7Май

Количество базофилов в крови: Ваш браузер устарел

Содержание

%d0%b0%d0%b1%d1%81%d0%be%d0%bb%d1%8e%d1%82%d0%bd%d0%be%d0%b5%20%d0%ba%d0%be%d0%bb%d0%b8%d1%87%d0%b5%d1%81%d1%82%d0%b2%d0%be%20%d0%b1%d0%b0%d0%b7%d0%be%d1%84%d0%b8%d0%bb%d0%be%d0%b2 — со всех языков на все языки

Все языкиРусскийАнглийскийИспанский────────Айнский языкАканАлбанскийАлтайскийАрабскийАрагонскийАрмянскийАрумынскийАстурийскийАфрикаансБагобоБаскскийБашкирскийБелорусскийБолгарскийБурятскийВаллийскийВарайскийВенгерскийВепсскийВерхнелужицкийВьетнамскийГаитянскийГреческийГрузинскийГуараниГэльскийДатскийДолганскийДревнерусский языкИвритИдишИнгушскийИндонезийскийИнупиакИрландскийИсландскийИтальянскийЙорубаКазахскийКарачаевскийКаталанскийКвеньяКечуаКиргизскийКитайскийКлингонскийКомиКомиКорейскийКриКрымскотатарскийКумыкскийКурдскийКхмерскийЛатинскийЛатышскийЛингалаЛитовскийЛюксембургскийМайяМакедонскийМалайскийМаньчжурскийМаориМарийскийМикенскийМокшанскийМонгольскийНауатльНемецкийНидерландскийНогайскийНорвежскийОрокскийОсетинскийОсманскийПалиПапьяментоПенджабскийПерсидскийПольскийПортугальскийРумынский, МолдавскийСанскритСеверносаамскийСербскийСефардскийСилезскийСловацкийСловенскийСуахилиТагальскийТаджикскийТайскийТатарскийТвиТибетскийТофаларскийТувинскийТурецкийТуркменскийУдмуртскийУзбекскийУйгурскийУкраинскийУрдуУрумскийФарерскийФинскийФранцузскийХиндиХорватскийЦерковнославянский (Старославянский)ЧеркесскийЧерокиЧеченскийЧешскийЧувашскийШайенскогоШведскийШорскийШумерскийЭвенкийскийЭльзасскийЭрзянскийЭсперантоЭстонскийЮпийскийЯкутскийЯпонский

 

Все языкиРусскийАнглийскийИспанский────────АймараАйнский языкАлбанскийАлтайскийАрабскийАрмянскийАфрикаансБаскскийБашкирскийБелорусскийБолгарскийВенгерскийВепсскийВодскийВьетнамскийГаитянскийГалисийскийГреческийГрузинскийДатскийДревнерусский языкИвритИдишИжорскийИнгушскийИндонезийскийИрландскийИсландскийИтальянскийЙорубаКазахскийКарачаевскийКаталанскийКвеньяКечуаКитайскийКлингонскийКорейскийКрымскотатарскийКумыкскийКурдскийКхмерскийЛатинскийЛатышскийЛингалаЛитовскийЛожбанМайяМакедонскийМалайскийМальтийскийМаориМарийскийМокшанскийМонгольскийНемецкийНидерландскийНорвежскийОсетинскийПалиПапьяментоПенджабскийПерсидскийПольскийПортугальскийПуштуРумынский, МолдавскийСербскийСловацкийСловенскийСуахилиТагальскийТаджикскийТайскийТамильскийТатарскийТурецкийТуркменскийУдмуртскийУзбекскийУйгурскийУкраинскийУрдуУрумскийФарерскийФинскийФранцузскийХиндиХорватскийЦерковнославянский (Старославянский)ЧаморроЧерокиЧеченскийЧешскийЧувашскийШведскийШорскийЭвенкийскийЭльзасскийЭрзянскийЭсперантоЭстонскийЯкутскийЯпонский

ТЕСТ АКТИВАЦИИ БАЗОФИЛОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ МИКОГЕННОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ У БОЛЬНЫХ МУКОВИСЦИДОЗОМ | Козлова

1. Козлова Я.И., Учеваткина А.Е., Бычкова Н.С., Филиппова Л.В., Аак О.В., Пятакова А.В., Фролова Е.В., Давыдова Н.И., Климко Н.Н. Тест активации базофилов в диагностике аллергического бронхолегочного аспергиллеза // Проблемы медицинской микологии, 2016. Т. 18, № 3. С. 7-11.

2. Красовский С.А., Самойленко В.А., Амелина Е.Л. Муковисцидоз: диагностика, клиника, основные принципы терапии // Пульмонология и аллергология, 2013. № 1. С. 42-46.

3. Agarwal R., Chakrabarti A., Shah A., Gupta D., Meis J.F., Guleria R., Moss R., Denning D.W. For the ABPA complicating asthma ISHAM working group 2013. Allergic bronchopulmonary aspergillosis: Review of literature and proposal of new diagnostic and classification criteria. Clin. Exp. Allergy, 2013, Vol. 43, no. 8, pp. 850-873.

4. Baxter C.G., Dunn G., Jones A.M., Webb K., Gore R., Richardson M.D., Denning D.W. Novel immunologic classification of aspergillosis in adult cystic fibrosis. J. Allergy Clin. Immunol., 2013, Vol. 132, no. 3, pp. 560-566.

5. Baxter C.G., Moore C.B., Jones A.M., Webb A.K., Denning D.W. IgE-mediated immune responses and airway detection of Aspergillus and Candida in adult cystic fibrosis. Chest, 2013, Vol. 143, no. 5, pp. 1351-1357.

6. Boumiza R., Debard A.L., Monneret G. The basophil activation test by flow cytometry: Recent development in clinical studies, standardization and emerging perspectives. Clin. Mol. Allergy, 2005, no. 3, pp. 9-13.

7. Chirumbolo S., Vella A., Ortolani R., de Gironcoli M., Solero P., Tridente G., Bellavite P. Differential response of human basophil activation markers: a multiparameter flow cytometry approach. Clin. Mol. Allergy, 2008, no. 6, pp. 12-16.

8. Chotirmall S.H., McElvaney N.G. Fungi in the cystic fibrosis lung: Bystanders or pathogens? Int. J. Biochem. Cell Biol., 2014, no. 52, pp. 161-173.

9. Chirumbolo S.H. Basophil activation test in allergy: time for an update? Int. Arch. Allergy Immunol., 2012, no. 158, pp. 99-114.

10. Chotirmall S.H., Branagan P., Gunaratnam C., McElvaney N.G. Aspergillus/allergic bronchopulmonary aspergillosis in an Irish cystic fibrosis population: A diagnostically challenging entity. Respir. Care, 2012, Vol. 53, no. 8, pp. 1035-1041.

11. Delhaes L., Monchy S., Fréalle E., Hubans C., Salleron J., Leroy S., Prevotat A., Wallet F., Wallaert B., Dei-Cas E., Sime-Ngando T., Chabé M., Viscogliosi E. The airway microbiota in cystic fibrosis: a complex fungal and bacterial community – implications for therapeutic management. PLoS ONE, 2012, Vol. 7, no. 4, e36313. doi: 10.1371/journal.pone.0036313.

12. Denning D.W., Pashley C., Hartl D., Wardlaw A., Godet C., del Giacco S., Delhaes L., Sergejeva S. Fungal allergy in asthma-state of the art and research needs. Clin. Transl. Allergy. 2014, Vol. 4, p. 14.

13. Farrell Ph.M., White T.B., Ren Cl.L., Hempstead S.E., Accurso F., Derichs N., Howenstine M., McColley S.A., Rock M., Rosenfeld M., Sermet-Gaudelus I., Southern K.W., Marshall B.C., Sosnay P.R. Diagnosis of Cystic Fibrosis: Consensus Guidelines from the Cystic Fibrosis Foundation. J. Pediatr., 2017, Vol. 181, pp. 4-15.

14. Fillaux J., Bremont F., Murris M., Cassaing S., Rittie J-L., Tetu L., Segonds C., Abbal M., Bieth E., Berry A., Pipy B., Magnaval J-F. Assessment of Aspergillus sensitization or persistent carriage as a factor in lung function impairment in cystic fibrosis patients. Scand. J. Infect. Dis., 2012, Vol. 44, no. 11, pp. 842-847.

15. Janahi I.A., Rehman A., Al-Naimi A.R. Allergic bronchopulmonary aspergillosis in patients with cystic fibrosis. Ann. Thorac. Med., 2017, Vol. 12, no. 2, pp. 74-82.

16. Karasuyama H., Tsujimura Y., Оbata K., Mukai K. Role for basophils in systemic anaphylaxis. Anaphylaxis. Chem. Immunol. Allergy, 2010, Vol. 95, pp. 85-97.

17. Kang M.G., Song W.J., Park H.K., Lim K.H., Kim S.J., Lee S.Y., Kim S.H., Cho S.H., Min K.U., Chang Y.S. Basophil activation test with food additives in chronic urticaria patients. Clin. Nutr. Res., 2014, Vol. 3, no. 1, pp. 9-16.

18. Knutsen A.P., Kariuki B., Consolino J.D., Warrier M.R. IL-4 alpha chain receptor (IL-4R alpha) polymorphisms in allergic bronchopulmonary aspergillosis. Clin. Mol. Allergy, 2006, no. 4, p. 3.

19. Maturu V.N., Agarwal R. Prevalence of Aspergillus sensitization and allergic bronchopulmonary aspergillosis in cystic fibrosis: Systematic review and meta-analysis. Clin. Exp. Allergy, 2015, Vol. 45, no. 12, pp. 1765-1778.

20. Mircovic B., Lavelle G.M., Abdul Azim A., Helma K., Gargoum F.S., Molloy K., Gernez Y., Dunne K., Renwick J., Murphy P., Moss R.B., Greene C.M., Gunaratnam C., Chotirmall S.H., McElvaney N.G. The Basophil surface marker CD203с identifies Aspergillus species sensitization in patients with cystic fibrosis. J. Allergy Clin. Immunol., 2016, Vol. 137, no. 2, pp. 436-443.

21. McMahon M.A., Chotirmall S.H., McCullagh B., Branagan P., McElvaney N.G., Logan P.M. Radiological abnormalities associated with Aspergillus colonization in a cystic fibrosis population. Eur. J. Radiol., 2012, Vol. 81, no. 3, pp. e197-202.

22. Oppenheimer J., Nelson H.S. Skin testing. Ann. Allergy Asthma Immunol., 2006, Vol. 96, no. 2, pp. 6-12.

23. Peetermans M., Goeminne P., de Boeck C., Dupont L.J. IgE sensitization to Aspergillus fumigatus is not a bystander phenomenon in cystic fibrosis lung disease. Chest, 2014, Vol. 146, pp. 99-100.

24. Sabino R., Ferreira J.A.G., Moss R.B., Valente J., Veríssimo C., Carolino E., Clemons K.V., Everson C., Banaei N., Penner J., Stevens D.A. Molecular epidemiology of Aspergillus collected from cystic fibrosis patients. J. Cyst. Fibros., 2015, Vol. 14, pp. 474-481.

25. Stevens D. A., Moss R.B., Kurup V.P., Knutsen A.P., Greenberger P., Judson M.A., Denning D.W., Crameri R., Brody A.S., Light M., Skov M., Maish W., Mastella G. Participants in the Cystic Fibrosis Foundation Consensus Conference. Allergic bronchopulmonary aspergillosis in cystic fibrosis – state of the art: Cystic Fibrosis Foundation Consensus Conference. Clin. Infect. Dis., 2003, Vol. 37, Suppl. 3, pp. 225-264.

26. Williams C., Ranjendran, R., Ramage G. Pathogenesis of fungal infections in cystic fibrosis. Curr. Fungal Infect. Rep., 2016, Vol. 10, pp. 163-169.

Повышены базофилы в крови у ребенка, отсутствие базофилов: причины

Белые клетки в крови ребенка представлены несколькими видами. Одним из них являются базофилы, название которых обусловлено окрашиванием лейкоцитов специальными красителями. Такие форменные элементы хоть и содержатся в периферической крови в небольшом проценте, но очень важны для поддержания здоровья ребенка. В чем же заключается их функция, какой уровень базофилов у здоровых детей и почему он может меняться?

Зачем нужны базофилы

Такой вид лейкоцитов относится к гранулоцитам вместе с нейтрофилами и эозинофилами, так как внутри этих клеток присутствуют гранулы.

В базофилах в этих гранулах находятся соединения, среди которых есть гистамин, простагландины, серотонины и многие другие вещества, участвующие в воспалительных и аллергических реакциях. Такие клетки недолго пребывают в крови (всего несколько часов), после чего оседают в тканях и находятся там примерно 10-14 дней. После перехода из кровеносного русла в ткани базофилы называют «гистиоциты» либо «тучные клетки».

Базофильные лейкоциты активно участвуют в аллергии немедленного типа (анафилактических реакциях). Кроме того, благодаря содержанию гепарина базофилы имеют значение для регуляции свертываемости крови. Попадая к месту воспаления, сталкиваясь с аллергеном, инфекционным агентом или токсином, базофильные лейкоциты выделяют в кровоток содержимое своих гранул, в результате чего повышается проницаемость сосудов, усиливается кровоток и привлекаются другие гранулоциты. У базофилов также имеется способность к поглощению чужеродных частиц.

Норма у детей

Базофилы в анализе крови ребенка определяют в составе лейкоцитарной формулы (ее также называют лейкограммой), поэтому такие клетки в бланке анализа представлены в процентах от всех лейкоцитов. Нормальным содержанием базофилов у ребенка любого возраста, как у новорожденного, так у дошкольника или подростка, считают 0-1%. Если учитывать абсолютное число таких клеток, то нормой будет 0,01-0,065 х 109/л.

Повышенный уровень

Когда у детей повышены базофилы, это называют базофилией либо базофилоцитозом. При таком состоянии абсолютное количество базофильных лейкоцитов будет превышать 0,2 х 109/л.

Причины

Наиболее частой причиной повышенного числа базофилов в крови ребенка является аллергическая реакция, например, на укус насекомого, употребление определенной пищи или прием лекарственного препарата. При этом базофилии не будет в острый период, так как эти лейкоциты в ответ на воздействие аллергена покидают кровоток и переходят в ткани.

Также базофилы повышаются при многих хронических патологиях и при заражении глистами. Длительный воспалительный процесс или аллергия выступают факторами, которые активизируют образование базофилов в костном мозге и повышенное их поступление в кровоток.

Повышенный процент базофилов встречается при таких заболеваниях, как:

  • Гипотиреоз.
  • Хронический синусит.
  • Нефротический синдром.
  • Полицитемия.
  • Язвенный колит.
  • Гепатит.
  • Хронический лейкоз.
  • Ветряная оспа.
  • Лимфогранулематоз.
  • Синдром Иценко-Кушинга.
  • Гемолитическая анемия.
  • Опухолевые процессы.
  • Сахарный диабет.
  • Отравления.

Если ребенок лечился гормональными препаратами, базофилы в его анализе тоже будут повышены. Кроме того, увеличение этих лейкоцитов бывает спровоцировано удалением селезенки, воздействием невысоких доз ионизирующей радиации или дефицитом железа.

Что делать

Если у ребенка содержание базофильных лейкоцитов превышает 1% от всех белых телец крови, то малыша следует показать врачу. Педиатр оценит общее состояние ребенка, жалобы и другие параметры анализа крови, после чего будет искать причину повышенных базофилов (в первую очередь – аллергию или воспалительный процесс).

Как только такая причина будет обнаружена, ребенку назначат лечение, в процессе которого уровень базофилов нормализуется. К примеру, если базофилия спровоцирована лекарственными средствами, после их отмены уровень базофильных лейкоцитов опустится менее 1%. Также врач порекомендует добавить в рацион продукты, из которых ребенок будет получать достаточно витамина В12 (яйца, субпродукты, мясо и другие).

Отсутствие базофилов

Снижение процента базофильных лейкоцитов в лейкограмме у многих детей считается вариантом нормы. Если результат анализа крови ребенка показывает полное отсутствие базофилов, это не считается врачами каким-либо диагностически важным критерием. Подобная картина наблюдается при стрессе, в период выздоровления после инфекционных болезней, после химиотерапии или при эндокринных патологиях, однако изменения при таких заболеваниях не будут ограничиваться лишь базофилопенией.

Рекомендуем к просмотру запись программы доктора Комаровского, посвященную клиническому анализу крови ребенка:

LOINC 71675-3 — Базофилы/лейкоциты [фракция чистого числа] в крови при ручном подсчете

Описание деталей

LP14328-6   Базофилы
Базофилы представляют собой зернистые лейкоциты, характеризующиеся бледно окрашенным ядром с 2–3 долями и цитоплазмой, содержащей грубые темноокрашенные гранулы различного размера. Они составляют 0,5-1% циркулирующих лейкоцитов и окрашиваются основными красителями. При активации они выделяют гистамин, лейкотриены и ряд цитокинов. Источник: Национальная медицинская библиотека, МеСХ, 2006 г.

LP157588-7   Лейкоциты
Лейкоциты или лейкоциты (лейкоциты) представляют собой иммунные клетки, которые борются с инфекцией, новообразованиями и другими воспалительными состояниями, а также опосредуют аллергические реакции. В кровотоке обычно присутствуют пять типов лейкоцитов, которые происходят из сходных стволовых клеток костного мозга. Пять типов лейкоцитов делятся на две группы в зависимости от наличия или отсутствия гранул в цитоплазме.Гранулоциты включают нейтрофилы, базофилы и эозинофилы. К негранулоцитам относятся лимфоциты и моноциты. Нейтрофилы борются с инфекцией, поглощая и переваривая бактерии. Эозинофилы и базофилы реагируют на аллергические реакции и способны поглощать комплексы антиген-антитело. Моноциты фагоцитируют бактерии и выделяют интерферон для стимуляции иммунной системы. Лимфоциты делятся на Т-клетки и В-клетки. Т-клеточный иммунитет является клеточным и включает активацию фагоцитов, а В-клеточный иммунитет использует антитела для борьбы с инфекцией.Как повышенное, так и низкое количество лейкоцитов может быть маркером инфекции и злокачественного новообразования, а низкое количество лейкоцитов связано с различными первичными и вторичными иммунодефицитами, в зависимости от типа (типов) лейкоцитов, выходящих за пределы допустимого диапазона. (Руководство Мосби по диагностическим и лабораторным тестам, Кэтлин Деска Пагана; Тимоти Джеймс Пагана, Elsevier St. Louis, Mo © 2010) Источник: Регенштриф LOINC

Национальное обследование состояния здоровья и питания

Компонент Описание

Программа NHANES приостановила полевые операции в марте 2020 в связи с пандемией коронавирусной болезни 2019 (COVID-19).В результате данные сбор для цикла NHANES 2019-2020 не был завершен и собран данные не национальные представитель. Таким образом, данные, собранные с 2019 г. по март 2020 г., были в сочетании с данными из цикла NHANES 2017-2018, чтобы сформировать национальный репрезентативная выборка предпандемических данных NHANES за 2017 г. – март 2020 г. Эти данные доступны для общественности. Пожалуйста, обратитесь к разделу Аналитические заметки для подробнее об использовании данных.

Общий анализ крови (ОАК) с дифференциацией на 5 частей: подсчитывает эритроциты (эритроциты), лейкоциты (лейкоциты) и тромбоциты; измеряет гемоглобин; оценивает объем РБК; и сортирует лейкоциты в подтипы.Общий анализ крови — это обычный анализ крови, используемый для оценки общего состояния здоровья. и обнаружить широкий спектр расстройств, включая анемию, инфекцию и лейкемию.

Эти данные будут использоваться для оценки недостатков и токсичности конкретных питательных веществ в популяции и подгруппах, чтобы обеспечить справочные данные о населении, а также для оценки вклада рациона питания, добавки и другие факторы, влияющие на уровень питательных веществ в цельной крови. Данные будут используется для исследований для дальнейшего определения потребностей в питательных веществах, а также оптимального уровня профилактики заболеваний и укрепления здоровья.

Приемлемая выборка

Все обследованные участники в возрасте 1 года и старше в NHANES Допандемическая выборка за 2017–март 2020 года соответствовала критериям.

Описание лабораторной методики

The Beckman Инструмент Coulter DxH 800 в мобильном экзаменационном центре NHANES (MEC), использовался для измерения CBC в образцах крови и предоставления распределение клеток крови для всех участников.

Используемые методы для получения параметров CBC основаны на методологии Beckman Coulter подсчет и калибровка в сочетании с автоматическим разбавлением и смешиванием устройство для обработки образцов и однолучевой фотометр для гемоглобинометрия.Дифференциал WBC использует VCS (объем, проводимость и разброс) технологии.

Обратитесь в лабораторию Раздел «Файлы методов» для подробного описания лабораторных методов. использовал.

Файлы лабораторных методов

Полный анализ крови (сентябрь 2019 г.)

Полный анализ крови (июнь 2021 г.)

Лабораторное обеспечение качества и мониторинг

Образцы цельной крови были проанализированы в рамках мобильного экзамена NHANES Центр (МЭК).

Подробные инструкции по сбору образцов и обработка обсуждается в Руководствах по лабораторным процедурам NHANES 2017-2018 и 2019-2020 (LPM).

Протоколы обеспечения качества и контроля качества (QA/QC) NHANES соответствовать требованиям Закона об усовершенствовании клинических лабораторий 1988 года. Подробный ОК/КК инструкции обсуждаются в LPM NHANES.

Мобильные экзаменационные центры (МЭК)

Работа команды лаборатории контролируется с помощью нескольких методы.NCHS и контрактные консультанты используют структурированную компетенцию оценка оценка во время посещений для оценки как качества лабораторные работы и процедуры контроля качества. Каждый сотрудник лаборатории находится под наблюдением для работы оборудования, сбора и подготовки образцов; тестирование Процедуры и конструктивная обратная связь предоставляются каждому сотруднику. Формальный курсы переподготовки проводятся ежегодно для обеспечения необходимого уровня квалификации были сохранены.

МЭК Аналитический Лаборатория

NHANES использует несколько методов для контроля качества анализы, выполненные аналитической лабораторией МЭК.Эти методы включают выполнение слепых разделенных проб, собранных во время пробных сессий в MEC. НЦСЗ разработал протокол контроля качества для лаборатории MEC, в котором описано использование Westgard правила (Вестгард, и другие. 1981), когда испытания образцов NHANES. Отчеты о проделанной работе, содержащие любые возникшие проблемы при анализе образцов сводная статистика по каждому контрольному пулу, Графики контроля качества, калибровка прибора, реагенты и любые особые соображения представляются в NCHS на постоянной основе.Отчеты анализируются на наличие тенденций или сдвиги в данных.

В МЭК, результаты CBC измеряются дважды и усредняются. Усредненные результаты сообщаются участникам и публикуются в этом наборе данных.

Обработка и редактирование данных

Данные просмотрены. Неполные данные или маловероятные значения были рассмотрены для подтверждения.

В этом файле данных было создано пять дополнительных переменных для преобразовать проанализированные значения в абсолютные значения (1000 клеток/мкл).Эти переменные были созданы по следующим формулам:

Преобразование LBXLYPCT в LBDLYMNO:

Количество лимфоцитов в процентах (LBXLYPCT) делили на 100 и округляется до 1 десятичного знака, затем умножается на количество лейкоцитов в 1000 клеток/мкл (LBXWBCSI) для преобразования в 1000 клеток/мкл (LBDLYMNO)

Преобразование LBXMOPCT в LBDMONO:

Моноциты в процентах (LBXMOPCT) делили на 100 и округляется до 1 десятичного знака, затем умножается на количество лейкоцитов в 1000 клеток/мкл (LBXWBCSI) для преобразования в 1000 клеток/мкл (LBDMONO)

Преобразование LBXNEPCT в LBDNENO:

сегментоядерных нейтрофилов в процентах (LBXNEPCT) делили на 100 и округляется до 1 десятичного знака, затем умножается на количество лейкоцитов в 1000 клеток/мкл. (LBXWBCSI) для преобразования в 1000 клеток/мкл (LBDNENO)

Преобразование LBXEOPCT в LBDEONO:

эозинофилов в процентах (LBXEOPCT) делили на 100 и округляется до 1 десятичного знака, затем умножается на количество лейкоцитов в 1000 клеток/мкл (LBXWBCSI) для преобразования в 1000 клеток/мкл (LBDEONO)

Преобразование LBXBAPCT в LBDBANO:

Базофилы в процентах (LBXBAPCT) делили на 100 и округляется до 1 десятичного знака, затем умножается на количество лейкоцитов в 1000 клеток/мкл (LBXWBCSI) для перевода в 1000 клеток/мкл (LBDBANO)

Аналитические заметки

COVID-19 пандемия потребовала приостановки полевых операций NHANES 2019-2020 в марте 2020 г. после сбора данных в 18 из 30 мест опроса в 2019-2020 гг. образец.Сбор данных был отменен для остальных 12 местоположений. Так как собранные данные из 18 мест не были репрезентативными на национальном уровне, эти данные были объединены с данными предыдущего цикла (2017-2018 гг.) для создания Файл данных до пандемии за 2017–март 2020 года. Был применен специальный процесс взвешивания. к файлу данных до пандемии за 2017-март 2020 года. Полученные веса образцов в настоящий файл следует использовать для расчета оценок из комбинированного циклы. Эти веса выборки не подходят для независимого анализа данные за 2019–2020 годы и не дадут национально репрезентативных результатов для либо только данные за 2017-2018 годы, либо только данные за 2019-март 2020 года.Пожалуйста, обратитесь на веб-сайт NHANES для получения дополнительной информации о NHANES 2017-март 2020 данные до пандемии и для предыдущего файла данных общего пользования за 2017-2018 гг. с удельный вес для этого 2-летнего цикла.

См. документы «Обзор лабораторных данных за 2017–2018 и 2019–2020 годы»  для получения общей информации о лабораторных данных NHANES.

Есть более 800 лабораторные анализы, проведенные на участниках NHANES. Тем не менее, не все участники предоставили биообразцы или достаточный объем для проведения всех тестов. выполнено.Доступность образцов также может варьироваться в зависимости от возраста или другой популяции. характеристики. Например, в 2017-март 2020 г., примерно 76% детей в возрасте от 1 до 17 лет. лет, которые проходили обследование в МЭК, предоставили образец крови через флеботомию, а 95% обследованных взрослых в возрасте 18 лет и старше сдавали кровь образец. Аналитики должны оценить объем недостающих данных в набор данных, связанный с интересующим результатом, а также с любым предиктором переменные, используемые в анализе, чтобы определить, требуется ли дополнительное повторное взвешивание для пункт неответ необходим.

Пожалуйста, обратитесь к Аналитическому руководству NHANES и интерактивному учебному пособию NHANES для дополнительные сведения об использовании весов выборки и других аналитических вопросах.

Демографические и другие связанные переменные

Анализ лабораторных данных NHANES должен быть проводится с использованием соответствующего дизайна обследования и демографических переменных. Допандемический демографический файл NHANES за 2017–март 2020 года содержит демографические данные, показатели здоровья и другие связанные информация, собранная в ходе опросов домохозяйств, а также план выборки переменные.Рекомендуемая процедура оценки дисперсии требует использования страта и переменные ПЕВ (СДМВСТРА и СДМВПСУ соответственно) в демографический файл.

Файл анкеты голодания NHANES за 2017 г. – март 2020 г. включает вспомогательную информацию, такую ​​как как состояние голодания, продолжительность голодания и время венепункции.

Этот файл лабораторных данных может быть связан с другим файлом NHANES. файлы данных с использованием уникального идентификатора участника опроса (т. е. SEQN).

Пределы обнаружения

Пределы обнаружения были постоянными для всех аналитов в наборе данных.Для каждого из этих аналитов предусмотрены две переменные. Переменная, оканчивающаяся на «LC» (например, LBDHGBLC) указывает, был ли результат ниже предела обнаружения: значение «0» означает, что результат был на уровне или выше предела обнаружения, «1» означает, что результат был ниже предела обнаружения. Другая переменная с префиксом LBX (LBXHGB) предоставляет аналитический результат. для этого аналита. Для аналитов с результаты анализа ниже нижнего предела обнаружения (например, LBDHGBLC = 1), вмененное значение помещалось в поле результатов аналита.Это значение является нижним пределом обнаружения разделить на квадратный корень из 2 (LLOD/sqrt[2]).

Нижний и верхний пределы обнаружения с единицами для ОАК:

Переменная Имя

Аналит Описание

ЛЛОД

УЛОД

Единицы

LBXWBCSI

Количество лейкоцитов

0.020

363.000

х 10 3 клеток/мкл

LBXLYPCT

Процент лимфоцитов

0.00

100,00

%

LBXMOPCT

Процент моноцитов

0,00

100.00

%

LBXNEPCT

Сегментоядерные нейтрофилы %

0,00

100,00

%

LBXEOPCT

Эозинофилы %

0.00

100,00

%

LBXBAPCT

Базофилы процент

0,00

100.00

%

LBXRBCSI

Количество эритроцитов

0,00

8.20

х 10 6 клеток/мкл

LBXHGB

Гемоглобин

0.00

24.30

г/дл

LBXMCVSI

Средний объем клетки

50,00

150.00

фл

LBXRDW

Ширина распределения эритроцитов

10.00

40.00

%

LBXPLTSI

Число тромбоцитов

3.0

4596.0

х 10 3 клеток/мкл

LBXMPSI

Средний объем тромбоцитов

5.00

25.00

фл

Количество базофилов

Определение (МСЧЗЕ) Базофильные гранулоциты. Другие белые клетки (лейкоциты), их функция не зцела ясна, снад овливню срэжени крве в мистэ занету.Při vyšetření diferenciálu je b. nejméně etným druhem, krvinka se „ráda“ barví zásaditým barvivem. (цит. Velký lékařský slovník online, 2013 http://lekarske.slovniky.cz/)
Определение (NCI_NCI-ГЛОСС) Тип иммунных клеток, который имеет гранулы (маленькие частицы) с ферментами, которые высвобождаются во время аллергических реакций и астмы.Базофил представляет собой тип лейкоцитов и тип гранулоцитов.
Определение (МСХ) Зернистые лейкоциты характеризуются относительно бледным окрашиванием, лопастным ядром и цитоплазмой, содержащей грубые темноокрашенные гранулы разного размера, окрашиваемые основными красителями.
Определение (CSP) зернистые лейкоциты, характеризующиеся относительно бледным окрашиванием, лопастным ядром и цитоплазмой, содержащей грубые темноокрашенные гранулы переменного размера, окрашиваемые основными красителями; содержат вазоактивные амины, такие как гистамин и серотонин, которые высвобождаются при соответствующей стимуляции.
Концепции Клетка ( Т025 )
МШ D001491
SnomedCT 30061004
HL7 БПХ
ЛНЦ ЛП14328-6, ЛП21273-5, МТХУ012774
Английский Базофилы, Базофильные, сегментоядерные, базофильные гранулоциты, базофильные лейкоциты, Базофильные лейкоциты, базофилы, базофилы, Базофилы, Базофильные, сегментоядерные (клетки)
Испанский basófilo, segmentado, basófilo, segmentado (célula), basófilo, granulocito basófilo, Basófilos
Французский Polynucléaires basophiles, Granulocyte basophile, PNB (Polynucléaire Basophile), Basophiles, Polynucléaire basophile, Granulocytes basophile
Шведский Базофилер
Чехия базофилы, гранулоциты базофильные
Финский Базофилит
Русский ЛЕЙКОЦИТЫ БАЗОФИЛЬНЫЕ, ГРАНУЛОЦИТЫ БАЗОФИЛЬНЫЕ, БАЗОФИЛЫ, БАЗОФИЛЫ, ГРАНУЛОЦИТЫ БАЗОФИЛЬНЫЕ, ЛЕЙКОЦИТЫ БАЗОФИЛЬНЫЕ
Хорватский БАЗОФИЛИ
Латвийский Базофилы
польский Базофил, Гранулоциты засадохлонные
Норвежский Базофильный лейкоцит, Leukocytter, basofile, Basofile Celler
немецкий Базофильный лейкозитен, базофил
итальянский Басофилы
Голландский Basofiel, Basofiel лейкоцит, Basofielen
Португальский Басофилос

Периферическая кровь | Электронная микроскопия

Глава 7 — Периферическая кровь

Кровь представляет собой специализированную соединительную ткань, состоящую из клеток ( эритроцитов , лейкоцитов и тромбоцитов ), циркулирующих в жидкости, называемой плазмой .Он обеспечивает механизм, с помощью которого газы, питательные вещества, отходы и клетки могут транспортироваться по всему телу.

Красные кровяные тельца

Эритроциты (эритроциты) являются наиболее распространенным типом клеток крови (98% всех клеток). Они функционируют полностью в системе кровообращения.

Тромбоциты

Тромбоциты (тромбоциты) представляют собой фрагменты мелких клеток, которые закупоривают стенки кровеносных сосудов и участвуют в образовании тромбов.

БЕЛЫЕ КРОВИ

Лейкоциты (лейкоциты) выполняют свои функции в тканях и используют кровеносную систему для достижения места назначения.

ГРАНУЛОЦИТЫ

Гранулоциты имеют многодольчатое ядро ​​и содержат специфические гранулы в цитоплазме.Их делят на три группы (нейтрофилы, эозинофилы и базофилы) в зависимости от окрашивающих свойств их специфических гранул.

Нейтрофил

Нейтрофилы (или полиморфноядерные лейкоциты) являются наиболее распространенными лейкоцитами (от 60 до 70%). Фагоцитарные клетки, которые поглощают и убивают микробы (бактерии, грибы и простейшие).

(структура и активация)

ТЭМ

Эозинофил

Эозинофилы составляют небольшую долю лейкоцитов (от 2 до 4%).Они участвуют во многих воспалительных процессах, включая паразитарные инфекции, аллергические заболевания и астму.

(структура и активация)

ТЭМ

Базофил

Базофилы являются наименее распространенными лейкоцитами (<1%).Это секреторные клетки, усиливающие воспаление.

(структура и активация)

ТЭМ

АГРАНУЛОЦИТЫ

Агранулоциты представляют собой лейкоциты (лимфоциты и моноциты) без специфических гранул в цитоплазме.

Лимфоцит

Лимфоциты являются крупным компонентом лейкоцитов (от 20 до 25%).Они рециркулируют через ткани и возвращаются в кровоток через кровеносные и лимфатические сосуды.

Моноцит

Моноциты небольшая доля лейкоцитов (от 3 до 8%). Они мигрируют в ткани и дифференцируются в различные макрофаги мононуклеарной фагоцитарной системы.

Плазменная ячейка

Плазматические клетки обычно дифференцируются из В-лимфоцитов в тканях и продуцируют большое количество антител. Это редкий пример обнаруженного в крови.

 

Базофилы Clinisciences


Базофилы являются наименее распространенными из гранулоцитов , что составляет около 0.От 01% до 0,3% циркулирующих лейкоцитов (лейкоцитов).

Название происходит от тайны, что эти лейкоциты являются базофильными, т. е. они восприимчивы к окрашиванию основными красителями, как показано на рисунке.

Базофилы содержат крупные цитоплазматические гранулы, которые затемняют ядро ​​клетки под микроскопом. Однако при неокрашивании видно ядро, которое обычно состоит из 2 долей. Тучная клетка, клетка в тканях, имеет много сходных характеристик. Например, оба типа клеток хранят гистамин, химическое вещество, которое секретируется клетками при стимуляции определенным образом (гистамин вызывает некоторые симптомы аллергической реакции).Как и все циркулирующие гранулоциты, базофилы могут при необходимости рекрутироваться из крови в ткани.

Функции :

Базофилы проявляются во многих специфических видах воспалительных реакций , особенно тех, которые вызывают аллергические симптомы. Базофилы содержат антикоагулянт гепарин, препятствующий слишком быстрому свертыванию крови. Они также содержат сосудорасширяющий гистамин, который способствует притоку крови к тканям. Их можно найти в необычно большом количестве в очагах экзопаразитарной инфекции, т.е.г., клещи. Они также появляются в тканях, где возникают аллергические реакции, и, вероятно, способствуют тяжести этих реакций. Базофилы имеют белковые рецепторы на своей клеточной поверхности, которые очень прочно связывают IgE-антитела. Именно связанные IgE-антитела обеспечивают избирательный ответ этих клеток на вещества окружающей среды, например белки пыльцы. Недавние исследования на мышах предполагают, что базофилы могут также регулировать поведение Т-клеток и опосредовать величину вторичного иммунного ответа.

Секреция:

При активации базофилы дегранулируют с высвобождением гистамина, протеогликанов (например, гепарина и хондроитина) и протеолитических ферментов (например, эластазы и лизофосфолипазы). Они также секретируют липидные медиаторы, такие как лейкотриены и некоторые цитокины. Гистамин и протеогликаны предварительно хранятся в клеточных гранулах, в то время как другие секретируемые вещества образуются вновь. Каждое из этих веществ способствует воспалению. Недавние данные свидетельствуют о том, что базофилы являются важным источником цитокина интерлейкина-4, возможно, более важным, чем Т-клетки.Интерлейкин-4 считается одним из важнейших цитокинов в развитии аллергии и выработке антител IgE иммунной системой. Существуют и другие вещества, которые могут активировать секрецию базофилов, что предполагает, что эти клетки играют другую роль в воспалении.

Базопению (низкое количество базофилов) трудно продемонстрировать , так как нормальное количество базофилов очень низкое; сообщалось о связи с аутоиммунной крапивницей (хроническим зудом). Базофилия также встречается редко, но может наблюдаться при некоторых формах лейкемии или лимфомы.

Незрелые базофилы, полученные из пуповинной крови человека, демонстрируют двойные характеристики, экспрессируя белки, ассоциированные как с базофилами, так и с эозинофилами

Abstract

Базофилы представляют собой клетки крови с низким содержанием, связанные с аллергией, воспалением и паразитарными инфекциями. Для изучения транскриптома зрелых циркулирующих базофилов клетки очищали от лейкоцитарных пленок центрифугированием в градиенте плотности и двухэтапной магнитной сортировкой клеток. Однако после обширного анализа было обнаружено, что клетки транскрипционно неактивны и почти полностью лишены функциональной мРНК.Чтобы получить транскрипционно активные незрелые базофилы для анализа их транскриптома, клетки пуповинной крови культивировали в присутствии интерлейкина (IL)-3 в течение 9 дней, а базофилы обогащали путем удаления небазофилов с помощью магнитной сортировки клеток. Большинство очищенных клеток демонстрировали типичное метахроматическое окрашивание красителем Alcian blue (95%) и экспрессию поверхностных маркеров FcεRI и CD203c, что указывает на чистую популяцию клеток с базофилоподобным фенотипом.мРНК экстрагировали из этих клеток и использовали для создания библиотеки кДНК примерно из 600 000 независимых клонов. Эта библиотека служила инструментом для определения частот мРНК для ряда гемопоэтических маркерных белков. Было показано, что эти клетки экспрессируют транскрипты, специфичные для базофилов/тучных клеток, т.е. β-триптазу, серглицин и α-цепь FcεRI, в относительно низкой степени. Напротив, библиотека содержала большое количество транскриптов, связанных с эозинофилами, таких как: главный основной белок (MBP), лейденские кристаллы Шарко (CLC), эозинофильный катионный белок (ECP), нейротоксин, полученный из эозинофилов (EDN), и пероксидаза эозинофилов (EPO). ).Из этих транскриптов наиболее часто наблюдались MBP и EPO, составляющие 8% и 3,2% от общего пула мРНК соответственно. Более того, при анализе протеома культивируемых базофилов мы идентифицировали MBP и EPO как две наиболее заметные белковые полосы, что свидетельствует о хорошей корреляции между анализом белка и мРНК этих клеток. Смешанный фенотип, наблюдаемый для этих клеток, подтверждает вывод о том, что эозинофилы и базофилы тесно связаны во время развития кроветворения человека. Двойной фенотип также указывает на то, что для получения полного специфичного к базофилам фенотипа in vivo необходимы другие цитокины, кроме IL-3 или взаимодействий с клеточной поверхностью.

Образец цитирования: Grundström J, Reimer JM, Magnusson SE, Nilsson G, Wernersson S, Hellman L (2012) Незрелые базофилы, полученные из пуповинной крови человека, демонстрируют двойные характеристики, экспрессируя белки, ассоциированные как с базофилами, так и с эозинофилами. ПЛОС ОДИН 7(10): е48308. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0048308

Редактор: Мюриэль Мозер, Свободный университет Брюсселя, Бельгия

Поступила в редакцию: 9 июля 2012 г.; Принято: 24 сентября 2012 г.; Опубликовано: 31 октября 2012 г.

Авторское право: © 2012 Grundström et al.Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания оригинального автора и источника.

Финансирование: Работа выполнена при поддержке Шведского исследовательского совета (VR-M). Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Базофилы исторически часто описывались как тучные клетки крови (ТК), поскольку они положительно окрашиваются в отношении основных красителей и содержат гистамин. Однако, несмотря на большое сходство у людей, они явно представляют собой две отдельные клеточные линии. Базофилы в норме составляют менее 1% циркулирующих лейкоцитов. Напротив, ТК гораздо более распространены, редко обнаруживаются в периферической крови и в основном являются резидентными тканевыми клетками [1].

Базофильные гранулоциты были впервые описаны Паулем Эрлихом в его работе «Beiträge zur Kenntnis der granulierten Bindegewellzellen und der eosinophilien Leukocyten» в конце 19 го века [2].Они получили свое название из-за того, что окрашиваются основными красителями, такими как толуидиновый синий и альциановый синий. Базофилы в первую очередь известны своей центральной ролью в IgE-опосредованных аллергиях. Однако недавно базофилы также привлекли большой интерес как потенциальный ключевой инициатор индукции иммунных ответов Т-хелперов 2-го типа (Th3) на вторгшиеся патогены. Подтверждающие доказательства этой Th3-праймирующей функции базофилов получены в исследованиях, демонстрирующих, что базофилы экспрессируют и высвобождают значительные количества IL-4, IL-13 и стромального лимфопоэтина тимуса (TSLP) [3], [4], [5], [6]. ], [7], [8], [9], [10].В пользу большого значения для цитокинов, продуцируемых базофилами, говорит тот факт, что мышиные MC-протеаза (mMCP)-8-положительные базофилы, выявленные при заражении малярией, продуцируют до 40 раз больше IL-4, чем полностью активированные Th3-клетки [5]. Базофилы также были идентифицированы как наиболее важный источник IL-4 в течение первых часов после заражения антигеном [7]. IL-4 и IL-13 оба являются ключевыми цитокинами в Th3-опосредованном иммунном ответе, и это единственные два известных цитокина, которые вызывают переключение В-клеток на IgE [11].Ряд недавно проведенных исследований также показал важность базофилов при различных воспалительных состояниях. Было показано, что они играют ключевую роль в индукции инфильтрации эозинофилов во время фазы индукции атопического дерматита [12]. Они также необходимы для IgG-опосредованной, но не IgE-опосредованной анафилаксии у мышей [13]. Интересно, что было показано, что базофилы имеют большое значение для ответа памяти на эктопаразитов, таких как клещи [14]. В результате многочисленных исследований сложилось общее мнение о том, что базофилы и тучные клетки играют различную роль при аллергии и астме, как описано в обзоре [15], и что базофилы участвуют в защите как от эндо-, так и от эктопаразитов [16], [17]. ], [18].

Хотя базофилы известны уже более 100 лет, очень мало известно о содержании их гранул, особенно о базофилах человека. Было показано, что базофилы человека хранят небольшое количество триптазы тучных клеток (неопубликованные результаты Блома и Хеллмана) и [19], тогда как тучные клетки человека хранят большое количество протеаз, принадлежащих как к триптазному, так и к химазному семействам [20]. 21]. В отличие от базофилов человека, у мыши были описаны две базофильно-специфические протеазы, mMCP-8 и mMCP-11, а базофилы мыши не экспрессируют ни одну из сериновых протеаз, связанных с MC, mMCP-1, -2, -4, -5. , -6- или -7 [5], [22], [23], [24].Однако пока еще не клонировано специфического для базофилов белка человека, и в геноме человека не может быть идентифицирован гомолог mMCP-8 [25], [26]. Интересно, что ген mMCP-8, включая его регуляторные элементы, недавно был использован для специфической абляции базофилов, демонстрируя специфичность этого белкового маркера к базофилам мышей [14], [16], [27]. Были идентифицированы два специфических белка базофилов человека: базогранулин и белок, реагирующий против моноклонального 2D7 [28], [29]. Однако ни один из них не был охарактеризован более подробно или клонирован, несмотря на огромные усилия.

Основным препятствием в идентификации новых специфических для базофилов белков была трудность получения достаточного количества чистых базофилов в сочетании с почти полным отсутствием функциональной мРНК в базофилах периферической крови. Объяснение крайне низких уровней мРНК, скорее всего, заключается в том, что, как и некоторые другие лейкоциты, то есть нейтрофилы и эозинофилы, базофилы созревают в костном мозге и поступают в кровоток в виде терминально дифференцированных клеток с очень небольшим текущим синтезом белка.Таким образом, клонирование новых клон-специфических генов из других гранулоцитов почти исключительно происходит с использованием иммортализованных опухолевых клеточных линий [30] или культивируемых in vitro клеток [31]. Эти клетки активно делятся и содержат большое количество мРНК. Также были описаны две линии опухолевых клеток базофильного происхождения, KU812 и LAMA84 [32], [33], [34]. Обе эти клеточные линии, тем не менее, демонстрируют характеристики множественных клонов, предполагая, что они не оптимальны для изучения гранулярных белков, специфичных для клонов.Поэтому альтернативой является использование культивируемых предшественников базофилов. Хорошо известно, что IL-3 в культурах пуповинной крови или костного мозга человека способствует экспансии клеточного типа, очень похожего на базофилы, о чем свидетельствует экспрессия на клеточной поверхности, окрашивающие свойства и функциональные характеристики [35, 36, 37].

С целью получения незрелых транскрипционно-активных базофилов для анализа их транскриптома и клонирования специфических белков базофилов человека был инициирован проект по изучению условий, необходимых для получения незрелых базофилов в количествах, достаточных для создания высококачественной библиотеки кДНК.Такие условия культивирования были оптимизированы, и нам удалось получить препараты более 34 млн незрелых базофилов для очистки мРНК и создания библиотеки кДНК [38]. Эти клетки показали ряд известных характеристик незрелых базофилов, включая метахроматическое окрашивание и поверхностную экспрессию высокоаффинного рецептора для IgE (FcεRI) и CD203c [38]. Было показано, что CD203c является обычным поверхностным маркером для базофилов человека, тучных клеток и их предшественников CD34 + [39].Также было обнаружено, что CD203c активируется при активации базофилов (как описано в обзоре [40]).

Библиотека кДНК из препарата этих клеток была получена и использована в качестве исходного материала для анализа транскриптома. При анализе последовательности панели случайно выбранных клонов из этой библиотеки мы обнаружили, что транскрипты, связанные с эозинофилами, присутствовали в относительно большом количестве, что указывает на то, что эти клетки имеют смешанный фенотип, демонстрируя как базофил-, так и эозинофил-связанные характеристики [38].Здесь мы представляем более подробную характеристику этой библиотеки с использованием более обширного анализа последовательности большего числа случайно выбранных клонов и скрининга с использованием конкретных зондов. Эти эксперименты были проведены, чтобы получить более подробную картину фенотипа клеток базофилов, полученных из пуповинной крови, индуцированных IL-3, а также оценить их полезность для изучения биологии базофилов.

Материалы и методы

Очистка базофилов крови

лейкоцитарных слоя были получены из университетской больницы в Уппсале.Клетки наслаивали на Ficoll Hypaque® (GE Healthcare, Уппсала, Швеция) и очищали центрифугированием в градиенте в соответствии с инструкциями производителя. Извлеченные клетки затем очищали с помощью комбинации отрицательной и положительной селекции с помощью магнитно-активируемой сортировки клеток (MACS) (Miltenyi Biotec, Бергиш-Гладбах, Германия). При отрицательном отборе использовали двухэтапную процедуру коктейля. Промытые клетки первично метили добавлением моноклональных антител против CD4, -CD8, -CD3, -CD14, -CD16 и -CD19.Затем клетки промывали в MACS-буфере (PBS, 2 мМ EDTA, 0,5% BSA) и метили микрогранулами против мышиного IgG1 (Miltenyi Biotec). Связывание антител проводили на льду в течение 30 мин при легком встряхивании. Клетки разделяли магнитным полем в соответствии с инструкциями производителя. Затем клетки подвергали стадии положительной селекции. Клетки сначала инкубировали с антителом IgG1 мыши против IgE с последующим окрашиванием микрошариками против IgG мыши (Miltenyi Biotec). Связывание антител проводили на льду в течение 30 мин при легком встряхивании.Затем клетки разделяли магнитным полем в соответствии с инструкциями производителя. Полученные базофилы имели чистоту 98%, как определено окрашиванием альциановым синим.

Культура базофилов пуповинной крови

После получения информированного согласия и после одобрения местным комитетом по этике при университетской больнице Уппсалы была взята пуповинная кровь у нормальных доношенных родов. Мононуклеарные клетки выделяли из гепаринизированной пуповинной крови с помощью градиентного центрифугирования Ficoll Hypaque® (GE Healthcare, Уппсала, Швеция) в соответствии с инструкциями производителя.Клетки промывали в PBS и ресуспендировали в концентрации 1×10 6 клеток/мл в среде RPMI 1640 с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, 50 мкМ 2-меркаптоэтанола, 10 мМ Hepes, 2 мМ L-глутамина, 0,1 мМ заменимых аминокислот, 100 МЕ/мл пенициллина и 50 мкг/мл стрептомицина (Life Technologies, Ренфрушир, Шотландия). Кроме того, в среду добавляли 10 нг/мл рекомбинантного IL-3 (R&D Systems, Abingdon, UK). Клетки поддерживали при 37°C и 5% CO 2 в течение 9 дней.Среду меняли после первых семи дней. Для получения достаточного количества материала для построения библиотеки кДНК и для гель-анализа протеома использовали клетки пяти разных доноров. Для библиотеки кДНК использовали объединенные клетки четырех доноров с 2,1, 16,5, 10,7 и 4,3×10 6 незрелых базофилов, полученных из соответствующих культур. Для анализа SDS-PAGE из культуры одного донора выделили 1,4×10 6 культивируемых незрелых базофилов.

Гистологическое окрашивание

Клетки пуповинной крови или очищенные базофилы центрифугировали на предметных стеклах и анализировали на предмет метахроматического окрашивания гранул путем инкубации предметных стекол в 1% альциановом синем 8 GX (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США), разбавленном 60% этанолом и 3.7% соляной кислоты, в течение 15 мин. Для окрашивания ядер клеток предметные стекла инкубировали в течение 5 минут с ядерным быстрым красным контрастным красителем (Apoteksbolaget, Södersjukhuset, Стокгольм, Швеция). После окрашивания предметные стекла промывали в течение 2 с в dH 2 0, сушили на воздухе и монтировали.

Проточная цитометрия

Очистку базофилов и анализ экспрессии поверхностных маркеров проводили, как описано ранее [38].

Выделение культивируемых базофилов

Культивированные базофилы очищали методом магнитно-активированной клеточной сортировки (MACS) с использованием двухэтапной процедуры коктейля.Промытые клетки первично метили добавлением (на 10 7 клеток): 5 мкл FcR-блокирующего реагента (Miltenyi Biotec, Бергиш-Гладбах, Германия), 20 мкл IgG1 анти-CD3 (0,1 мкг/мкл, DAKO A/S, Glostrup Дания), 10 мкл IgG1 анти-CD16 (0,1 мкг/мкл, DAKO A/S), 20 мкл IgG1 анти-CD36 (0,04 мкг/мкл, Immunotech, Марсель, Франция) и 35 мкл IgG1 анти-CD45RA (0,05 мкг/мкл, Immunotech). Затем клетки промывали в MACS-буфере (PBS, 2 мМ EDTA, 0,5% BSA) и метили в 100 мкл/10 7 клеток 20 мкл антимышиного IgG1, 10 мкл анти-CD14 и 10 мкл анти-CD15. Микрогранулы (Miltenyi Biotec).Окрашивание проводили на льду в течение 30 мин при осторожном встряхивании. Перед разделением добавляли MACS-буфер, соответствующий 20-кратному объему вторичного окрашивания. Клетки разделяли магнитным полем на колонках CS в соответствии с инструкциями производителя.

Создание библиотеки кДНК

Тотальную РНК

выделяли из очищенных базофилов методом тиоцианата гуанидина [41], а поли(А) + РНК выделяли с помощью системы PolyATtract®I (Promega, 2800 Woods Hollow Road, Madison, WI).Затем синтезировали двухцепочечную кДНК с использованием набора для синтеза кДНК TimeSaver™ (Amersham Pharmacia Biotech, Уппсала, Швеция). Затем кДНК лигировали в единственный сайт Eco RI вектора лямбда gt-10 (Promega) и упаковывали с использованием системы упаковки ДНК Packagene® Lambda DNA (Promega). Было обнаружено, что библиотека из базофилов крови и культивируемых базофилов содержит приблизительно 14 000 и 600 000 независимых рекомбинантов соответственно.

Скрининг и секвенирование случайно выбранных клонов

Семьсот клонов из культивируемых незрелых базофилов были случайным образом отобраны, и фрагменты вставок были амплифицированы с вектор-специфичными праймерами.После очистки фрагменты ДНК-вставок были отправлены на секвенирование в Центр генома Уппсалы. Последовательности были проверены на соответствие всему геному человека с помощью Blast-поиска в базе данных NCBI.

Анализ частот транскрипта с помощью специальных зондов

Приблизительно 130 000 бляшек из неамплифицированной библиотеки кДНК были нанесены в виде монослоя штамма E-coli C600 Hfl с титром приблизительно 25 000 бляшек/чашка на восемь чашек. Бляшки переносили на фильтры Hybond N+ (Amersham Int., Амершам, Бакингемшир, Англия). Очищенные фрагменты кДНК метили 32 P путем случайного праймирования и использовали в качестве зондов (Megaprime, Amersham Int.). Фильтры подвергали скринингу с использованием различных кДНК и олигозондов. Фильтры промывали при высокой жесткости (0,1×SSC, 0,1% SDS) для зондов кДНК и при средней жесткости (2×SSC, 0,5% SDS) для олигонуклеотидных зондов. Авторадиографию проводили в течение 24–48 ч на пленке Kodak Exomat AR (Eastman-Kodak Company, Рочестер, Нью-Йорк, США).

Анализ SDS-PAGE

Приблизительно 1 миллион незрелых базофилов, полученных из пуповинной крови, растворяли в SDS-буфере для образцов и разделяли на 13% геле SDS-PAGE.В качестве эталона использовали такое же количество клеток из линии клеток эмбриональной почки человека HEK 293-EBNA. Затем гель окрашивали кумасси бриллиантовым синим.

Масс-спектроскопия

После анализа SDS-PAGE и окрашивания кумасси бриллиантовым синим полосы геля вырезали, белок элюировали и расщепляли трипсином. Затем пептиды, образовавшиеся после расщепления трипсином, анализировали с помощью масс-спектроскопии. Затем подробную информацию о молекулярном весе этих фрагментов сопоставили с базой данных NCBI пептидных фрагментов всего генома человека.Это привело к нескольким потенциальным белкам, обычно 2–7. Анализ нескольких сгенерированных фрагментов из одной полосы геля привел только к одному белку, который соответствовал всем пептидам. Обычно для получения одного целевого белка требовалось всего два или три пептида. Однако всегда анализировали не менее пяти пептидов для получения высоконадежного определения.

Результаты

Выделение базофилов периферической крови

Для изучения транскриптома базофилов мы первоначально использовали базофилы периферической крови в серии экспериментов.В качестве исходного материала использовали лейкоцитарную пленку для получения достаточного количества базофилов крови человека для анализа мРНК и создания библиотеки кДНК. Клетки очищали на Ficoll Hypaque и методом магнитной сортировки клеток. В последнем из этих экспериментов, где мы провели наиболее обширный анализ, мы использовали 20 миллионов базофилов чистоты 98%, как определено окрашиванием альциановым синим. Из-за очень небольшого количества нуклеиновых кислот в препарате мы использовали весь материал для создания библиотеки кДНК для анализа транскриптома.Была получена библиотека кДНК, содержащая в общей сложности 14 000 клонов. Эти клоны высевали на два планшета и проводили перенос бляшек на два гибридных N+ фильтра, которые затем гибридизовали с 32 P-мечеными зондами против β-актина, триптазы тучных клеток, α-цепи высокоаффинного рецептора IgE и зонд кДНК мононуклеарных клеток. С помощью этих зондов было получено несколько очень слабых сигналов. Фаговую ДНК из этих клонов очищали и анализировали расщеплением рестрикционными ферментами. Все эти клоны содержали очень короткие вставочные фрагменты ДНК.Анализ последовательности вставок показал, что все клоны содержали повторы Alu или другие фрагменты хромосомной ДНК. Не было идентифицировано ни одного клона, происходящего из мРНК. Эти результаты показали, что базофилы периферической крови содержат очень низкие уровни интактной мРНК. Несколько дополнительных препаратов базофилов также были проанализированы с очень похожими результатами, без интактной мРНК. Вероятным объяснением этих результатов является то, что базофилы периферической крови терминально дифференцированы и почти не содержат функциональной мРНК.Основываясь на этих результатах, мы решили сосредоточить наши усилия на изучении транскриптома базофилов на дифференцированных in vitro базофилах, как описано ниже.

Выделение незрелых базофилов из культур клеток пуповинной крови

Для получения транскрипционно-активных базофилов в количестве, достаточном для анализа их транскриптома, из пуповинной крови выделяли мононуклеарные клетки. Клетки культивировали в непрерывном присутствии IL-3 в течение девяти дней (10 нг/мл). После девяти дней культивирования примерно 60% клеток были базофилоподобными, что определялось метахроматическим окрашиванием.С помощью магнитной сортировки клеток и двухэтапного коктейля было выделено 34×10 6 незрелых базофилоподобных клеток. Этот протокол привел как к высокой чистоте (95% ± 0,5%, положительный результат на альциановый синий), так и к извлечению (59% ± 1,5%) культивируемых базофилов (рис. 1А). Из очищенных клеток 76% экспрессировали маркер тучных клеток и базофилов CD203c, а 56% экспрессировали высокоаффинный рецептор IgE, FcεRI [38]. Фенотип клеток был подобен базофилам крови человека, однако с чуть менее яркой синей окраской и круглыми ядрами, а не дольчатыми ядрами базофилов крови (рис. 1В).Подробное описание фенотипа этих клеток, включая цифры FACS, представлено в предыдущей публикации [38].

Рис. 1. Окраска альциановым синим in vitro дифференцированных базофилов и нормальных базофилов крови.

На панели A показаны окрашенные альциановым синим клетки с 9-го дня дифференцированных базофилов in vitro , происходящих из культур пуповинной крови, стимулированных постоянным присутствием 10 нг/мл IL-3. На панели B показаны нормальные очищенные базофилы периферической крови, окрашенные альциановым синим.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0048308.g001

Конструирование и скрининг библиотеки кДНК из незрелых базофилов

Было выделено

мРНК из 34×10 6 незрелых базофилов, описанных выше, с помощью отбора олиго-dT. мРНК использовали для создания библиотеки кДНК в векторе фага λ gt10, содержащей примерно 600 000 независимых рекомбинантов. Приблизительно 700 независимых клонов были выделены из этой библиотеки и проанализированы на размеры вставок с помощью ПЦР с вектор-специфичными праймерами.Примерно 40% клонов (296 клонов) содержали вставки размером более 100 п.н. Нуклеотидную последовательность этих вставок определяли и сравнивали с базой данных генома человека (NCBI). Приблизительно 55% этих клонов содержали идентифицируемые вставки кДНК (173 последовательности). Остальные клоны представляли собой фрагменты хромосомной ДНК, возможно, происходящие из апоптотических клеток. Полный список из 173 вставок, которые, как было установлено, происходят из широкого спектра различных генов, приведен в таблице 1.Большинство вставок (70%) относятся к генам домашнего хозяйства, а 16% — к клон-специфическим генам. Почти все гены домашнего хозяйства были обнаружены только один раз среди этих 173 клонов. Тем не менее, большинство генов, специфичных для линии, были обнаружены в виде нескольких клонов, демонстрируя чрезмерную представленность транскриптов, специфичных для линии, в библиотеке. Восемнадцать из выделенных клонов кодировали главный основной белок (MBP), два кодировали белок Шарко-Лейдена (CLC) и два кодировали гомолог MBP (таблица 1). Эти три гена экспрессируются как эозинофилами, так и базофилами.Три клона кодировали специфический для эозинофилов белок пероксидазу эозинофилов (ЭПО), а два клона кодировали коровый белок протеогликана серглицин, который экспрессируется несколькими гематопоэтическими линиями (таблица 1). Однако нам не удалось найти никаких клонов субъединиц высокоаффинного рецептора IgE или триптазы тучных клеток. Это побудило нас проверить библиотеку на наличие дополнительных расшифровок, специфичных для линии, с помощью других, более чувствительных методов, чем прямое секвенирование.

Анализ специфических генов линии в библиотеке базофилов

Для определения уровней генов, специфичных для линий, присутствующих в небольшом количестве, был подготовлен набор фильтров, которые гибридизовали с кДНК, мечеными P 32 , или олигонуклеотидными зондами, направленными против ряда гемопоэтических маркерных генов.Мы проанализировали экспрессию двух генов, родственных базофилам и MC, β-триптазы и α-цепи FcεRI, двух генов, экспрессируемых нейтрофилами, катепсина G и эластазы нейтрофилов, трех генов, экспрессируемых эозинофилами, пероксидазы эозинофилов (EPO), эозинофильного катионного белка (ECP). , нейротоксин, полученный из эозинофилов (EDN), и два гена, которые экспрессируются как эозинофилами, так и базофилами, кристаллический белок Шарко-лейдена (CLC) и главный основной белок (MBP). В качестве эталона мы также измерили уровни цитоплазматического β-актина.Хотя положительные сигналы были обнаружены для всех этих зондов, уровни экспрессии существенно различались между этими генами (таблица 2). Поразительным результатом этого скрининга было очень большое количество клонов, наблюдаемых для нескольких белков, родственных эозинофилам, примером которых являются MBP (500 клонов на чашку) и EPO (200 клонов на чашку), которые намного превышали уровни β-актина (120 клонов). /пластина). Это следует сравнить с относительно низкими уровнями генов, связанных с базофилами и нейтрофилами, что приводит только к 2–7 клонам на планшет для β-триптазы, FcεRI, катепсина G и N-эластазы.Таким образом, результат этого скрининга показывает, что клетки в культуре, которые по критериям окрашивания и поверхностным маркерам очень похожи на базофилы, на самом деле более похожи на эозинофилов, если смотреть на их транскриптом.

SDS-PAGE Анализ протеома

Для изучения протеома клеток дифференцированных базофилов in vitro были проанализированы дополнительные 9-дневные культуры с помощью SDS-PAGE. При сравнении полос с клетками НЕК 293, линии клеток эмбриональной почки человека, мы смогли обнаружить несколько заметных дополнительных полос в базофилах, которых не было в клетках НЕК 293 (рис. 2).Некоторые из этих дополнительных полос вырезали из геля и подвергали расщеплению трипсином и анализу масс-спектроскопии. Отдельные пептидные фрагменты, генерируемые трипсином, сравнивали с пептидами всего протеома человека. Две полосы на геле давали пептидные фрагменты, полностью совпадающие с человеческим ЭПО и ОБМ соответственно. Это были единственные два белка, которые мы могли идентифицировать из геля с высокой степенью уверенности. EPO и MBP также были двумя белками, для которых мы получили наибольшее количество клонов в анализе транскриптома, тем самым демонстрируя, что существует хорошая корреляция между анализами белков и мРНК культивируемых базофилов.

Рисунок 2. Анализ протеома дифференцированных in vitro базофилов.

SDS-PAGE анализ человеческих in vitro дифференцированных базофилов. Приблизительно 1 миллион клеток растворяли в буфере SDS-образца и разделяли на 13% геле SDS PAGE. В качестве эталона использовали такое же количество клеток из линии клеток эмбриональной почки человека НЕК 293-EBNA. Положения трех белковых полос, которые были вырезаны из геля и проанализированы с помощью расщепления трипсином и анализа масс-спектроскопии, указаны стрелками и отмечены белками, идентифицированными в этих полосах: эозинофильной пероксидазой (ЭПО) и основным основным белком (MBP).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0048308.g002

Обсуждение

Целью данного исследования было охарактеризовать незрелые базофилоподобные клетки, которые были получены в ходе in vitro культивирования клеток пуповинной крови, и оценить их как потенциальную модель для изучения биологии базофилов.

Скрининг различных условий культивирования ранее показал, что есть преимущество культивирования клеток в постоянном присутствии IL-3 по сравнению с пульсированием IL-3, если требуется большое количество незрелых транскрипционно-активных базофилов [38].Поэтому, чтобы получить достаточное количество незрелых базофилов для анализа транскриптома, мы решили использовать протокол, предполагающий постоянное присутствие IL-3, и культивировать их в течение девяти дней [38].

Используя эти условия культивирования и двухэтапный протокол разделения MACS, мы получили достаточное количество 95% положительных на альциановый синий и транскрипционно активных базофилоподобных клеток для получения библиотеки кДНК с 600 000 независимых клонов. При анализе клонов в этой библиотеке мы обнаружили, что 40% содержат вставки размером более 100 п.н. и что значительная часть этих клонов содержит фрагменты хромосомной ДНК.Последний результат указывал на то, что часть клеток уже окончательно дифференцировалась и начала подвергаться апоптозу. В результате большого количества апоптотической ДНК процент клонов с копиями мРНК составлял от 20 до 25%. Однако этого количества было достаточно, чтобы получить относительно подробную картину транскриптома этих дифференцированных in vitro базофилов. Это следует сравнить с нашими повторными экспериментами с нормальными базофилами крови, где почти 100% клонов со вставками содержали хромосомную ДНК и было трудно выделить хотя бы одну вставку, происходящую из мРНК.

На основании гистохимического окрашивания и экспрессии клеточной поверхности мы охарактеризовали культивируемые клетки как базофилоподобные. Эти клетки окрашиваются альциановым синим, что характерно только для базофилов периферической крови человека и тканевых ТК (рис. 1). Большинство клеток в культуре также были поверхностно-положительными в отношении высокоаффинного рецептора IgE и родственного MC/базофилам белка клеточной поверхности CD203c. Однако, когда мы проанализировали транскриптом, было обнаружено, что они гораздо больше похожи на эозинофилы, чем на базофилы.Были обнаружены очень высокие уровни мРНК EPO, MBP, CLC, а также высокие уровни ECP и EDN, а уровни маркеров базофилов FcεRI и β-триптазы были сравнительно намного ниже. Для некоторых маркеров базофилов уровни были почти в 100 раз ниже, чем для маркеров эозинофилов. Например, с помощью зонда ЭПО мы обнаружили 200 клонов на планшет по сравнению с 2 клонами на планшет для β-триптазы и 3 клонами на планшет для α-цепи FcεRI. Это показывает, что, хотя клетки по окрашиванию и экспрессии маркеров клеточной поверхности напоминают незрелые базофилы, они более похожи на эозинофилы при анализе транскриптома.Этот смешанный фенотип еще больше подтверждает старое представление о том, что у человека эозинофилы и базофилы тесно связаны во время развития [42], [43], [44]. Интересно, что эта ситуация, по-видимому, не применима к базофилам мышей, где базофилы и тучные клетки, по-видимому, имеют общего предшественника [45], [46], [47]. Также была идентифицирована клеточная линия мыши с двойными характеристиками ТК и базофилов, которые экспрессируют как ТК протеазы mMCP-5 и CPA, так и базофильную сериновую протеазу mMCP-8 [48].

Основываясь на ранних выводах о том, что базофилы и эозинофилы человека, по-видимому, тесно связаны во время развития, мы ожидали увидеть низкие уровни транскриптов эозинофилов в дифференцированных базофилах in vitro . Однако очень высокие уровни белков, родственных эозинофилам, трудно объяснить. Одним из возможных объяснений низких уровней связанных с базофилами транскриптов может быть то, что эти транскрипты увеличиваются в изобилии во время дифференцировки и что дифференцировка эозинофилов является доминирующей программой развития.Однако тогда можно ожидать относительно высоких уровней связанных с эозинофилами белков в базофилах крови, чего в норме не наблюдается, возможно, за исключением MBP, который был обнаружен как в базофилах, так и в ТК [49]. Поэтому наиболее вероятным объяснением может быть то, что необходим неизвестный фактор, чтобы подтолкнуть этих незрелых предшественников к более базофилоподобному фенотипу. Однако природа такого фактора до сих пор неизвестна. Также возможно, что взаимодействия клеточной поверхности со стромальными клетками важны для этого процесса развития.Интересно, что введение рекомбинантного ИЛ-3 обезьянам приводит к увеличению циркулирующих базофилов с 1% до почти 40%, что показывает важность ИЛ-3 для пролиферации базофилов in vivo [50]. Таким образом, IL-3 оказывается достаточным для увеличения количества циркулирующих базофилов in vivo , но in vitro кажется, что для запуска этой программы необходимы дополнительные факторы. В качестве альтернативы, другие факторы могут присутствовать в достаточных количествах in vivo для поддержки правильного развития базофилов при внешнем добавлении IL-3.Интересно, что недавно было показано, что стромальный лимфопоэтин тимуса (TSLP) индуцирует развитие базофилов независимо от IL-3 у мышей, и эти базофилы функционально отличаются от базофилов, которые появляются после стимуляции IL-3 [51]. Это показывает, что другие цитокины могут иметь большое значение для развития базофилов.

Таким образом, работа над базофилоподобными клетками привела к выявлению факторов и условий дифференцировки базофилов, а также тесной связи при дифференцировке базофилов и эозинофилов человека.Однако на основании анализа транскриптома можно сделать вывод, что условия культивирования необходимо оптимизировать для получения клеток, которые не только демонстрируют поверхностный фенотип зрелых базофилов крови, но также содержат гранулы нормальных базофилов крови.

Благодарности

Благодарим Марию Авескох за отличную техническую помощь.

Авторские взносы

Задумал и разработал эксперименты: JG GN SW LH. Проведены эксперименты: JG JMR SEM SW LH.Проанализированы данные: JG LH. Написал статью: JG JMR SEM GN SW LH.

Каталожные номера

  1. 1. Hallgren J, Gurish MF (2011)Доставка и созревание предшественников тучных клеток. Adv Exp Med Biol 716: 14–28.
  2. 2. Эрлих П. (1879) Beiträge zur Kenntnis der granulierten Bindegewellzellen und der eosinophilien Leukocyten. Арх Анат Физиол: 166–169.
  3. 3. Арок М., Мерле-Берал Х., Дугас Б., Уааз Ф., Ле Гофф Л. и др. (1993) Высвобождение IL-4 лейкемическими и активированными нормальными базофилами человека.Дж. Иммунол 151: 1441–1447.
  4. 4. Li H, Sim TC, Alam R (1996) IL-13 высвобождается и локализуется в базофилах человека. Дж. Иммунол 156: 4833–4838.
  5. 5. Poorafshar M, Helmby H, Troye-Blomberg M, Hellman L (2000) MMCP-8, первый специфичный для линии дифференцировки маркер для базофилов мыши. Повышенное количество сильнодействующих IL-4-продуцирующих и MMCP-8-позитивных клеток в селезенке мышей, инфицированных малярией. Eur J Immunol 30: 2660–2668.
  6. 6. Мин Б., Праут М., Ху-Ли Дж., Чжу Дж., Янкович Д. и др.(2004) Базофилы продуцируют IL-4 и накапливаются в тканях после заражения Th3-индуцирующим паразитом. J Exp Med 200: 507–517.
  7. 7. Ходун М.В., Орехова Т., Поттер С., Моррис С., Финкельман Ф.Д. (2004) Базофилы инициируют продукцию ИЛ-4 во время Т-зависимой реакции памяти. J Exp Med 200: 857–870.
  8. 8. Miter E, Taylor RT, Kubofcik J, Nutman TB (2004) Базофилы, управляемые антигеном паразитов, являются основным источником IL-4 при филяриатозных инфекциях человека. Дж. Иммунол 172: 2439–2445.
  9. 9. Schneider E, Thieblemont N, De Moraes ML, Dy M (2010) Базофилы: новые игроки в цитокиновой сети. Eur Cytokine Netw 21: 142–153.
  10. 10. Сокол С.Л., Бартон Г.М., Фарр А.Г., Меджитов Р. (2008)Механизм инициации аллерген-индуцированных Т-хелперных ответов 2 типа. Нат Иммунол 9: 310–318.
  11. 11. Hellman L (2007) Регуляция гомеостаза IgE и идентификация потенциальных целей для терапевтического вмешательства. Биомед Фармакотер 61: 34–49.
  12. 12. Обата К., Мукаи К., Цудзимура Ю., Ишивата К., Кавано Ю. и др. (2007) Базофилы являются важными инициаторами нового типа хронического аллергического воспаления. Кровь 110: 913–920.
  13. 13. Цудзимура Ю., Обата К., Мукаи К., Синдо Х., Йошида М. и др. (2008) Базофилы играют ключевую роль в иммуноглобулин-G-опосредованной, но не иммуноглобулин-E-опосредованной системной анафилаксии. Иммунитет 28: 581–589.
  14. 14. Вада Т., Ишивата К., Косэки Х., Ишикура Т., Угаджин Т. и др.(2010)Селективное удаление базофилов у мышей выявило их неповторяющуюся роль в приобретенном иммунитете против клещей. Дж. Клин Инвест 120: 2867–2875.
  15. 15. Карасуяма Х., Мукай К., Цудзимура Ю., Обата К. (2009) Недавно открытые роли базофилов: забытое меньшинство обретает новое уважение. Нат Рев Иммунол 9: 9–13.
  16. 16. Онмахт С, Шварц С, Панцер М, Шидевиц I, Науманн Р и др. (2010) Базофилы организуют хронический аллергический дерматит и защитный иммунитет против гельминтов.Иммунитет 33: 364–374.
  17. 17. Ohnmacht C, Voehringer D (2010)Базофилы защищают от повторного заражения анкилостомами независимо от тучных клеток и клеток памяти Th3. Дж. Иммунол 184: 344–350.
  18. 18. Карасуяма Х., Вада Т., Йошикава С., Обата К. (2011) Новые роли базофилов в защитном иммунитете от паразитов. Тенденции Иммунол 32: 125–130.
  19. 19. Джоги-Брахим С., Мин Х.К., Фукуока Ю., Ся Х.З., Шварц Л.Б. (2004)Экспрессия альфа-триптазы и бета-триптазы базофилами человека.J Allergy Clin Immunol 113: 1086–1092.
  20. 20. Lutzelschwab C, Pejler G, Aveskogh M, Hellman L (1997)Протеазы секреторных гранул в тучных клетках крыс. Клонирование 10 различных сериновых протеаз и карбоксипептидазы А из различных популяций тучных клеток крыс. J Exp Med 185: 13–29.
  21. 21. Пейлер Г., Роннберг Э., Варн И., Вернерссон С. (2010)Протеазы тучных клеток: многогранные регуляторы воспалительных заболеваний. Кровь 115: 4981–4990.
  22. 22. Lutzelschwab C, Huang MR, Kullberg MC, Aveskogh M, Hellman L (1998) Характеристика протеазы-8 тучных клеток мыши, первого члена нового подсемейства сериновых протеаз тучных клеток мыши, отличающихся как от классических химаз, так и от триптаз.Eur J Immunol 28: 1022–1033.
  23. 23. Чарльз Н., Уотфорд В.Т., Рамос Х.Л., Хеллман Л., Эттген Х.К. и др. (2009)Линкиназа контролирует экспрессию фактора транскрипции базофилов GATA-3 и индукцию дифференцировки клеток Th3. Иммунитет 30: 533–543.
  24. 24. Угаджин Т., Кодзима Т., Мукаи К., Обата К., Кавано Ю. и др. (2009) Базофилы преимущественно экспрессируют мышиную протеазу тучных клеток 11 из семейства триптаз тучных клеток, в отличие от тучных клеток. J Leukoc Biol 86: 1417–1425.
  25. 25. Gallwitz M, Hellman L (2006)Быстрая специфичная для линии диверсификация локуса химазы тучных клеток в ходе эволюции млекопитающих. Иммуногенетика 58: 641–654.
  26. 26. Gallwitz M, Reimer JM, Hellman L (2006) Расширение локуса химазы тучных клеток за последние 200 миллионов лет эволюции млекопитающих. Иммуногенетика 58: 655–669.
  27. 27. Lunderius C, Hellman L (2001) Характеристика гена, кодирующего протеазу тучных клеток мыши 8 (mMCP-8), и сравнительный анализ генов гемопоэтических сериновых протеаз.Иммуногенетика 53: 225–232.
  28. 28. McEuen AR, Calafat J, Compton SJ, Easom NJ, Buckley MG, et al. (2001) Масса, заряд и субклеточная локализация уникального секреторного продукта, идентифицированного базофил-специфическим антителом BB1. J Allergy Clin Immunol 107: 842–848.
  29. 29. Кепли С.Л., Крейг С.С., Шварц Л.Б. (1995)Идентификация и частичная характеристика уникального маркера базофилов человека. Дж. Иммунол 154: 6548–6555.
  30. 30. Weil SC, Rosner GL, Reid MS, Chisholm RL, Farber NM, et al.(1987) Клонирование кДНК миелопероксидазы человека: снижение мРНК миелопероксидазы при индукции клеток HL-60. Proc Natl Acad Sci U S A 84: 2057–2061.
  31. 31. Plager DA, Loegering DA, Weiler DA, Checkel JL, Wagner JM, et al. (1999)Новый и сильно отличающийся гомолог основного основного белка эозинофильных гранул человека. J Biol Chem 274: 14464–14473.
  32. 32. Киши К. (1985) Новая клеточная линия лейкемии с филадельфийской хромосомой, охарактеризованная как предшественники базофилов.Лев Рез 9: 381–390.
  33. 33. Blom T, Huang R, Aveskogh M, Nilsson K, Hellman L (1992) Фенотипическая характеристика KU812, клеточной линии, идентифицированной как незрелый базофильный лейкоцит человека. Eur J Immunol 22: 2025–2032.
  34. 34. Blom T, Nilsson G, Sundstrom C, Nilsson K, Hellman L (1996) Характеристика человеческой базофилоподобной клеточной линии (LAMA-84). Scand J Immunol 44: 54–61.
  35. 35. Сайто Х., Хатаке К., Дворжак А.М., Лейферман К.М., Донненберг А.Д. и др.(1988)Селективная дифференцировка и пролиферация гемопоэтических клеток, индуцированная рекомбинантными интерлейкинами человека. Proc Natl Acad Sci U S A 85: 2288–2292.
  36. 36. Валент П., Бесемер Дж., Мухм М., Майдич О., Лехнер К. и др. (1989) Интерлейкин 3 активирует базофилы крови человека через сайты связывания с высоким сродством. Proc Natl Acad Sci U S A 86: 5542–5546.
  37. 37. Кепли С.Л., Пфайффер Дж.Р., Шварц Л.Б., Уилсон Б.С., Оливер Дж.М. (1998)Идентификация и характеристика базофилов человека, полученных из пуповинной крови.J Leukoc Biol 64: 474–483.
  38. 38. Reimer JM, Magnusson S, Juremalm M, Nilsson G, Hellman L, et al. (2006)Выделение транскрипционно активных базофилов, полученных из пуповинной крови, экспрессирующих FcepsilonRI, HLA-DR и CD203c. Аллергия 61: 1063–1070.
  39. 39. Беринг Х.Дж., Симмонс П.Дж., Падни М., Мюллер Р., Джарроссей Д. и др. (1999) Моноклональное антитело 97A6 определяет новый поверхностный антиген, экспрессируемый на базофилах человека и их мультипотентных и унипотентных предшественниках.Кровь 94: 2343–2356.
  40. 40. Buhring HJ, Streble A, Valent P (2004)Специфический для базофилов эктофермент E-NPP3 (CD203c) как маркер для активации клеток и диагностики аллергии. Int Arch Allergy Immunol 133: 317–329.
  41. 41. Хомчински П., Сакки Н. (1987)Одноэтапный метод выделения РНК путем экстракции кислотным тиоцианатом гуанидиния-фенолом-хлороформом. Анальный биохим 162: 156–159.
  42. 42. Денбург Дж. А., Телизын С., Месснер Х., Лим Б., Джамал Н. и др.(1985) Гетерогенность колоний эозинофильного типа в периферической крови человека: свидетельство общего базофильно-эозинофильного предшественника. Кровь 66: 312–318.
  43. 43. Takemori N, Saito N, Tachibana N, Hayashishita N, Miyazaki T (1988)Гибридные эозинофильно-базофильные гранулоциты при хроническом миелоидном лейкозе. Ам Дж. Клин Патол 89: 702–703.
  44. 44. Boyce JA, Friend D, Matsumoto R, Austen KF, Owen WF (1995) Дифференциация in vitro гибридных эозинофильных/базофильных гранулоцитов: аутокринная функция промежуточного продукта развития эозинофилов.J Exp Med 182: 49–57.
  45. 45. Arinobu Y, Iwasaki H, Gurish MF, Mizuno S, Shigematsu H, et al. (2005) Контрольные точки развития базофильных / тучных клеток в гемопоэзе взрослых мышей. Proc Natl Acad Sci U S A 102: 18105–18110.
  46. 46. Халлгрен Дж., Гуриш М.Ф. (2007)Пути развития и транспортировки тучных клеток мышей: отслеживание корней и путей тучных клеток. Иммунол Ред. 217: 8–18.
  47. 47. Ohmori K, Luo Y, Jia Y, Nishida J, Wang Z и др.(2009) IL-3 индуцирует экспансию базофилов in vivo, направляя предшественников гранулоцитов-моноцитов на дифференцировку в предшественников, ограниченных по линии базофилов, в костном мозге и увеличивая количество предшественников базофилов/тучных клеток в селезенке. Дж. Иммунол 182: 2835–2841.
  48. 48. Lunderius C, Xiang Z, Nilsson G, Hellman L (2000)Линии тучных клеток мышей как индикаторы ранних событий в развитии тучных клеток и базофилов. Eur J Immunol 30: 3396–3402.
  49. 49. Накадзима Т., Мацумото К., Суто Х., Танака К., Эбисава М. и др.(2001)Скрининг экспрессии генов тучных клеток и эозинофилов человека с использованием массивов олигонуклеотидных зондов высокой плотности: обильная экспрессия основного основного белка в тучных клетках. Кровь 98: 1127–1134.
  50. 50. Mayer P, Valent P, Schmidt G, Liehl E, Bettelheim P (1989)Эффекты рекомбинантного человеческого интерлейкина-3 in vivo: демонстрация базофильного фактора дифференцировки, гистамин-продуцирующей активности и примирование GM-CSF-чувствительных предшественников у нечеловеческих приматы. Кровь 74: 613–621.
  51. 51. Siracusa MC, Saenz SA, Hill DA, Kim BS, Headley MB, et al. (2011) TSLP способствует независимому от интерлейкина-3 базофильному кроветворению и воспалению 2 типа. Природа 477: 229–233.
.