый год, когда я фактически покончил с новогодними обещаниями, потому что я не хочу заставлять себя что-то доказывать.Я на самом деле просто собираюсь принимать его месяц за месяцем. Мне только что исполнилось 40. Я чувствую себя довольно уверенно в жизни и хочу быть более уязвимым.

    Тим Феррис: Уязвим для кого?

    Кевин Роуз: Всем. Всем. Я чувствую, что всю свою жизнь я провел, пытаясь стать кем-то и постоянно пытаясь найти следующий уровень; повысить уровень. Искать «о, если бы я только мог зарабатывать X долларов в год», «если бы я только мог достичь этого», «если бы только мой стартап мог сделать это.Это всегда было попыткой повысить уровень. Во-первых, я больше не могу, потому что это физически тянет меня вниз, а во-вторых, счастья там нет. Я думаю, вам и мне очень повезло в том, что мы сделали удивительные вещи с точки зрения вещей, которые можно купить за деньги.

    И я могу сказать вам, что это не отсюда. Просто потому, что вы спите на немного лучшем матрасе, или у вас лучше стены, или лучше передний двор, или что-то еще, счастье начинается в мозгу.

    И пока ты не уладишь это, не примиришься и не примиришься со своим мозгом, ничто физическое не заполнит эту пустоту. Это то, что люди всегда говорят; Я не говорю ничего нового, здесь. Но я это понял. Я смотрел документальный фильм «Минималисты». Вы слышали об этих парнях?

    Тим Феррис: Да.

    Кевин Роуз: Мне нравится их общий посыл. Я думаю, что идея просто сократить расходы, и я продал кучу вещей на eBay.Я не пользовался eBay много лет, только что избавился от кучи дерьма и стал счастливее. У меня меньше вещей, которые нужно поддерживать, меньше мусора. У меня новое правило. О Боже. Это мое правило. Я из тех людей, которые очень увлекаются горячими новинками. Это означает, что если кто-то такой: о, вы должны попробовать эту добавку. И я знаю, что ты такой, Тим, потому что ты сказал мне, что у тебя около 20 бутылок неоткрытых добавок.

    Тим Феррис: Ну, мы говорили о доставке Amazon Prime в 2 часа ночи, и мы подумали, что это фантастическая идея.Тогда ты такой: подожди, а зачем мне три разных китайских массажера для ног? Как я их получил? И ты такой: о, я вижу, что произошло.

    Кевин Роуз: Правильно. Легко просто хотеть большего. Итак, мое новое правило заключается в том, что если это будет стоить, вероятно, я бы сказал, что больше 50 или 75 долларов, я жду 30 дней. Если через 30 дней я все еще очень-очень хочу его, и это имеет смысл с точки зрения моего бюджета или чего бы то ни было, и моя жена не будет злиться на меня, тогда я могу решить, покупать его или нет.

    Тим Феррис: Итак, как вы отслеживаете? Вы добавляете его в список желаний Amazon?

    Кевин Роуз: Да, я сохраняю его как список пожеланий, если он есть на Amazon. В противном случае я помещаю его в документ с напоминаниями.

    Тим Феррис: Напоминания док где?

    Кевин Роуз: В Apple встроено приложение для напоминаний. И я скажу вам, что я делал это уже около трех месяцев, и я бы сказал, что от 80 до 90 процентов того дерьма, которое я обычно покупал, я просто больше не покупаю.Это потрясающе. Это превосходно.

    И я меньше нервничаю. У меня меньше дерьма. Я сделал это с одеждой. Я только что пожертвовал тонну своей одежды, которую не ношу, и у меня, вероятно, есть четверть одежды, которую я использовал. Перед тем, как мы сели, ты сказал, что у меня есть 300 футболок.

    Тим Феррис: Нет, я не говорил 300. Я сказал, что у меня слишком много дерьма. И я вытащил эту рубашку, которая сейчас на мне, которую я получил бесплатно, и которую я люблю; это очень удобно. Но я подумал, что у меня, наверное, 60 футболок.Это чертовски смешно, A. и B) Я гарантирую вам, что любой, кто провел время со мной, может сказать: о да, вот восемь футболок, которые вы носите. Ты даже не носишь те остальные 40.

    Кевин Роуз: О да, я ношу черные футболки 99 процентов времени.

    Тим Феррис: Я фантазировал о том, чтобы пойти немного в стиле Джобса и просто получить униформу, говоря: «Хорошо, я буду носить брюки чинос Mizzen+Main с черной футболкой и шлепанцами Вана и Это оно.

    Кевин Роуз: Однако это тяжело для свиданий. Моя жена сказала бы: немного поменяй, понимаешь?

    Тим Феррис: Да, я в порядке. У меня не было бы никого, кто бы наложил вето на мою монотонность.

    Нет никого, кто бы заботился о таких вещах, чтобы наложить вето на однообразие моего гардероба. Что, если честно, не совсем подиумная одежда Gucci.

    Кевин Роуз: Я должен сказать, что это одна из вещей… Мы сделали эту небольшую вещь за ужином, что, когда мне исполнилось 40, я обошел стол и рассказал о вещах, которыми я действительно восхищался в каждом, кто был на ужин.Я не знаю, упоминал ли я это о вас, но поскольку вы увеличили свою популярность, богатство и все остальное за эти годы, вы все еще остаетесь прежними. У вас все еще есть футболки, шлепанцы, дешевая обувь и всякое дерьмо. Я люблю это, хотя. Ты просто держишь это в секрете, и это круто.

    Тим Феррис: Ну, я беспокоюсь об этом, и мы говорили об этом.

    Кевин Роуз: Опыт растяжки.

    Тим Феррис: Вы называете это растяжкой опыта.Я не знаю, почему это называется растяжкой опыта, но гедонистическая адаптация — то же самое.

    Это досадный феномен адаптации к новым уровням комфорта или качества вещей, которыми вы владеете, так что ваш новый базовый уровень, ниже которого вы становитесь неудовлетворенными и несчастными, поднимается все выше и выше и выше.

    Кевин Роуз: У меня есть лучшее объяснение, так что дерзайте. Вы начинаете, у вас запланирована замечательная поездка на Мауи, и вы такие: черт возьми, я иду на пляж; это будет потрясающе.Это восхитительно. Затем вы видите закат. Ты такой: о, красивый закат, это было здорово. Мне это очень понравилось. Ты иди в кровать. На следующий день вы просыпаетесь, другой закат. Прекрасный закат. О, угадайте что? Я собираюсь выпить стакан виски с этим. Это 12-летний скотч; это здорово.

    На следующий день ты просыпаешься. О, знаешь, что было бы здорово? Снова тот стакан виски, но знаешь, если бы я добавил к этому сигару, а у меня есть эти кубинские сигары, мой приятель дал мне; Я возьму один из этих.И вы продолжаете добавлять, наслаивать и растягиваться все это время. А вдруг угадайте что?

    Тот закат, оригинальный, красивый, удивительный подарок, который был у тебя в ту первую ночь, уже не такой особенный, потому что у тебя нет скотча, у тебя нет сигары, и ты испытал всю эту растяжку и вернуться оттуда очень сложно.

    Тим Феррис: Откуда вы взяли этот термин? Я никогда не слышал этого до того, как вы подняли его.

    Кевин Роуз: О, какая-то книга. Я должен был пойти разобраться. Это было несколько лет назад; какая-то книга, которую я читал.

    Тим Феррис: Итак, я много думаю об этой гедонистической адаптации. Вы упомянули Мауи несколько минут назад. Несколько недель назад я был на Каваи с Лэрдом Гамильтоном и Габби Риз. Лэрд Гамильтон, знаменитый серфер на больших волнах; всем стоит посмотреть Верховые великаны , документальный фильм. Это взорвет ваш разум. Жена Габби Риз одинаково впечатляет миллионом способов, как и множество других людей, таких как Брайан Маккензи и так далее, для тренировок XPT, которые включали воздействие льда, воздействие тепла, силовые тренировки под водой.

    Кевин Роуз: О, мне это нравится.

    Да, это интенсивно, и ряд других вещей. Келли Старрет тоже была там; все эти люди были на подкасте. Безопасное дозирование боли или дискомфорта, возможно, в таких обстоятельствах, и это тоже часть того, что мне нравится в идее униформы; говорит, что это не модные футболки, а как у Хейнса. Простое ношение чего-то супер простого, футболки за несколько долларов в течение нескольких недель поможет укрепить тот факт, что А) никому на самом деле не наплевать.Может быть, один из 100 человек даже заметит. А во-вторых, что это не имеет значения. В остальном это никак не влияет на мою жизнь. И на самом деле, это очень упрощает его.

    И, делая это, я с меньшей вероятностью буду чувствовать себя обязанным… Я все равно не покупаю много одежды.

    Кевин Роуз: Но ты такой выносливый, чувак. Не обязательно повторять одно и то же снова и снова. Вы хотите немного разнообразия для своего супруга, понимаете?

    Тим Феррис: Да, я тебя слышу, но я еще не совсем понял, А.Но Б) я действительно думаю, что пост и эти различные практики, и если вы действительно хотите стать занудой, слушая людей, вы можете проверить это; это доступно в свободном доступе. Если вы ищете Сенеку о праздниках и постах, то это письмо 13 в сборнике писем под названием «Письма к Луцилию». В нем говорится об выделении определенного количества дней в месяц или недели в квартале, чтобы прокормиться самой дешевой едой, самой грубой одеждой и т. д., чтобы компенсировать эту гедонистическую адаптацию, которая приводит к весьма плачевным результатам.

    Доведенные до крайности, мы оба знаем и проводили время с людьми, у которых есть сотни миллионов долларов, которые являются жалкими пиздами.

    Кевин Роуз: О, конечно.

    Тим Феррис: Я имел в виду, что они действительно несчастные люди, и они такие: о, мой день испорчен, потому что мой друг принес мне бутылку вина за 500 долларов вместо бутылки вина за 1000 долларов; Я даже пить это не могу.

    Кевин Роуз: Да, это очень плохо.

    Тим Феррис: Как будто это отвратительно. Это ужасное место, чтобы закончить. И не то чтобы я этого боюсь, потому что я пью вино за 4 доллара в магазине Trader Joes и большую часть времени совершенно счастлив. Но я беспокоюсь об этом. Это то, о чем я очень беспокоюсь.

    Кевин Роуз: Я не думаю, что тебе нужно беспокоиться так сильно, как большинству людей, чувак.

    Тим Феррис: Да, это правда.

    Кевин Роуз: Ты довольно спокойный.

    Тим Феррис: У меня не очень дорогие вкусы, за исключением случаев, когда речь идет о японской лаковой одежде, по-видимому.

    Кевин Роуз: И седла для лошадей.

    Тим Феррис: И седла для лошадей, да.

    Кевин Роуз: Ты приходишь к Тиму домой, а у него сумасшедшие позолоченные седла для лошадей и всякое дерьмо.

    Тим Феррис: У меня есть кое-какие странные вещи, которые я тоже собираю из Японии. О чувак.

    Кевин Роуз: Это весело.

    Тим Феррис: Еще одно широкомасштабное рандомное шоу. Что-нибудь еще, что вы хотели бы упомянуть, прежде чем мы…

    Кевин Роуз: Упомяну две вещи; небольшая заглушка в самом конце. Моя рассылка раз в месяц.

    Тим Феррис: О, два раза. Два раза в одном шоу.

    Кевин Роуз: Слушай, это тоже подкаст. Я говорил тебе, что снова запустил свой подкаст?

    Тим Феррис: Ты?

    Кевин Роуз: Ага.

    Тим Феррис: Правда?

    Кевин Роуз: Ага. Ну, теперь он под Журналом. Но да. Итак, у меня есть информационный бюллетень под названием The Journal. Вы можете подписаться на thejournal.email. Это раз в месяц.

    Тим Феррис: Отличный информационный бюллетень.

    Кевин Роуз: Отличный информационный бюллетень. У меня есть около 70 000 человек, которые проверяют это, поэтому я надеюсь, что вы присоединитесь к этому. Это также подкаст. У меня только что были замечательные гости.Я добавил туда Илона Маска и кучу других людей. Надеюсь, вы его послушаете. Вы можете просто ввести «Журнал, Кевин Роуз» в iTunes и найти его там. Так что, спасибо, ребята. Я признателен за это.

    Тим Феррис: Я дам еще пару рекомендаций для тех, кто хочет исследовать. Один из них — рекомендация саке.

    Кевин Роуз: О, Боже мой, это так здорово. Мы пошли на завод и проглотили его.

    Тим Феррис: Я должен просто упомянуть этот тур.Итак, экскурсия по фабрике саке включена в программу. Мы появляемся, и этот парень оказался отличным, но он такой: «О, привет, ребята. Хорошо, отлично. Снимай свою обувь. Заходи.» Это все на японском. Итак, мы заходим, и он как бы быстро проводит нас мимо кучи этих баков с саке. Он такой: хорошо, понял? Ладно, хорошо.

    Кевин Роуз: И посмотри на бак; оно пузырится.

    Тим Феррис: Посмотрите, как пузырится бак. Хорошо, отлично.Это тур. А потом он ведет нас в свой дегустационный зал.

    Кевин Роуз: Нет, подождите. До этого он делал одну вещь — в конце бака.

    Тим Феррис: Да, это был решающий аргумент.

    Кевин Роуз: Это был решающий аргумент. Вперед, продолжать.

    Тим Феррис: Итак, у него был черпак, в сущности, это лучший способ описать это.

    Он дал нам очень свежее, непастеризованное саке, честное слово, ребята.Я японофил, провожу здесь много времени. Я выпил много саке. Большинство из них имеют одинаковый вкус. Я имею в виду, я знаю, что это оскорбит многих людей, но в основном, в большинстве случаев вы говорите: ладно, это саке.

    Кевин Роуз: Хорошего саке.

    Тим Феррис: Если это ужасно, то это ужасно. Но это было чертовски невероятно.

    Кевин Роуз: Я хотел выпить весь ковш.

    Тим Феррис: Каждый в этом путешествии может выпивать изрядное количество алкоголя.Это опытные пьяницы. И все были поражены. Затем мы идем в дегустационный зал и ожидаем, что сядем, а он такой: вот, сначала у нас будет это; позвольте мне рассказать вам о заметках и бла-бла-бла. Но нет, он расставляет эти стаканы.

    Кевин Роуз: Каждый из нас получает по одному стакану.

    Тим Феррис: Десять бутылок подряд, и он такой: да, просто встаньте в очередь, как в буфете, идите вниз и выпейте по стакану каждой.

    Кевин Роуз: Он ставит бутылку со спиртом в верхнюю часть бутылки.Вы заметили это?

    Тим Феррис: О да, как бармен.

    Кевин Роуз: Как бармен, да. Итак, мы просто пошли по линии, и нас просто задавили.

    Тим Феррис: Да, в основном каждый человек был ошарашен к тому времени, когда он заканчивал 45-секундную дегустацию десяти стаканов саке.

    Кевин Роуз: Мы вошли и вышли через 45 минут, забили и купили все саке.

    Тим Феррис: О, самая эффективная работа по продажам.

    Кевин Роуз: Но… это так, хорошо.

    Тим Феррис: Сакэ восхитительно. Итак, у этого есть веселое название японского саке Kiss of Legend. Это Джунми Дигинго. Джунми — это чистое саке или неподдельное; это буквально означает чистый рис. Junmi, что, я думаю, просто означает, что они не добавили в него отдельный алкоголь, который вы наверняка можете попробовать. А потом дигинго, что означает, я думаю, процентов 60 или около того из рисовой шелухи, зерновой шелухи.

    Кевин Роуз: Я думаю, что это немного больше.

    Тим Феррис: Возможно, выше; был удален. Это должно быть достаточно легко найти. Я не знаю имени производителя в своем кунги, его немного трудно различить в этот момент вечером. Я также хотел бы сказать тем людям, которые ищут книгу для чтения, я читаю прямо сейчас — и я собираюсь пропустить имя автора, но это настолько фантастично, называется « Чингисхан и создание мира». Современный мир . Он великолепно проработан и хорошо написан и дополняет мою любимую серию подкастов, которые я когда-либо слушал, а именно Hardcore History ; это Дэн Карлин.

    Хардкорная история , Гнев ханов. Они очень, очень дополняют друг друга. Если вы больше любите аудио, вы можете либо послушать Wrath of the Khans на Hardcore History , либо получить аудиоверсию этой книги, которую я сейчас читаю. Я разбираюсь в ней всего на 5 процентов, но она невероятно умно написана и представляет собой просто убедительный и хорошо проработанный отчет об этой фигуре и о наследии, которое он оставил после себя.

    Кевин Роуз: Потрясающе.Последнее, что я добавлю, это документальный фильм под названием «Рождение Саке ». Я знаю, что мы говорили об этом раньше.

    Тим Феррис: О, да; фантастический.

    Кевин Роуз: Все снято на очень красивые HD-камеры. Наверное, сейчас все снимают на HD-камеры.

    Тим Феррис: Снято в красивом стандартном разрешении.

    Кевин Роуз: Красивый стандартный VHS. Нет, но это действительно охватывает все творение, от супа до орехов при создании саке и о том, сколько труда на самом деле уходит на этот процесс.Это была действительно трогательная история, поэтому посмотрите ее на Netflix.

    Тим Феррис: Хорошо, раз уж вы упомянули свой информационный бюллетень, думаю, я упомяну и свой. Я уверен, что вы можете добраться до этого. Пятница Пяти Пулей. Это очень популярно. У него очень много людей, наверное, около миллиона, которые получают это каждую пятницу. Это всего лишь пара рекомендаций, классные вещи, которые я нашел, такие как саке, книга или другие вещи, с которыми я сталкивался.

    Вы сможете найти его, если пойдете к Тиму.блог/пятница. Это бесплатно, и вы можете проверить это, Рождение Саке; фантастический. Кевин Роуз, [говорит по-японски], с днем ​​рождения.

    Кевин Роуз: [говорит по-японски]

    Тим Феррис: И мы скоро поговорим с вами, ребята. Подписание. Вы сможете найти ссылки на все, что мы упомянули, все полезности на обычной странице заметок к шоу: это tim.blog/podcast. До следующего раза, спасибо, ребята, что выслушали.

    Кевин Роуз: До встречи, ребята.

    Похожие и рекомендуемые

    Шоу Тима Ферриса — один из самых популярных подкастов в мире, его скачали более 700 миллионов раз. Он трижды входил в число «Лучших подкастов Apple», часто является подкастом № 1 с интервью во всех подкастах Apple и неоднократно занимал первое место из более чем 400 000 подкастов. Чтобы прослушать любой из прошлых выпусков бесплатно, зайдите на эту страницу .

    границ | Стволовые клетки, полученные из мочи, экспрессируют 571 нервно-мышечные расстройства, вызывающие гены, что делает их потенциальной моделью in vitro для редких генетических заболеваний

    Введение

    Нервно-мышечные заболевания (НМЗ) представляют собой широкий набор редких наследственных дегенеративных заболеваний, поражающих спинной мозг, периферические нервы, нервно-мышечные соединения и мышцы. Генетическая диагностика НМД быстро улучшилась благодаря недавнему развитию технологий, таких как секвенирование следующего поколения (NGS), которые ускорили открытие новых фенотипов и генотипов НМД, связанных с новыми классами мутаций (Tian et al., 2015). На сегодняшний день известно более 600 генов, которые вызывают НМД и являются потенциальной мишенью для персонализированной медицины. Действительно, последующая идентификация новых патогенных мишеней и связанных с ними биологических процессов привела к открытию новых терапевтических стратегий для расстройств, которые долгое время считались неизлечимыми. Среди 200 молекул на доклинических и клинических стадиях НМД большинство нацелено на мышечную дистрофию Дюшенна (МДД) и боковой амиотрофический склероз (БАС) (Cowling and Thielemans, 2019).Подходы генной терапии проходят клинические испытания для пациентов с мутациями в генах DMD , SOD1 (супероксиддисмутаза 1, растворимая) или C9orf72 (открытая рамка считывания 72 хромосомы 9) (Cappella et al., 2019; Fortunato и др., 2021). Несколько утвержденных FDA препаратов SMN (выживание двигательных нейронов), направленных на лечение спинальной мышечной атрофии (СМА), также были разработаны (Dowling et al., 2018; Al-Zaidy and Mendell, 2019).

    Несмотря на эти недавние разработки, потенциальные лекарства недоступны для большинства НМД.Прогресс в этой области строго зависит от доклинических исследований и поддерживается ими, а доступность клеточных и животных моделей для точного воспроизведения фенотипа заболевания является решающим и ограничивающим аспектом для открытия и разработки лекарств от НМД.

    Различные клеточные модели были охарактеризованы для улучшения молекулярной диагностики и функциональных исследований этих заболеваний. В настоящее время процедуры, используемые для получения специфических для пациента клеток, таких как миогенные клетки, фибробласты и индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК), в основном основаны на инвазивных методах (т.е., биопсии кожи и мышц) (Speciale et al., 2020). Повышенное внимание уделяется стволовым клеткам, полученным из образцов мочи (USC), которые в настоящее время используются в широкой области применения и в некоторых случаях заменяют традиционные источники клеток, полученные инвазивными и трудоемкими методами (Falzarano and Ferlini, 2019). USC представляют собой субпопуляцию клеток мочевыделительной системы со свойствами стволовых клеток, включая высокую пролиферативную способность, полипотентность и иммуномодулирующую способность.

    Нативные USC, прямо перепрограммированные USC и особенно USC-индуцированные плюрипотентные стволовые клетки использовались для изучения ряда генетических заболеваний. Интересно, что нативные USC, полученные от пациентов с болезнью Фабри, наследственным буллезным эпидермолизом или спинальной мышечной атрофией, демонстрировали типичные маркеры заболевания (Schosserer et al., 2015; Zhang et al., 2017; Slaats et al., 2018).

    Несмотря на то, что эти предыдущие исследования показали большой интерес к модели USCs, в области NMD доступно мало данных относительно их подробной характеристики транскрипции и белков.Было показано, что USC представляют собой идеальный источник для изучения заболеваний МДД и поясно-конечностной мышечной дистрофии (LGMD) 2-го типа (Falzarano et al., 2016; Kim et al., 2016), предполагая, что они могут иметь большой потенциал для моделирования другие нервно-мышечные заболевания.

    Здесь мы специально исследовали выходные данные RNA-seq для экспрессии 610 генов, мутации в которых вызывают NMD. Мы показали, что подавляющее большинство генов NMD (93%) транскрибируются как в нативных, так и в трансформированных MyoD USC, и что разные группы NMD в целом представлены с различной скоростью экспрессии генов.После миогенной трансформации USCs модифицируется экспрессия лишь нескольких генов.

    Затем мы подтвердили данные секвенирования РНК с помощью иммунофлуоресценции и/или вестерн-блоттинга (WB) для некоторых выбранных генов, вызывающих мышечные дистрофии, таких как COL6A (коллаген альфа 1, 2 и 3 типа), EMD ( Emerin), LMNA ( Lamin A/C), DYSF (дисферлин) и DAG1 ( Dystroglycan 1), а также другой набор генов, вызывающих заболевания двигательных нейронов, такие как SMN , UBA1 (убиквитин-активирующий фермент 1) , DYNC1h2 (динеин, цитоплазматический 1, тяжелая цепь 1), SOD1 и C9orf72 .

    С помощью иммунофлуоресценции мы обнаружили, что белок COL6A откладывается во внеклеточном матриксе (ECM), а с помощью анализа WB мы подтвердили, что он секретируется в клеточной среде. WB также продемонстрировал трансляцию всех других протестированных генов, в том числе генов с более низкими уровнями транскрипционной экспрессии, таких как SMN и C9orf72 .

    Наконец, мы распространили анализ белка на ген HTT (Huntingtin), вызывающий болезнь Гентингтона (БХ), как пример нейродегенеративного расстройства, при котором моделирование патологических процессов в клетках, специфичных для пациента, сопряжено с трудностями.Интересно, что мы обнаружили, что USC также синтезируют белок HTT.

    Результаты нашей работы показывают, что USC могут считаться подходящей моделью in vitro для тестирования COL6-миопатий (миопатия Бетлема и врожденная мышечная дистрофия Ульриха), мышечных дистрофий Эмери-Дрейфуса, СМА, БАС, болезни Шарко-Мари-Тута , мышечная дистрофия-дистрогликанопатия и HD, и мы предполагаем, что их использование может быть расширено до более чем 90% известных NMD, если дальнейшие исследования USC пациентов подтвердят наши результаты.

    Доступность новой модели in vitro , которую можно легко получить у пациентов с НМД и которая способна воспроизвести отличительные признаки заболеваний, должна ускорить открытие новых терапевтических молекул-кандидатов на доклинических стадиях и перевести их в клинические исследования.

    Материалы и методы

    Выделение стволовых клеток мочи человека

    Образцы мочи были получены от трех здоровых контролей (возраст субъектов: 42, 49 и 29 лет), а USC были получены и культивированы, как описано ранее (Falzarano et al., 2016).

    Вкратце, образцы мочи были получены от каждого субъекта и обработаны в течение 4 часов после сбора.

    Образцы мочи центрифугировали при 400×g в течение 10 минут при комнатной температуре и промывали фосфатно-солевым буфером (PBS; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) с добавлением раствора антибиотика/антимикотика (Sigma-Aldrich, Сент-Луис). , МО). После удаления супернатанта добавляли 1 мл первичной среды и каждый образец высевали на планшет с покрытием 0.1% желатин (Millipore, Billerica, MA). Первичную среду удаляли через 96 ч после посева и добавляли в каждую лунку по 1 мл среды для пролиферации к 1 мл первичной культуральной среды.

    Первичная среда: модифицированная Дульбекко среда Игла (DMEM)/высокая глюкоза (EuroClone, Pero, Италия) и питательная смесь Gibco Ham F12 (1:1; Thermo Fisher Scientific), дополненная 10% (об./об.) эмбриональной бычьей сыворотки ( FBS), антибиотик/антимикотический раствор (Sigma-Aldrich) и набор SingleQuot REGM (среда для роста почечных эпителиальных клеток) (Lonza, Базель, Швейцария).

    Среда для пролиферации: REGM BulletKit + базальная среда для клеток RE (Lonza) и среда для мезенхимальной пролиферации [DMEM/высокая глюкоза, 10% (об./об.) FBS, 1% (об./об.) Gibco GlutaMAX, 1% (об./об.) заменимые аминокислоты (Gibco NEAA), 1% антибиотик/антимикотический раствор, основной фактор роста фибробластов (bFGF, 5 нг/мл; ProSpec, Реховот, Израиль), тромбоцитарный фактор роста (PDGF-AB, 5 нг/мл) ; ProSpec), эпидермальный фактор роста (EGF, 5 нг/мл; Lonza)], смешанный в соотношении 1:1.

    Три нативных контрольных USC использовались как для секвенирования РНК, так и для анализа белков.

    Миогенез нативных USC индуцировали инфекцией аденовирусным вектором, происходящим от аденовируса серотипа 5 (Ad5), с делецией EA1, несущим ген MyoD, как описано ранее (Spitali et al., 2009).

    Транскрипционное профилирование стволовых клеток мочи с помощью анализа РНК-Seq

    Мы проанализировали уровни экспрессии генов нативных USC (WT-n) и MyoD-USC (WT-m) в РНК, полученной из пула трех здоровых контролей.

    Мы проанализировали пул из трех разных доноров, чтобы уменьшить биологические вариации среди образцов и убедиться, что вариабельность среди доноров не повлияла на профиль транскрипции.Тотальную РНК выделяли с использованием набора RNeasy-kit (Qiagen, Chatsworth, CA) в соответствии с инструкциями производителя. Библиотеки готовили с использованием набора TruSeq Kit (Illumina) в соответствии с инструкциями производителя. Качество и количество библиотеки РНК оценивали с использованием биоанализатора Agilent 2100 и системы ПЦР в реальном времени ABI StepOnePlus. РНК-секвенирование проводили на приборе Illumina HiSeq4000 в Пекинском институте геномики (BGI, Пекин). Качество чтения было проверено с помощью fastQC (v. 0.11.3). Необработанные чтения были обрезаны для адаптеров и по длине 100 п.н. с помощью Trimmomatic, в результате чего было получено около 22 млн (диапазон 14,8–31,7 млн) усеченных прочтений на образец. Впоследствии чтения были сопоставлены с эталонным геномом человека (GRCh48) с использованием STAR (v. 2.5.3a; Dobin et al., 2013). Необработанные подсчеты генов были получены в R-3.4.4 с использованием функции featureCounts пакета Rsubread R (v. 1.30.3; Liao et al., 2014) и аннотации гена Gencode. Необработанные подсчеты были нормализованы к FPKM (фрагментам на миллион килобаз) с использованием пакета edgeR (Robinson et al., 2010).

    гена были разделены на четыре группы на основе квантилей распределений FPKM. В частности, мы определили высокие те гены со значениями FPKM выше 90-го процентиля распределения значений FPKM; средние те гены со значениями FPKM, находящимися между 80-м и 90-м процентилем; low те гены со значениями FPKM, находящимися между 50-м и 80-м процентилями, и не экспрессировали остальные гены со значениями FPKM ниже медианных значений FPKM.

    Иммунофлуоресценция

    контрольных USC выращивали до слияния на покровных стеклах, а в среду добавляли 0.25 мМ аскорбиновой кислоты за 24 ч до сбора клеток. Для долговременных культур конфлюэнтные клетки выращивали в течение 6 сут в присутствии 0,25 мМ аскорбиновой кислоты, меняя среду каждые 2 сут. Иммунофлуоресцентный анализ коллагена VI проводили с использованием антител против α3-цепи коллагена VI, глобулярного домена (Squarzoni et al., 2006) (клон 3C4, Millipore) и двух поликлональных антител против коллагена VI (70R-CR009X, Fitzgerald; ab6588). , Abcam) с последующей инкубацией с антикроличьими и антимышиными FITC-конъюгированными антителами (DAKO).Образцы наблюдали с помощью эпифлуоресцентного микроскопа Nikon.

    Вестерн-блот-анализ

    WB-анализ культуральной среды COL6A, USC (обработанной в течение 24 ч 0,25 мМ аскорбиновой кислотой в отсутствие FBS) разделяли с помощью стандартного SDS-PAGE, электроблоттинга на нитроцеллюлозную мембрану и инкубировали с 70R-CR009X и специфическим антитело против цепи α1 (sc-20649, Santa Cruz) с последующей инкубацией с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP) против мыши или кролика.Хемилюминесцентное обнаружение проводили с помощью набора реагентов для обнаружения ECL (GE Healthcare Amersham) в соответствии с инструкциями поставщика.

    Все остальные анализы были выполнены с использованием следующего метода. Клетки USC от трех здоровых контролей (ctrl1, ctrl2, ctrl3) собирали в буфере для лизиса (мочевина 4 М, Трис 125 мМ pH 6,8, SDS 4%), содержащем ингибиторы протеазы и фосфатазы (Roche, Merck United Kingdom). Количественное определение белков проводили с помощью набора Pierce BCA (Thermo Fisher Scientific, США).Белки разделяли с использованием градиентных гелей NuPAGE 3–8% трис-ацетат или NuPAGE 4–12% Bis-Tris (Thermo Fisher Scientific) и переносили на нитроцеллюлозную мембрану (Amersham Protran, GE Healthcare, Великобритания). Мембраны блокировали в течение 1 ч при комнатной температуре (КТ) в 10% нежирном молоке TBS-T (трис-буферный раствор + 0,1% твин20) или в 3% БСА в 100 мМ NaCl, 20 мМ Трис, рН 7,4. Затем их инкубировали в течение ночи при 4°C с первичными антителами (детали представлены в таблице 1).

    Таблица 1. Список антител, нацеленных на гены NMD, изученных с помощью иммунофлуоресценции (IF) и вестерн-блоттинга (WB).

    На следующий день, после 3 промывок по 10 мин в буфере при комнатной температуре, мембраны инкубировали с соответствующими вторичными антителами: ослиными антикроличьими или ослиными антимышиными IRDye ® (1:10 000, Li-Cor, США). ) в течение 1 ч при комнатной температуре. После 3 промывок в буфере по 10 мин при комнатной температуре мембраны визуализировали с помощью системы инфракрасного изображения Odyssey (Li-Cor, США).Поскольку основной целью было выяснить, имеется или нет экспрессия белка, для каждого антитела использовали только один или два геля с одним повтором для каждого индивидуума.

    Результаты

    Профилирование экспрессии нервно-мышечных генов

    Всего мы идентифицировали транскрипты 20 716 генов в двух условиях: USC WT-n (нативный) и WT-m (MyoD). Эти 20 716 генов были разделены на четыре группы на основе распределения значений FPKM. В частности, мы идентифицировали 2071 ген с высокой экспрессией (т.е., с FPKM выше 31,19 и 27,16 для WT-n и WT-m соответственно), 2071 ген со средней экспрессией (т.е. со значениями FPKM в диапазоне 31,19–15,54 и 27,16–13,26 для WT-n и WT- m соответственно), 6215 генов со средней экспрессией (т.е. со значениями FPKM в диапазоне 15,54-2,73 и 13,26-2,76 для WT-n и WT-m соответственно) и 10358 неэкспрессированных генов (т.е. со значениями FPKM ниже чем 2,73 и 2,76 для WT-n и WT-m соответственно). Все гены с соответствующими значениями FPKM и категориями экспрессии перечислены в дополнительной таблице 1.

    Затем мы сосредоточились на 610 генах, которые, как известно, вызывают нервно-мышечные заболевания и относятся к 16 различным группам расстройств (см. сноску 1 к тексту, по состоянию на 16 марта 2021 г.; дополнительная таблица 2). Мы обнаружили, что 571 из этих генов NMD присутствовали в матрице данных экспрессии генов WT USC (дополнительная таблица 3) и что 379 и 406 из них имели высокую, среднюю и низкую экспрессию в WT-n и WT-m USC соответственно. . В частности, WT-n и WT-m имели более 50% общих генов NMD при высокой и низкой экспрессии, в то время как только 30% генов NMD при средней экспрессии были общими для обоих образцов (рис. 1A–C).Интересно, что WT-m модифицировал уровни экспрессии 154 генов (около 25% от общего количества генов NMD), которые в результате миогенной дифференцировки оказались чрезмерно представленными. Среди генов NMD, которые не экспрессировались в USC WT, 138 не экспрессировались как в WT-n, так и в WT-m, тогда как 54 и 27 генов не экспрессировались специфически в WT-n и WT-m соответственно (рис. 1D).

    Рисунок 1. Диаграмма Венна , показывающая перекрытие экспрессируемых генов NMD, принадлежащих к четырем группам экспрессии в USC WT-n и WT-m ( A: высокий; B: средний; C: низкий; D: без пояснения).Более 50% генов NMD с высокой и низкой экспрессией были общими для WT-n и WT-m (A,C) , в то время как только 30% генов NMD со средней экспрессией были общими в обоих образцах (B ) .

    Экспрессия нескольких генов NMD ( n = 43), либо не экспрессированных, либо со слабой экспрессией в нативных USC, была восстановлена ​​после миогенной дифференцировки, таких как DES (Desmin), SGCD (Delta-sarcoglycan), SGCA (альфа-саркогликан), DTNA (дистробревин, альфа), MYL1 (миозин, легкий полипептид 1, щелочной, скелетный быстрый), STAC3 (Sh4 и богатый цистеином домен 3) (дополнительная таблица 3).Наоборот, некоторые гены, которые обычно не экспрессируются в миогенных клетках, как и ожидалось, подавляются миогенной дифференцировкой, как COL6A (Braghetta et al., 2008), PLEKHG5 (гомология Pleckstrin и домен RhoGEF, содержащий G5) (Kim et al. ., 2013) и генов SPTBN2 (Spectrin beta, non-erythrocytic 2) (Perkins et al., 2016) (дополнительная таблица 3).

    Транскрипты, относящиеся к подавляющему большинству групп заболеваний, были хорошо представлены как в нативных, так и в миогенных USC, за исключением тех, которые связаны с заболеваниями мышц ионных каналов и злокачественной гипертермией, которые не экспрессировались ни в одном типе клеток, как показано в дополнительной таблице 4.В частности, USC WT-n и WT-m не экспрессировали гены, кодирующие натриевый канал ( SCN4A ), хлоридный канал ( CLCN1 ), кальциевый канал ( CACNA1S, CACNA1A ), калиевый канал ( KCNJ18, KCNA, KCNE3 ) и Na + /K + -АТФазы ( ATP1A2 ).

    Среди мышечных дистрофий LGMD и дистрофия Эмери-Дрейфуса (EDMD) являются примерами заболеваний, большинство генов которых экспрессируется в нативных и/или MyoD USC, таких как DES и TTN (титин), вызывающих LGMD, SYNE1 ( белок ядерной оболочки, содержащий повторы спектрина), участвующий в EDMD, DYSF (дисферлин), связанный с LGMD2B и миопатией Миёси (дополнительная таблица 4).

    Все гены, связанные со СМА и БАС, входящие в группу заболеваний двигательных нейронов, экспрессируются в USC дикого типа. В частности, SMN1 , вызывающий наиболее распространенную форму СМА (типы 1–4), экспрессируется как в нативных, так и в миогенно-индуцированных USC. UBA1 (убиквитин-активирующий фермент 1) (Baumbach-Reardon et al., 2008), DYNC1h2 (тяжелая цепь 1 цитоплазматического динеина 1) (Juntas Morales et al., 2017), ASAh2 (N-ацилфингозинамидогидролаза (кислая церамидаза) 1) (Topaloglu and Melki, 2016) и GARS (глицил-тРНК-синтетаза) (Antonellis et al., 2003) гены, связанные с другими фенотипами СМА, показали высокие уровни экспрессии как в нативных, так и в миогенных USC.

    Что касается БАС, то большинство генов, участвующих в различных фенотипах, очень хорошо экспрессируются, например, SOD1 , VCP (валозин-содержащий белок), SQSTM1 (секвестосома 1), HNRNPA1 (гетерогенный ядерный рибонуклеопротеин A1) и ПФН1 (Профилин 1).

    Анализ белков

    Для оценки динамики внеклеточной сборки белка коллагена VI нативные культуры USC выращивали до слияния и обрабатывали аскорбатом в течение 24 ч (кратковременно) или 6 дней (длительно).Используя поликлональное антитело (70R-CR009X), иммунофлуоресцентная микроскопия показала, что коллаген VI уже присутствовал в матриксе USC после кратковременной обработки, однако обширная нитевидная сеть была видна только в долгосрочных культурах (рис. 2A, B). . Аналогичная картина была получена с поликлональным антителом ab6588 (рис. 2B), тогда как антитело против цепи α3 (1944 Millipore) и антитело против N2-N7 α3(VI) (Sabatelli et al., 2011) (данные не показаны). ) не распознавал белок COL6A в USC.С другой стороны, свидетельство секреции гетеротримера COL6A было подтверждено анализом WB клеточной среды, который продемонстрировал наличие четких полос при предсказанных молекулярных массах цепей α3, α1 и α2 (рис. 2C).

    Рис. 2. (A) Иммунофлуоресцентный анализ белка COL6A в контрольных культурах USC после обработки L-аскорбатом в течение 24 ч (левая панель) и 6 дней (правая панель) с антителом 70R-CR009X, демонстрирующим нитевидную форму (стрелки) и паутинообразное расположение (стрелки) белка, отложенного во внеклеточном матриксе.Ядра окрашивали DAPI. Масштабная линейка, 40 мкм. (B) Высокое увеличение белка COL6A, полученного с двумя разными антителами, как показано, демонстрирует организацию в виде паутинных структур. Ядра окрашивали DAPI. Масштабная линейка, 20 мкм. (C) Анализ WB культуральной среды USC после обработки L-аскорбатом. Белок COL6A выявляли с помощью иммуноблоттинга с антителами, распознающими либо все цепи COL6A (Fitzgerald 70XR95), либо α1-цепь (Santa Cruz sc-20649).

    Анализ WB нативных USC (рис. 3) для всех других выбранных генов (табл. 1) показал полосы с предсказанной молекулярной массой для всех протестированных антител.Мы обнаружили белки для всех четырех категорий экспрессии (табл. 2), включая гены, принадлежащие к группе с более низкими значениями FPKM. Поскольку генов DAG1 кодируют дистрогликан, белок, который затем расщепляется на два белка (α- и β-дистрогликан) (Brancaccio, 2019), мы проверили экспрессию обоих белков. Для оценки α-DG использовали антитело (IIH6), которое связывается со специфическим гликановым эпитопом на α-DG, и для сравнения также загружали лизат скелетных мышц (4-я полоса, рисунок 3).

    Рисунок 3. Экспрессия белка в нативных USC от трех контрольных особей (ctrl1, ctrl2 и ctrl3) на WB. Репрезентативное изображение результатов белков показано сверху вниз в зависимости от экспрессии их транскриптов (от самого высокого до самого низкого значения FPKM, таблица 2). Для DAG1 использовали два антитела (IIH6 и βDG), поскольку этот ген кодирует два белка, α- и β-дистрогликан. Антитело IIH6 связывается со специфическим эпитопом гликана на α-DG. Для сравнения на 4-й дорожке показано гликозилирование в скелетных мышцах человека.

    Таблица 2. Список генов, включенных в анализ белка.

    Заключение

    Понимание патофизиологических механизмов, лежащих в основе редких генетических заболеваний, необходимо для разработки новых терапевтических подходов. Таким образом, реалистичная модель заболевания, способная точно воспроизвести патологию, имеет решающее значение. К сожалению, отсутствие in vitro моделей болезней человека или даже моделей для конкретных пациентов часто вынуждает использовать модели на животных, в основном на мышах, что создает проблемы из-за генетических и физиологических различий между людьми и животными, что приводит к низкой эффективности и безопасности в клинических исследованиях. испытания (Сато и др., 2019). Кроме того, Дирекция ЕС настоятельно рекомендовала использовать модели, не связанные с животными, и недавно опубликовала первый обзор строгого законодательства, направленного на защиту исследовательских животных.

    Поиск легкодоступного источника специфических для пациента клеток, особенно при заболеваниях, затрагивающих недоступные ткани, такие как скелетные и сердечные мышцы и центральная нервная система, позволил бы преодолеть эти ограничения и улучшить прогресс в области персонализированной терапии.

    В предыдущем исследовании мы продемонстрировали применимость USC в качестве неинвазивного и неограниченного источника клеток, моделирующего МДД (Falzarano et al., 2016), но лишь в нескольких исследованиях оценивалась полезность USC для моделирования других NMD (Falzarano et al., 2016; Sato et al., 2019).

    Целью нашего исследования было определить, могут ли USC представлять собой клеточную модель для других NMD.

    Мы охарактеризовали профиль экспрессии 610 генов, вызывающих NMD в нативных и миогенно трансформированных USC дикого типа. Интересно, что мы обнаружили, что 571 транскрипт экспрессируется в USC WT, что позволяет предположить, что USC могут моделировать различные NMD, по крайней мере, на уровне транскрипции.Действительно, подавляющее большинство групп NMD были хорошо представлены, а некоторые гены показали лишь слабую экспрессию или отсутствие экспрессии как у WT-n, так и у WT-m. Примерами этого являются гены заболеваний мышц с ионными каналами и гены, связанные со злокачественной гипертермией. Как нативные клетки, так и клетки MyoD не экспрессировали мРНК натриевых, хлоридных, кальциевых и калиевых каналов. Следовательно, USC не являются подходящим инструментом для изучения патогенных путей или эффектов мутации этих генов. Тем не менее, сообщалось, что USC от пациента с легкой формой синдрома удлиненного интервала QT 2 типа могут быть перепрограммированы в iPSCs, которые дифференцируются в функциональные кардиомиоциты, повторяющие фенотипы сердечной аритмии, вызванные мутацией в гене KCNh3 (Jouni et al., 2015). Соответственно, USC можно считать привлекательным источником для создания iPSC для изучения болезней ионных каналов человека, а также других заболеваний.

    Группируя гены по уровням их экспрессии, мы обнаружили, что миогенная трансформация USC изменила уровни экспрессии ограниченного набора генов с высокой, средней и низкой экспрессией, и только несколько генов, которые не экспрессировались в нативных USC, вернулись к положительное выражение. Эти гены, такие как DES , SGCD и SGCA , DTNA , MYL1 , STAC3 , неудивительно, связаны с функцией мышц.Это открытие позволяет предположить, что прямое перепрограммирование USCs в миогенную клеточную линию необходимо для продукции некоторых транскриптов, тесно связанных с мышечной функцией. Напротив, нативные USC представляют собой идеальную клеточную модель для генов, в основном экспрессирующихся во внеклеточном матриксе, которые слабо представлены в миогенных клетках, таких как COL6A , патогенные вариации которых вызывают болезни Бетлема и Ульриха (Tagliavini et al., 2014). Это предположение подтверждается нашими данными иммунофлуоресценции и WB, предполагающими, что USCs являются потенциальным инструментом для изучения in vitro COL6A , поскольку они способны продуцировать и секретировать белок фибриллярного коллагена VI.

    Кроме того, в отличие от фибробластов кожи, антитела против цепи α3 (N2–N7 и глобулярный домен) не распознавали коллаген VI в USC. С другой стороны, цепь α3 секретировалась, что подтверждается анализом WB в условиях денатурации, который показал дублет при 250 кДа. Эти данные указывают на дополнительные посттрансляционные модификации или конформационные изменения α3(VI) в культурах USC. Экспрессия цепей коллагена VI сильно регулируется на разных уровнях, а N-конец α3(VI) имеет несколько потенциальных сайтов гликозилирования, которые могут генерировать дополнительную молекулярную гетерогенность за счет присоединения разветвленных олигосахаридов (Lampe and Bushby, 2005).

    Аналогичные результаты были получены при использовании антител против альфа-дистрогликана (IIH6), направленных против углеводного эпитопа (Ervasti et al., 1997), которые дают полосу с более низкой молекулярной массой в USCs по сравнению с мышечной тканью, показывая, что менее гликозилированная форма α-дистрогликана экспрессируется в USCs. Эти модификации могут быть специфичными для тканей/типов клеток и, что касается различных уровней транскриптов, связаны с состоянием дифференцировки клеток.

    Белковый анализ всех других выбранных генов не показал различий в экспрессии между генами, относящимися к четырем категориям экспрессии (высокая, средняя, ​​низкая экспрессия или отсутствие экспрессии).Более того, клетки, в которых гены имели слабую экспрессию транскрипта, продуцировали белок с четким и интенсивным сигналом, например белки SMN1 и C9orf72. Чтобы расширить спектр заболеваний за пределы области NMD, мы изучили ген HTT , мутации в котором вызывают HD, аутосомно-доминантное, летальное, нейродегенеративное заболевание (Hong et al., 2021). Мы показали, что ген HTT хорошо представлен как на уровне транскрипта, так и на уровне белка. Этот вывод очень актуален, поскольку USC можно использовать для моделирования HD, возможно, без какого-либо перепрограммирования (Csobonyeiova et al., 2020).

    В заключение мы впервые показываем, что различные заболевания, связанные с НМД, могут быть успешно изучены в ОСК. Среди 610 генов NMD, исследованных с помощью RNA-seq, 93% были высоко транскрибированы, и последовательно экспрессировались все 11 протестированных нами белков. Транскрипт гена HTT и положительная реакция на белок убедительно свидетельствуют о том, что USCs можно использовать в качестве клеточного инструмента для изучения других дегенеративных заболеваний центральной нервной системы.

    Это исследование показывает, что USC могут быть приняты для фундаментальных исследований, а также могут быть использованы, если они одобрены, для диагностики и клинического применения в контексте редких заболеваний.Однако, поскольку мы сосредоточили наше исследование только на здоровых донорах, необходимы дальнейшие углубленные исследования, чтобы преодолеть это ограничение и продемонстрировать, что USC, полученные от пациентов, страдающих различными заболеваниями и несущих мутации определенных генов, могут резюмировать специфический для заболевания клеточный фенотип.

    Мы ожидаем, что эти новые данные предоставят ресурсы для разработки новой модели USC in vitro для нескольких НМД, что будет способствовать пониманию некоторых патологических механизмов и открытию новых терапевтических подходов.

    Заявление о доступности данных

    Данные

    секвенирования РНК для этого исследования были депонированы в базе данных GEO под регистрационным номером GSE162108.

    Заявление об этике

    Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Комитетом по этике UNIFE, утвержденным № 161299 (20 мая 2020 г.). Пациенты/участники предоставили письменное информированное согласие на участие в этом исследовании.

    Вклад авторов

    MSF и AF разработали исследование.MSF и RR написали рукопись. HO провел выделение и культивирование клеток. MF, ZL и WL выполнили анализ необработанных данных секвенирования РНК. AG, SB и RR выполнили биоинформатический и статистический анализ результатов секвенирования РНК. ST, PS и MA выполнили анализ белка. FG, RS и CA-K критически отредактировали рукопись. ST и AF завершили рукопись. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

    Финансирование

    Это исследование проводилось при финансовой поддержке Duchenne Parent Project Italy (биобанк мочевых стволовых клеток, грант №.11/2018 по AF). Эта работа была поддержана Национальным институтом исследований в области здравоохранения, Центром биомедицинских исследований при Больнице для детей на Грейт-Ормонд-Стрит, Доверительным фондом Фонда NHS и Университетским колледжем Лондона, а также Центром нервно-мышечных заболеваний MRC Biobank.

    Конфликт интересов

    AF является главным исследователем клинических испытаний Sarepta Therapeutics Essence и MIS51ON для лечения МДД, а также руководителем текущих грантов на диагностику МДД, финансируемых PTC Therapeutics и Sarepta Therapeutics.

    Остальные авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Примечание издателя

    Все претензии, изложенные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно представляют претензии их дочерних организаций или издателя, редакторов и рецензентов. Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или претензии, которые могут быть сделаны его производителем, не гарантируются и не поддерживаются издателем.

    Благодарности

    Мы хотели бы поблагодарить Дженнифер Э. Морган (Университетский колледж Лондона, Лондон, Соединенное Королевство) за ее критическое прочтение рукописи и английскую редакцию, а также Пьерпаоло Ала (Университетский колледж Лондона, Лондон, Соединенное Королевство) за его техническую помощь.

    Дополнительный материал

    Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fphys.2021.716471/full#supplementary-material

    .

    Дополнительная таблица 1 | Список идентифицированных 20 716 генов, экспрессируемых в USC WT-n и WT-m.Гены были разделены на четыре группы на основе квантилей FPKM, т. е. высокие, если значения FPKM превышали 90-й процентиль распределения значений FPKM; средний, если значения FPKM находились между 80-м и 90-м процентилями; низкий, если значения FPKM находились между 50-м и 80-м процентилем; и не выражался, если значения FPKM были ниже медианы FPKM.

    Дополнительная таблица 2 | Список генов, вызывающих НМД (http://www.musclegenetable.fr/, по состоянию на 16 марта 2021 г.).

    Дополнительная таблица 3 | Список генов NMD, экспрессируемых как в USC WT-n, так и в WT-m. В таблице показан 571 транскрипт NMD, экспрессированный в USC WT, с относительным значением FPKM, рангом и категорией экспрессии, экстраполированными из дополнительной таблицы 1.

    Дополнительная таблица 4 | Список из 16 категорий (AR) НПРО. В таблице показано значение FPKM и категория экспрессии всех генов, принадлежащих к 16 группам NMD, при сравнении USC WT-n и WT-m.

    Сноски

    Ссылки

    Аль-Зайди, С.А., и Менделл, Дж.Р. (2019). От клинических испытаний к клинической практике: практические соображения по генно-заместительной терапии при СМА типа 1. Pediatr. Нейрол. 100, 3–11. doi: 10.1016/j.pediatrneurol.2019.06.007

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Антонеллис, А., Эллсуорт, Р. Э., Самбугин, Н., Пульс, И., Абель, А., Ли-Лин, С.К. и др. (2003). Мутации глицил-тРНК-синтетазы при болезни Шарко-Мари-Тута типа 2D и дистальной спинальной мышечной атрофии типа V. Am. Дж. Хам. Жене. 72, 1293–1299. дои: 10.1086/375039

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Баумбах-Риардон, Л., Хантер, Дж. М., Ахерн, М. Э., и Пфауч, М. (2008). «Спинальная мышечная атрофия, инфантильная, сцепленная с Х-хромосомой», в GeneReviews§ Edn, редакторы M.P. Adam, HH Ardinger, R.A. Pagon, S.E. Wallace, L.Дж. Х. Бин, Г. Мирзаа и др. (Сиэтл: Вашингтонский университет).

    Академия Google

    Брагетта П., Феррари А., Фаббро К., Биззотто Д., Вольпин Д., Бональдо П. и др. (2008). Энхансер, необходимый для транскрипции гена Col6a1 в мышечной соединительной ткани, индуцируется сигналами, высвобождаемыми мышечными клетками. Эксп. Сотовый рез. 314, 3508–3518. doi: 10.1016/j.yexcr.2008.08.006

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Чобонеева, М., Полак С. и Данисович Л. (2020). Недавний обзор использования иПСК для моделирования и терапии болезни Гентингтона. Междунар. Дж. Мол. науч. 21:2239. дои: 10.3390/ijms21062239

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Добин, А., Дэвис, К.А., Шлезингер, Ф., Дренков, Дж., Залески, К., Джха, С., и соавт. (2013). STAR: сверхбыстрый универсальный выравниватель RNA-seq. Биоинформатика 29, 15–21. doi: 10.1093/биоинформатика/bts635

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Даулинг, Дж.Дж., Д. Гонораски, Х., Кон, Р. Д., и Кэмпбелл, К. (2018). Лечение нервно-мышечных расстройств у детей: будущее уже наступило. утра. Дж. Мед. Жене. Часть А 176, 804–841. doi: 10.1002/ajmg.a.38418

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ervasti, J.M., Burwell, A.L., and Geissler, A.L. (1997). Тканеспецифическая гетерогенность сиалогликозилирования альфа-дистрогликана. Альфа-дистрогликан скелетных мышц представляет собой латентный рецептор агглютинина b4 Vicia villosa, замаскированный модификацией сиаловой кислоты. J. Biol. хим. 272, 22315–22321. doi: 10.1074/jbc.272.35.22315

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Фальзарано, М.С., Д’Амарио, Д., Сиракузано, А., Массетти, М., Амодео, А., Ла Неве, Ф., и др. (2016). Мышечная дистрофия Дюшенна Миогенные клетки из стволовых клеток, полученных из мочи, резюмируют генотип и фенотип дистрофина. Гул. Джин Тер. 27, 772–783. doi: 10.1089/hum.2016.079

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Фортунато, Ф., Росси, Р., Фальзарано, М.С., и Ферлини, А. (2021). Инновационные терапевтические подходы к мышечной дистрофии Дюшенна. Дж. Клин. Мед. 10:820. doi: 10.3390/jcm10040820

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Hong, E.P., MacDonald, M.E., Wheeler, V.C., Jones, L., Holmans, P., Orth, M., et al. (2021). Патогенез болезни Гентингтона: два последовательных компонента. J. Huntingtons Dis. 10, 35–51. DOI: 10.3233/JHD-200427

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Джуни, М., Si-Tayeb, K., Es-Salah-Lamoureux, Z., Latypova, X., Champon, B., Caillaud, A., et al. (2015). На пути к персонализированной медицине: использование кардиомиоцитов, дифференцированных из плюрипотентных стволовых клеток, полученных из мочи, для воспроизведения электрофизиологических характеристик синдрома удлиненного интервала QT 2 типа. Дж. Ам. Сердечный доц. 4:e002159. doi: 10.1161/JAHA.115.002159

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ким, Э. Ю., Пейдж, П., Деллефав-Кастильо, Л. М., МакНалли, Э.М. и Вятт, Э. Дж. (2016). Прямое перепрограммирование клеток, полученных из мочи, с помощью индуцируемого MyoD для моделирования заболеваний мышц человека. Скелетные мышцы 6:32. doi: 10.1186/s13395-016-0103-9

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Kim, H.J., Hong, Y.B., Park, J.M., Choi, Y.R., Kim, Y.J., Yoon, B.R., et al. (2013). Мутации в гене PLEKHG5 имеют отношение к аутосомно-рецессивному промежуточному типу болезни Шарко-Мари-Тута. Orphanet J. Rare Dis. 8:104. дои: 10.1186/1750-1172-8-104

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ляо, Ю., Смит, Г.К., и Ши, В. (2014). featureCounts: эффективная программа общего назначения для назначения чтений последовательностей геномным признакам. Биоинформатика 30, 923–930. doi: 10.1093/биоинформатика/btt656

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Перкинс, Э. М., Суминайте, Д., Кларксон, Ю. Л., Ли, С. К., Линдон, А.R., Rothstein, J.D., et al. (2016). Задние мозжечковые клетки Пуркинье в модели мышей SCA5/SPARCA1 особенно уязвимы к синергетическому эффекту потери β-III спектрина и GLAST. Гул. Мол. Жене. 25, 4448–4461. doi: 10.1093/hmg/ddw274

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Робинсон, доктор медицины, Маккарти, Д.Дж., и Смит, Г.К. (2010). edgeR: пакет Bioconductor для анализа дифференциальной экспрессии цифровых данных экспрессии генов. Биоинформатика 26, 139–140. doi: 10.1093/биоинформатика/btp616

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Sabatelli, P., Gara, S.K., Grumati, P., Urciuolo, A., Gualandi, F., Curci, R., et al. (2011). Экспрессия цепей α5 и α6 коллагена VI в нормальной коже человека и в коже пациентов с миопатиями, связанными с коллагеном VI. Дж. Инвест. Дерматол. 131, 99–107. doi: 10.1038/jid.2010.284

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Сато, М., Такидзава Х., Накамура А., Тернер Б.Дж., Шабанпур Ф. и Аоки Ю. (2019). Применение стволовых клеток, полученных из мочи, для клеточного моделирования при нервно-мышечных и нейродегенеративных заболеваниях. Фронт. Мол. Неврологи. 12:297. doi: 10.3389/fnmol.2019.00297

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Schosserer, M., Reynoso, R., Wally, V., Jug, B., Kantner, V., Weilner, S., et al. (2015). Моча является новым источником аутологичных мезенхимальных стволовых клеток для пациентов с буллезным эпидермолизом. BMC Рез. Примечания 8:767. doi: 10.1186/s13104-015-1686-7

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Slaats, G.G., Braun, F., Hoehne, M., Frech, L.E., Blomberg, L., Benzing, T., et al. (2018). Клетки, полученные из мочи: перспективный диагностический инструмент у пациентов с болезнью Фабри. науч. Респ. 8:11042. doi: 10.1038/s41598-018-29240-w

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Speciale, A.A., Эллерингтон, Р., Гедерт, Т., и Ринальди, К. (2020). Моделирование нервно-мышечных заболеваний в эпоху точной медицины. Дж. Перс. Мед. 10:178. doi: 10.3390/jpm10040178

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Спитали, П., Римесси, П., Фабрис, М., Перроне, Д., Фальзарано, С., Боволента, М., и др. (2009). Восстановление рамки считывания дистрофина, опосредованное пропуском экзона, для небольших мутаций. Гул. Мутат. 30, 1527–1534. doi: 10.1002/humu.21092

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Скварцони, С., Sabatelli, P., Bergamin, N., Guicheney, P., Demir, E., Merlini, L., et al. (2006). Ультраструктурные дефекты филаментов коллагена VI у пациента с синдромом Ульриха с потерей доменов альфа3 (VI) N10-N7. Дж. Сотовый. Физиол. 206, 160–166. doi: 10.1002/jcp.20443

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Tagliavini, F., Sardone, F., Squarzoni, S., Maraldi, N.M., Merlini, L., Faldini, C., et al. (2014). Ультраструктурные изменения мышечных клеток у пациентов с миопатиями, связанными с коллагеном VI. Мышцы Связки Сухожилия J. 3, 281–286.

    Академия Google

    Tian, ​​X., Liang, W.C., Feng, Y., Wang, J., Zhang, V.W., Chou, C.H., et al. (2015). Расширение генотипа/фенотипа нервно-мышечных заболеваний за счет комплексного захвата целей/NGS. Нейрол. Жене. 1:e14. дои: 10.1212/NXG.0000000000000015

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Zhang, Q.J., Lin, X., Li, J.J., Lu, Y.Q., Guo, X.X., Dong, E.L., и другие. (2017). Применение клеток мочи при медикаментозном вмешательстве при спинальной мышечной атрофии. Эксп. тер. Мед. 14, 1993–1998 гг. doi: 10.3892/etm.2017.4791

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Развенчание распространенных мифов о моче: Короткая волна: NPR

    (СИГНАЛ МИКРОВОЛНОВОЙ ПЕЧИ)

    МЭДДИ СОФИЯ, ХОЗЯИН:

    Всем привет! Мэдди София с продюсером SHORT WAVE Томасом Лу.Привет, Томас.

    ТОМАС ЛУ, ПОДПИСЬ: Привет, привет.

    СОФИЯ: Так что у тебя есть для нас сегодня?

    LU: Итак, я просматривал Твиттер.

    СОФИЯ: Ммм хм, как и ты.

    LU: И я наткнулся на этот твит, который действительно застал меня врасплох, Мэдди. В нем говорилось: «Я так рада, что я педиатр, поэтому я могу быть уверена, что это не убьет моего 3-летнего ребенка, когда он выпьет воду из ванны, в которую только что помочился».

    СОФИЯ: (Смех) Томас, у меня много вопросов о вашей ленте в Твиттере, но продолжайте.

    ЛУ: Знаешь что? Я не осуждаю вашу ленту в Твиттере, так что не судите и мою. Фу.

    СОФИЯ: (Смех) Справедливо, справедливо.

    LU: В любом случае, твит был опубликован Скоттом Хэдландом, педиатром из Бостона, и его твит стал немного вирусным. Прочитав то, что он опубликовал, вы знаете, я сначала испытал легкое отвращение, но твит заставил меня задуматься. Что еще я не знаю о моче?

    СОФИЯ: Честно говоря, мы все должны себе задать этот вопрос.

    LU: Нет, серьезно, Мэдди, подумай об этом.Существует так много неправильных представлений о моче, в том числе о том, чем она является на самом деле. Поэтому, естественно, я позвонил урологу, чтобы все прояснить.

    МАРИЯ УЛОКО: Моча на самом деле — это большое дело. Моча является очень важным продуктом жизнедеятельности, который мы недостаточно ценим.

    СОФИЯ: (Смех) Итак, сегодняшняя Микроволна — праздник мочи.

    LU: Мы поговорим о том, что это такое на самом деле, развенчаем некоторые распространенные мифы и поделимся некоторыми восхитительными фактами о моче.

    СОФИЯ: К тому же, поскольку это эпизод «Микроволны», у нас есть для вас несколько писем от слушателей.Я Мэдди София.

    LU: А я Томас Лу.

    СОФИЯ: Это SHORT WAVE, ежедневный научный подкаст NPR.

    (ЗВУК МУЗЫКИ)

    СОФИЯ: Хорошо, Т. Лу. Мы говорим о моче. Вы развенчаете несколько распространенных мифов о мочеиспускании. Но сначала, что такое моча?

    ЛУ: Верно. Начнем с этого. Вот доктор Мария Улоко, уролог и научный сотрудник Сан-Диего по сексуальной медицине.

    ULOKO: Моча, в конечном счете, представляет собой жидкость организма, вырабатываемую почками и содержащую экскретируемые отходы.

    LU: После того, как наши тела поглощают питательные вещества и энергию из еды и напитков, которые мы потребляем, некоторые отходы и токсины остаются в нашей крови, которая затем фильтруется нашими почками, а оттуда образуется и выводится моча.

    СОФИЯ: Верно, мочевыводящие пути. Но, Томас, что на самом деле в моче?

    LU: Отличный вопрос. Это в основном вода, где-то от 90 до 95% воды. Но это также смесь солей, таких как электролиты и соединения азота, в первую очередь соединение, называемое мочевиной.И это подводит меня к моему первому мифу о моче и ее роли в лечении микоза.

    СОФИЯ: Да, хорошо. Так что я действительно знаю это — я знаю об этом. Люди будут мочиться в душе, пытаясь избавиться от микоза стопы. Есть ли доля правды в этом обращении, вопросительный знак?

    ЛУ: Я задал Марии тот же вопрос, и…

    УЛОКО: К сожалению, это неправда. Как хирург, который любит эффективность, я понимаю…

    СОФИЯ: (Смех).

    УЛОКО: …Мысль о том, чтобы пописать в душе, убить двух зайцев одним выстрелом.

    СОФИЯ: Люблю, люблю.

    ULOKO: Но миф о том, что мочеиспускание в душе и мочеиспускание на ноги действительно может вылечить эпидермофитию стопы, не соответствует действительности.

    LU: Что правда, Мэдди, так это то, что лекарство, используемое для лечения микоза стопы, действительно содержит мочевину, то самое соединение, которое естественным образом содержится в моче. Но его просто недостаточно в моче, чтобы иметь какой-либо эффект.

    УЛОКО: Ты будешь просто писать себе на ногу.

    СОФИЯ: Честно говоря, я имею в виду, ради эффективности, я за этим стою. Ладно, ладно, миф развеян. Какой следующий?

    LU: Я уверен, вы слышали об этом. Человека ужалила медуза, и есть идея, что вы можете помочиться в этом месте, чтобы как-то нейтрализовать укус.

    СОФИЯ: Да. Да, я знаком. Я всегда был настроен скептически. Ты знаешь, о чем я говорю? Так что поговори со мной.

    LU: О, полностью, полностью. Вы не одиноки в своем скептицизме.Итак, давайте начнем с того, почему в первую очередь горят жала медуз. У них на щупальцах есть стрекательные клетки, называемые книдоцитами. Поэтому, если вы столкнетесь с медузой, эти клетки прикрепят к вашей коже маленькие шиповидные жала, наполненные ядом.

    УЛОКО: А потом причина того, что укус длится, знаете ли, более 24 часов, заключается в том, что есть клетки, которые продолжают выделять токсины.

    СОФИЯ: Корявая. Это грубо. Это дико.

    LU: Не так ли, Мэдди?

    СОФИЯ: Да, да, да.

    LU: И идея о том, что моча может помочь, вероятно, связана с идеей, что соленая вода может нейтрализовать или деактивировать эти клетки. Но, к сожалению, моча недостаточно соленая, чтобы справиться с этой задачей. Поэтому, когда вы используете мочу, вы, вероятно, в лучшем случае просто перемещаете стрекательные клетки. А в худшем…

    ULOKO: Полив их заставляет их производить больше токсинов и даже усиливать жжение.

    СОФИЯ: Хорошо. Вы слышите это, люди? Не мочись на это жало.

    LU: Не писайте, ребята.

    СОФИЯ: Далее — как вы знаете, Томас, я очень гуляю на свежем воздухе. И я слышал, что-то вроде противоречивых вещей о, например, экстренной, почти смертельной ситуации, можно ли пить собственную мочу?

    LU: Ну, быстрый ответ — да. В этом мифе есть доля правды.

    УЛОКО: Это, конечно, очень спорный вопрос. Для людей, которые застряли в глуши без какого-либо доступа к питательным веществам, воде, еде или безопасности, и, как вы знаете, их последним средством к существованию является питье своей мочи, это то, что можно сделать.

    LU: Как мы уже говорили ранее, моча состоит в основном из воды. Поэтому Мария говорит, что если вам абсолютно необходимо выпить мочу один или даже пару раз, чтобы выжить, сделайте это. Но есть одна загвоздка.

    ULOKO: Вы не можете делать это слишком долго, потому что в конечном счете, если у вас нет другого источника потребления жидкости, вы будете снова и снова пить свою концентрированную мочу.

    СОФИЯ: Другими словами, если вы просто выпьете свою мочу несколько раз, вы будете пить продукт, в котором будет все меньше и меньше воды, но все больше и больше отходов.

    ЛУ: Точно. Вы начнете обезвоживаться. Не говоря уже о том, что накопление отходов, таких как мочевина, может вызвать отказ органов и начать отключать ваше тело.

    СОФИЯ: Хорошо, учтено. Пейте мочу только один или два раза в экстренных случаях. Понятно.

    ЛУ: Хотя…

    СОФИЯ: (Смех) Хорошо.

    LU: Есть момент, когда ты много пьешь собственную мочу. Например, когда плод находится в утробе матери, он пьет свою мочу снова и снова.

    СОФИЯ: Хорошо. Я ощущаю странную касательную КОРОТКОЙ ВОЛНЫ.

    LU: Останься со мной здесь, Мэдди.

    СОФИЯ: Ага, поняла. Продолжать.

    LU: Так как плод развивается в матке с постоянным притоком новой крови и питательных веществ, он выращивает органы и конечности, которые ему нужны для жизни после матки.

    СОФИЯ: Ладно, жду мочи здесь, жду мочи.

    ЛУ: Да, да, да. Я добираюсь туда. Когда мочевыводящие пути плода начинают развиваться, он начинает вырабатывать собственную мочу.А пока плод находится в утробе матери, его моча будет стекать в амниотический мешок, смешиваясь с амниотической жидкостью.

    УЛОКО: Итак, получается, что младенцы затем пьют эту жидкость, и эта жидкость фактически помогает развитию легких.

    СОФИЯ: О, верно. Да, хорошо. То, что я слышу здесь, Томас, это то, что на самом деле есть большая польза от того, что зародыши пьют жидкость, которая технически включает мочу.

    ЛУ: Ты понял. Оки Доки. Теперь, когда мы оба наполнены впечатляющими волшебными фактами о мочеиспускании…

    СОФИЯ: Хорошо.

    LU: (Смех) Давайте перейдем к почте для слушателей.

    СОФИЯ: Ага. То есть, я бы точно не стал так говорить, Томас, но давайте перейдем к почте от слушателей.

    LU: Вот письмо от Шона (ph), учителя естествознания в шестом классе из Стронгсвилля, штат Огайо. Он фанат шоу и делится им со своими учениками в рамках их еженедельных заданий.

    СОФИЯ: Да, да, да. Я люблю, когда мы делаем домашнюю работу, Томас. Тебе известно?

    ЛУ: Я знаю.Заставьте детей работать. Вот что он должен сказать. Им очень понравилось их слушать, и ваш формат, похоже, пробуждает интерес и любопытство у моих студентов почти так же, как и у меня.

    СОФИЯ: Очень нравится.

    LU: И он также включил, Мэдди, несколько писем от своих учеников, одно из них от Рафаэля (тел.).

    СОФИЯ: Привет, Рафаэль.

    LU: …У кого есть к вам вопрос. Он хочет знать, что было бы, если бы не было науки. Итак, Мадлен Келли (ф.) София, что произойдет?

    СОФИЯ: (Смех) Вау.Я имею в виду, это глубокий вопрос. Мне это нравится. Вот что я скажу. Рафаэль, если есть на свете такие любопытные люди, как ты, всегда будет наука. Я обещаю. Не волнуйся.

    ЛУ: Ага. Рафаэль, послушай Мэдди. Всегда будет наука. Она знает. И Мэдди, вот еще одна ученица Шона, Джосслин (тел.).

    СОФИЯ: Привет, Джосслин.

    LU: Она написала, что ей понравилось ваше интервью с первым ребенком года по версии Time, ученым и изобретателем Гитанджали Рао.

    СОФИЯ: Да.

    LU: После того, как я прослушал ваши подкасты, я стал более уверенно относиться к науке, чем обычно. Я чувствую, что Гитанджали Рао может вдохновить многих детей, таких как я.

    СОФИЯ: Ага.

    LU: Разве это не мило, Мэдди?

    СОФИЯ: Да, да. Мне это нравится. Джосслин, да, наука для тебя. У вас есть это. И, честно говоря, Гитанджали меня тоже вдохновил — очень вдохновил. Так что спасибо вам, Рафаэль и Джосслин. И спасибо вашему учителю, Шону, за то, что прислал эти прекрасные заметки от учеников.Мы любим, любим, любим получать такие заметки.

    И Томас, спасибо тебе за этот праздник мочи. Честно говоря, иногда я не могу поверить, что это наша работа. Ты знаешь, о чем я говорю?

    LU: Нам действительно очень повезло, Мэдди. Во всяком случае, ТТИЛ.

    СОФИЯ: Пока, Томас. Этот эпизод был спродюсирован Ребеккой Рамирес, отредактирован Вьет Ле, а проверка фактов проверена Рашей Ариди. Звукоинженером этого эпизода был Алекс Древенскус. Я Мэдди София. Спасибо за прослушивание SHORT WAVE от NPR.

    (ЗВУК МУЗЫКИ)

    Copyright © 2021 NPR. Все права защищены. Посетите страницы условий использования и разрешений нашего веб-сайта по адресу www.