9Дек

Что такое цитограмма воспаления: Страница не найдена (404 Not Found)

Содержание

Цитологическое исследование с заключением по терминологической системе Бетесда (с описанием цитограммы), 1 стекло, окраска по Папаниколау

Цитологическое исследование мазков, взятых из шейки матки, является основой программ, направленных на раннее выявление предраковых состояний и рака шейки матки. Исследование цитологических препаратов, полученных из цервикального канала и влагалищной части шейки матки включает оценку качества полученного материала, определение наличия и характера поражения шейки матки в соответствие с общепринятой системой оценки, в том числе системой Бетесда.

Рак шейки матки чаще всего развивается в зоне трансформации, ему предшествуют внутриэпителиальные поражения (дисплазии). В связи с тем, что дисплазии могут располагаться на небольших, ограниченных участках, очень важно, чтобы материал был получен со всей поверхности шейки, особенно с зоны трансформации. Число патологически измененных клеток в цитологическом препарате может быть различно, и если их мало, их могут пропустить при скрининге.

Для окраски мазков используют различные методы. Метод Папаниколау является самым распространенным способом окраски мазков в мире. В России также используют окрашивание по Романовскому в модификации Лейшмана.

Показания к назначению исследований:

скрининговые исследования для выявления онкологической патологии шейки матки;
мониторинг состояния шейки матки после терапии.

У женщин репродуктивного возраста рекомендуется забирать мазки не ранее, чем на 5-й день менструального цикла и не позднее, чем за 5 дней до предполагаемого начала менструации.

Мазки не следует брать:

ранее 48 часов после полового контакта;
во время менструации;
ранее 48 часов после использования свечей и других веществ, содержащих жир, раствора уксуса или Люголя, тампонов или спермицидов;
после вагинального исследования (УЗИ малого таза, кольпоскопия), спринцевания;
в период лечения урогенитальных инфекций

Биологический материалсоскоб из эктоцервикса и эндоцервикса; соскоб из влагалища
Метод исследованиясветовая микроскопия
Срок исполнения без учета времени на доставку до лаборатории, днейот 1 до 5 календарных дней
Формат результата, единицы измерения

1. Количество материала

Материал полноценный (адекватный) – полноценным материалом считается мазок хорошего качества, содержащий достаточное количество соответствующих типов клеток.
Материал недостаточно полноценный (недостаточно адекватный) – в материале отсутствуют клетки эндоцервикса и/или метаплазированные клетки, клетки плоского эпителия находятся в достаточном количестве, или клеточный состав скудный.
Материал неполноценный (неадекватный) – по материалу невозможно судить о наличии или отсутствии патологических изменений шейки матки.
2. Интерпретация результатов

Отрицательный Пап-тест – эпителиальные клетки в пределах нормы, цитограмма соответствует возрасту, норме.
Доброкачественные изменения – присутствие неопухолевых клеток, признаки воспаления (увеличенное количество лейкоцитов), инфекции (значительное количество кокков, палочек). Возможно обнаружение инфекционных агентов (с указанием возбудителя), например трихомонад, дрожжей.
Изменения клеток плоского эпителия (требуют повышенного внимания, дообследования и при выявлении предрака или рака лечения):
Атипичные клетки плоского эпителия неясного значения (Atypical squamous cells undertermined significance, ASC-US)
Атипичные клетки плоского эпителия, не позволяющие исключить HSIL (Atypical squamous cells cannot exclude, HSIL ASC-H)
Плоскоклеточное интраэпителиальное поражение (Squamous intraepitelial lesion. SIL)
Низкая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения (Low grade squamous intraepitelial lesion, LSIL)
Высокая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения (High grade squamous intraepitelial lesion, HSIL)
Цервикальная интраэпителиальная неоплазия 1-й, 2-й или 3-й степени (Cervical intraepithelial neoplasia grade 1, 2 or 3, CIN 1, 2, 3)
Карцинома in situ (Carcinoma in situ, CIS)
Плоскоклеточный рак – инвазивный рак
Изменения железистых клеток (требуют повышенного внимания, дообследования и при выявлении предрака или рака лечения):
Атипичные железистые клетки (Atypical glandular cells, AGC)
Атипичные железистые клетки, похожие на неопластичные (Atypical glandular cells, favor neoplastic, AGC, favor neoplastic)
Аденокарцинома
При выявлении минимальных изменений или атипичных клеток неясного значения рекомендовано провести обследование на онкогенные серотипы вируса папилломы человека.

Что может влиять на результат?

У девушек моложе 20 лет возможны ложноположительные результаты в связи с наличием изменений эпителия на фоне транзиторных гормональных нарушений.

Эндоцервицит 🎀 | Цены | Врачи

Лика

Всегда хотелось, чтобы грудь была немного больше, чем дано природой. Но импланты– это не для меня. Когда я узнала про липофилинг, то сразу поняла, что это то что мне нужно. В клинике Элэн одной процедурой мы сразу «убили 2 зайцев» — и бедра стали меньше, и грудь больше. Я очень довольна!

Алиса

Я обратилась в клинику Эл. Эн., так как меня интересовала процедура увеличения точки G. Сказать, что результат поразительный – это ничего не сказать. Я знала, что это работает, но что настолько! Сама по себе процедура безболезненная, и длится всего минут 20. Конечно, я немного смущалась, но врач, Галустян Медея Владимировна, настоящий профессионал, вела себя максимально деликатно! Выражаю свою безмерную благодарность ей!

Анна

Решила сделать себе эпиляцию ног и зоны бикини в клинике ЭлЭн. Очень приятно удивили цены на фотоэпиляцию. Учитывая, что мне хватило всего 4-х процедур, с лишними волосами я распрощалась за очень даже невысокую плату (особенно по столичным-то меркам). Мне процедуры делала Елена Витальевна. Врач впечатлила своим мастерством и профессиональным подходом. Все быстро, практически безболезненно и качественно, за что ей большое спасибо. Рекомендую!

Наташа

В Эл.Эн лечился мой муж, от хронического простатита. Один курс лечения лазером дал нам шанс на то, чтобы снова попробовать завести ребенка. И это после длительного лечения дорогими антибиотиками, от которых результатом был лишь дисбактериоз. Врачу большое спасибо!

Михаил

Удалял липому на спине. Она была довольно приличных размеров, поэтому и решился. Операция вся заняла 20 минут, потом с пластырем немного походил и все, забыл даже, где она была. Все без боли прошло практически, только немного это место поныло, когда наркоз отошел, и все.

Татьяна

Вросший ноготь мешал при ходьбе, а надеть модельную обувь я вообще не могла. Решила провести удаление вросшего ногтя в вашей клинике и не прогадала. Лечение почти безболезненное, а самое главное, бескровное (ужасно боюсь крови). Особенно понравилось то, что даже в больницу не пришлось ложиться, все сделали минут за сорок под местной анестезией. Единственный минус — дороговато. Но потом поняла, что оно того стоило, так как врач сказала, что ноготь больше никогда не врастет. Очень благодарна всем специалистам клиники Эл. Эн.!

Элли

Пришла в клинику для омоложения, мне посоветовали эту процедуру, так как основная проблема была именно с кожей вокруг глаз. Говорю сразу – морщины блефаропластика не убирает! Но! Она стерла все мои мешки и припухлости, благодаря чему я скинула лет тцать точно! Теперь могу делать отличный макияж. Спасибо хирургу и клинике за замечательный результат!!

Лилия

В детстве на меня набросилась собака и повредила нос. Рана зажила, но рубцы все равно остались. Они сильно мешали мне в жизни, поэтому я решила во что бы то ни стало от них избавиться. Рассмотрев различные варианты, я решила остановиться на лазерном удалении рубцов. Записалась в клинику, сначала врач меня внимательно осмотрела, порекомендовала оптимальный тип воздействия, назвала примерное количество сеансов и рассказала о результате, которого следует ожидать. Мне потребовалось всего 3 процедуры. Было практически не больно, перед началом сеанса врач мазала нос специальным кремом для анестезии. Выпуклая рубцовая ткань после курса лазерного воздействия значительно уменьшилась, шрамы стали практически незаметными. Очень благодарна врачам за помощь!

Артур

Давно и тщетно боролся с бесплодием. В разных клиниках проводили стимуляцию сперматогенеза, назначали терапевтические курсы, которые не давали результатов. В вашу клинику попал по какому-то чудесному совпадению, как говорится, оказался в нужном месте в нужный момент. Оказалось, что лечение мне нужно оперативное. После восстановления проходимости протоков сейчас дома, иду на поправку, прогнозы очень хорошие. Жалею только о том, что не пришел раньше.

Мирослава

Перепробовала множество антицеллюлитных программ и большинство из них меня просто разочаровали. Когда я обратилась в клинику ЭлЭн, то тоже была настроена немного скептически. Первые две процедуры дали едва заметный эффект, я даже хотела бросить курс. Благо, послушала совета доктора и решила продолжить. Сейчас «апельсиновая корка» исчезла. Я очень-очень рада!)

Николай

В 18 лет сделал татуировку с именем любимой девушки. Любовь прошла, а вот след от нее остался)) Конечно же, татушку надо было сводить. Записался в Эл.Эн. на лазерное удаление. Процедура не очень приятная. Мне потребовалось 8 сеансов. После первого уже были заметны изменения – тату посветлело. После пятого сеанса картинку уже было почти не видно. Следующие 3 процедуры делали для окончательного удаления красителя с большим перерывом, почти через 2 месяца. Никаких рубцов и шрамов не осталось. Правда, кожа на месте бывшей татуировки значительно светлее, но я думаю, летом рука загорит и ничего не будет видно.

Ирина

От купероза я страдала несколько лет, приходилось постоянно замазывать лицо толстым слоем тонального крема, отчего кожа стала жирной. Я уже не знала, как бороться с этими недостатками, и очень страдала. Пока моя подруга не посоветовала мне замечательного специалиста – Гордееву Елену Витальевну. Записалась на прием. Врач внимательно осмотрела меня, выслушала жалобы и посоветовала процедуру удаления сосудистых звездочек при помощи лазера. Я не верила в то, что будет заметный эффект, но все же решила попробовать. Во время процедуры я не испытывала неприятных ощущений, лишь небольшие покалывания и тепло. Сейчас я прошла уже три сеанса, результат уже заметен, но пока капилляры еще видны.

Лида

Очень давно вместе с подругой сделали тату. Тогда нам это казалось оригинальным. Но со временем мне надоело, и я решила от него избавиться. Получить взамен тату уродливый шрам не хотелось, поэтому я решилась на лазерное удаление. Записалась к косметологу, сходила сначала на консультацию, потом на процедуру. Поскольку методика щадящая, результат не такой быстрый, как хотелось бы. Сейчас я прошла курс из пяти процедур, один сеанс в три-четыре недели. Тату практически незаметно.

Игорь

Проходил в данной клинике обследование и в итоге узнал причину бесплодия. По результатам анализов мне был составлен индивидуальный график лечения, продолжительностью в 10 процедур. Сейчас все показатели в норме, но пока не могу сказать, было лечение эффективным или нет. Однако все равно хочу поблагодарить доктора за его бесценную помощь и внимание к моей проблеме.

Ксения

У сына (18 лет) выявили водянку яичка. Водила по самым разным клиникам, в панике. Где-то говорят надо оперировать срочно, где-то — подождать, рассосется само. В итоге пришли в вашу клинику, где сказали, что нужна операция. Боялась безумно, но все обошлось. Спасибо Александру Николаевичу огромное!

Инга

После беременности остались растяжки на животе. Долго мучилась в поисках средств, начинала с тренажерного зала – безрезультатно. Отыскала информацию о лазерном удалении растяжек. Пришла в клинику, все прошло просто здорово – не больно совсем и безопасно (без осложнений). Врачи все мне понятно рассказали. Я прошла 4 процедуры с интервалом в 1 месяц, восстановительный период после процедуры небольшой — 2-3 дня. Так я убрала растяжки. Советую — проверено на себе.

Ксения

Во время беременности у меня начали сильно выпадать волосы. Я списывала все на нехватку витаминов и особо не уделяла внимания этой проблеме. Как оказалось зря – со временем мои волосы стали тусклыми, редкими и очень ломкими. Даже самые дорогие бальзамы и маски уже не помогали, тогда я решила обратиться к трихологу. Специалист сказал, что лучшее средство для лечения выпадения волос у женщин — это лазерная терапия. Я начала проходить курс процедур. Во время сеанса с помощью специального аппарата лазером воздействуют на кожу головы, никаких неприятных ощущений не чувствуется. Уже после первой процедуры волосы стали выпадать меньше, а, пройдя весь курс, я заметила, что они вновь стали блестящими, крепкими, более густыми. Очень довольна результатом.

Виктор

Спасибо огромное за профессионализм и ответственный подход к делу уважаемого Александра Николаевича! Уже практически год прошел с момента когда Вы сделали операцию на уздечке, которая у меня порвалась и была грамотно и четко прооперирована! Никаких осложнений и смены ощущений не почувствовал, всё время боялся что шов после зарастания или разорвется, или просто будут надрывы, однако нет, всё просто великолепно! Спасибо Вам огромное!

Екатерина

Долго искала, кто же удалит мою липому на самом видном и нежном месте — между переносицей и глазом. Все клиники, которые я обошла, предлагали какие-то нереальные цены на операцию (платить 30 штук за 15 минут операции казалось дикостью). При этом все анализы (биопсия) у меня уже были на руках. К счастью поисковик подсказал мне клинику Эл.Эн! В день консультации оказалось, что можно прямо сейчас и удалить наконец эту надоевшую липому и я не задумываясь согласилась 🙂 Спасибо огромное хирургу Светлане Халатян! Она успокоила меня и очень профессинально, быстро и безболезненно всё удалила. Очень рада, что обратилась именно к вам! Спасибо!

Людмила

Никогда не думала, что буду вынуждена искусственно восстанавливать свою девственность, а вот пришлось. После гименопластики я еще полгода ждала того самого момента, и вот все получилось, как нужно! Сейчас я уже могу сказать, что не стоит бояться. Это абсолютно безболезненная процедура, удачи!

Галина

Делала лазерное отбеливание. Впечатления очень положительные. Процедура действительно безболезненная, длится всего 30 минут. Результатом довольна! Спасибо!

Милана

Позавчера сделала процедуру. Был небольшой отек, но все ушло, как и говорили. Формой губ очень довольна. Теперь хочется еще чуть больше)) Большое спасибо всем сотрудникам клиники. Особенно врачу — Суге-Маадыр Алине Вячеславовне. Отличный доктор!!

Олеся

Огромное спасибо этой клинике! Хотела сделать операцию быстро — пришла на консультацию, в тот же день сдала анализы и через день уже была сделана операция. Период восстановления прошел незаметно, занималась повседневными делами и никакого намека на боль или дискомфорт. Доктору отдельное спасибо, приехала в назначенный мной день, понятно и доступно все рассказала и была очень внимательна. Спасибо большое.

Лиана

Пишу с благодарностью, доктору Алине Вячеславовне! Занимаюсь спортом, но все равно на ягодицах оставались бугры. Решила записаться на процедуры с «чудо аппаратом -TriActive». Удивительно и радостно, за несколько безболезненных процедур, кожа стала более ровной. «Бугры» уменьшились, и практически не заметны. Очень, очень рада!!!!

yandex.ru-Марина С.

Я давно искала себе косметолога, чтобы все процедуры проходить в одном месте. Хочется сохранить свою красоту подольше. Мне очень понравилось отношение к клиентам, сама атмосфера создания и сохранения красоты в этом центре. Если сомневаетесь, идите смело, хотя бы посмотрите, что это такое, и какие услуги еще здесь предлагают. А выбор там просто огромный. И они ничего не навязывают, просто рассказывают, не настаивая. А это тоже плюс. На будущее у меня уже собран список, чем буду пользоваться: срединный пилинг, смас лифтинг. Ну и мезотерапию попробую обязательно

Вопрос №194725 из категории гинекология

Вопрос создается. Пожалуйста, подождите…

Только зарегистрированные пользователи могу задавать вопрос.
Зарегистрируйтесь на портале, задавайте вопросы и получайте ответы от квалифицированных специалистов!

Напоминаем, что стоимость публикации вопроса — 10 бонусов.

Зарегистрироваться Как получить бонусы

К сожалению, у вас недостаточно бонусов для оплаты вопроса.
Напоминаем, что стоимость публикации вопроса — 10 бонусов.

Как получить бонусы

Раздел медицины*: — Не указано —КоронавирусАкушерствоАллергология, иммунологияАнестезиологияВенерологияВертебрологияВетеринарияГастроэнтерологияГематологияГепатологияГериатрияГинекологияГирудотерапияГомеопатияДерматологияДиетологияИглотерапия и РефлексотерапияИнфектология и паразитологияКардиологияКардиохирургияКосметологияЛабораторная и функциональная диагностикаЛечение травмЛогопедияМаммологияМануальная терапияМРТ, КТ диагностикаНаркологияНеврологияНейрохирургияНетрадиционные методы леченияНефрологияОбщая хирургияОнкологияОстеопатияОториноларингологияОфтальмологияПедиатрияПлазмаферезПластическая хирургияПодологияПроктологияПсихиатрияПсихологияПсихотерапияПульмонология, фтизиатрияРадиология и лучевая терапияРеабилитологияРеаниматология и интенсивная терапияРевматологияРепродукция и генетикаСексологияСомнологияСпортивная медицинаСтоматологияСурдологияТерапияТравматология и ортопедияТрансфузиологияТрихологияУЗИУльтразвуковая диагностикаУрология и андрологияФармакологияФизиотерапияФлебологияЧелюстно-лицевая хирургияЭндокринологияЗатрудняюсь выбрать (будет выбрана терапия)

Кому адресован вопросВопрос адресован: ВсемКонсультантам

Консультант, которому задается вопрос: Всем…Агабекян Нонна Вачагановна (Акушер, Гинеколог)Айзикович Борис Леонидович (Аллерголог, Гастроэнтеролог, ЛОР (Оториноларинголог), Педиатр, Терапевт)Акмалов Эдуард Альбертович (Аллерголог, Врач спортивной медицины)Александров Павел Андреевич (Венеролог, Гепатолог, Инфекционист, Паразитолог, Эпидемиолог)Александрова Анна Михайловна (Педагог, Психолог, Психотерапевт)Али Мохамед Гамал Эльдин Мансур (Педиатр)Аристова Анастасия Михайловна (Андролог, Уролог, Хирург)Армашов Вадим Петрович (Хирург)Афанасьева Дарья Львовна (Кардиолог, Терапевт)Беляева Елена Александровна (Гинеколог, Невролог, Рефлексотерапевт)Богданов Николай Анатольевич (Психиатр, Психолог, Психотерапевт)Бушаева Ольга Владимировна (Пульмонолог, Терапевт)Врублевская Елена (Педиатр)Гензе Ольга Владимировна (Генетик, Педиатр)Глазной Василий Иванович (Сурдолог)Головина Анастасия Михайловна (Окулист (Офтальмолог))Горохова Юлия Игоревна (Венеролог, Врач общей практики, Дерматолог)Грачева Оксана Анатольевна (Психолог)Григорьева Алла Сергеевна (Врач общей практики, Терапевт)Григорян Артур Григоревич (Хирург)Демидова Елена Леонидовна (Психолог, Психотерапевт)Денищук Денищук Иван Сергеевич (Андролог, Уролог)Дибиров Магомед Гусейнович (Стоматолог)Довгаль Анастасия Юрьевна (Маммолог, Онколог, Радиолог)Долгова Юлия Владимировна (Педиатр)Дубровина Карина Сергеевна (Акушер, Гинеколог)Дьяконова Мария Алексеевна (Гериатр, Терапевт)Екатерина (Врач общей практики, Гинеколог, Невролог, Психиатр, Терапевт)Жердакова Дарья Владимировна (Акушер, Гинеколог)Загумённая Анна Юрьевна (Врач спортивной медицины, Гирудотерапевт, Диетолог, Косметолог, Терапевт)Зверев Валентин Сергеевич (Ортопед, Травматолог)Згоба Марьяна Игоревна (Окулист (Офтальмолог))Зинченко Вадим Васильевич (Рентгенолог, Хирург)Зорий Евген Владимирович (Невролог, Психолог, Терапевт, Хирург)Извозчикова Нина Владиславовна (Гастроэнтеролог, Дерматолог, Иммунолог, Инфекционист, Пульмонолог)Илона Игоревна (Врач общей практики, Гастроэнтеролог, Терапевт, Эндокринолог)Калявина Светлана Николаевна (Акушер, Гинеколог)Калягина Екатерина (Другая специальность)Карпенко Алик Викторович (Ортопед, Травматолог)Касимов Анар Физули оглы (Онколог, Хирург)Киреев Сергей Александрович (Психиатр, Психолог, Психотерапевт)Кирнос Марина Станиславовна (Стоматолог, Стоматолог детский, Стоматолог-терапевт)Копежанова Гульсум (Акушер, Гинеколог)Корж Анна Анатольевна (Акушер, Гинеколог, Маммолог, Эндокринолог)Кравцов Александр Васильевич (Нарколог, Психиатр)Красильников Андрей Викторович (Врач ультразвуковой диагностики, Медицинский директор, Флеболог, Хирург)Кряжевских Инна Петровна (Терапевт, Гастроэнтеролог)Кудряшова Светлана Петровна (Эндокринолог)Куртанидзе Ираклий Малхазович (Окулист (Офтальмолог))Кущ Елена Владимировна (Диетолог, Терапевт)Лазарева Татьяна Сергеевна (ЛОР (Оториноларинголог))Лаптева Лариса Ивановна (Невролог)Лебединская Татьяна Александровна (Психолог, Психотерапевт)Ледник Максим Леонидович (Венеролог, Дерматолог)Леонова Наталья Николаевна (Детский хирург)Литвиненко Станислав Григорьевич (Ортопед, Травматолог)Лямина Ирина Алексеевна (Акушер)Максименко Татьяна Константиновна (Инфекционист)МАЛЬКОВ РОМАН ЕВГЕНЬЕВИЧ (Диетолог, Остеопат, Реабилитолог)Мамедов Рамис (ЛОР (Оториноларинголог))Мартиросян Яков Ашотович (Детский хирург, Проктолог, Травматолог, Уролог, Хирург)Маряшина Юлия Александровна (Акушер, Венеролог, Врач ультразвуковой диагностики, Гинеколог, Педиатр)Матвеева Ярослава Дмитриевна (Педиатр)Мельшина Алёна Игоревна (Окулист (Офтальмолог))Мершед Хасан Имадович (Вертебролог, Нейрохирург)Мидов Артур Мухамедович (Стоматолог, Стоматолог-хирург)Миллер Ирина Васильевна (Невролог)Мильдзихова АЛЬБИНА Бексолтановна (Врач общей практики, Гинеколог, ЛОР (Оториноларинголог), Педиатр, Терапевт)Муратова Наталья Сергеевна (Врач общей практики, Диетолог)Мухорин Виктор Павлович (Нефролог)Наумов Алексей Алексеевич (Мануальный терапевт)Никитина Анна Алексеевна (Окулист (Офтальмолог))Никишин Андрей Александрович (Психиатр, Психолог, Психотерапевт)Ольга Викторовна (Невролог, Неонатолог, Педиатр, Реабилитолог, Терапевт)Омаров Дадаш Халипаевич (Стоматолог-хирург)Павлова Мария Игоревна (Стоматолог, Стоматолог-хирург, Челюстно-лицевой хирург)Панигрибко Сергей Леонидович (Венеролог, Дерматолог, Косметолог, Массажист, Миколог)Пантелеева Кристина Алексеевна (Невролог)Пастель Владимир Борисович (Ортопед, Ревматолог, Травматолог, Хирург)Паунок Анатолий Анатольевич (Андролог, Уролог)Першина Наталия Сергеевна (Невролог)Пикульская Вита Григорьевна (Терапевт)Прокофьева Анастасия Михайловна (ЛОР (Оториноларинголог))Прохоров Иван Алексеевич (Нейрохирург, Хирург)Пушкарев Александр Вольдемарович (Гинеколог, Психотерапевт, Реабилитолог, Репродуктолог (ЭКО), Эндокринолог)Пыстогов Андрей Сергеевич (Терапевт, Эндокринолог)Пьянцева Екатерина Вячеславна (Педиатр)Радевич Игорь Тадеушевич (Андролог, Венеролог, Сексолог, Уролог)Сагоненко Дмитрий Алексеевич (Окулист (Офтальмолог))Сапрыкина Ольга Александровна (Невролог)Свечникова Анастасия Евгеньевна (Стоматолог, Стоматолог детский, Стоматолог-ортопед, Стоматолог-терапевт, Стоматолог-хирург)Семений Александр Тимофеевич (Врач общей практики, Реабилитолог, Терапевт)Сергейчик Никита Сергеевич (Анестезиолог, Гомеопат)Сидорова Людмила Александровна (Врач функциональной диагностики, Психиатр)Силуянова Валерия Викторовна (Акушер, Врач ультразвуковой диагностики, Гинеколог)Соболь Андрей Аркадьевич (Кардиолог, Нарколог, Невролог, Психиатр, Психотерапевт)Солдатов Вадим Александрович (Невролог)Сошникова Наталия Владимировна (Эндокринолог)Степанова Татьяна Владимировна (ЛОР (Оториноларинголог))Степашкина Анастасия Сергеевна (Гематолог, Пульмонолог, Терапевт)Сурова Лидия (Гирудотерапевт, Невролог, Терапевт)Суханова Оксана Александровна (Клинический фармаколог, Психолог)Сухих Данил Витальевич (Психиатр)Тимченко Алла Владимировна (Дерматолог, Косметолог)Тихомиров Сергей Евгеньевич (Нейрохирург)Тумарец Кирилл Михайлович (Врач лечебной физкультуры, Врач спортивной медицины, Кинезитерапевт, Реабилитолог, Физиотерапевт)Турлыбекова Венера Равильевна (Врач общей практики, Педиатр)Устимова Вера Николаевна (Гематолог, Терапевт, Трансфузиолог)Фатеева Анастасия Александровна (Гастроэнтеролог, Диетолог, Психотерапевт, Эндокринолог)Федотова Татьяна Владимировна (Врач ультразвуковой диагностики, Гематолог, Терапевт)Фомина Ольга Владимировна (Гематолог, Маммолог, Нарколог, Онколог)Фоминов Олег Эдуардович (Сексолог)Фоминов Олег Эдуардович (Сексолог)Фурманова Елена Александровна (Аллерголог, Иммунолог, Инфекционист, Педиатр)Хасанов Эльзар Халитович (Андролог, Врач ультразвуковой диагностики, Онколог, Уролог, Хирург)Хасанова Гульнара Сунагатулловна (Акушер, Врач ультразвуковой диагностики)Чупанова Аида (Акушер, Гинеколог)Чупанова Аида Идаятовна (Акушер, Гинеколог, Репродуктолог (ЭКО))Швайликова Инна Евненьевна (Окулист (Офтальмолог))Шибанова Мария Александровна (Нефролог, Терапевт)Щепетова Ольга Александровна (Терапевт)Юдина Марина Михайловна (Аллерголог, Дерматолог, Косметолог, Трихолог)Ягудин Денар Лукманович (ЛОР (Оториноларинголог))Ярвела Марианна Юрьевна (Психолог)

Описание проблемы:

Пол: —укажите пол—ЖенщинаМужчина

Возраст:

Категория 18+: Обычный18+

Цервицит: причины, диагностика, лечение | «Клиника семейного здоровья Медэксперт» Белгород

Диагноз цервицит – крайне неприятная новость. Представляет собой заболевание матки. Вызывает неприятные симптомы, носит неуклонно прогрессирующий характер, неблагоприятно влияет на репродуктивную систему женского организма. Без должного лечения проблема только усугубляется – патологический процесс нередко распространяется на соседние ткани и органы, способствует развитию диспластических изменений шейки матки, способен послужить пусковым механизмом для возникновения ракового заболевания.

Что такое цервицит

В структуре гинекологической заболеваемости цервициты занимают значительное место. Данным термином обозначают воспаление шейки матки. Этот нижний сегмент женского детородного органа действует как барьер, предупреждая попадание патогенных микроорганизмов из внешней среды во внутреннюю полость. Сбой защитных функций эпителия обуславливает проникновение бактерий, вирусов, возникновение воспалительного процесса. Очаг может быть сосредоточен во влагалищном сегменте или мигрировать на ближайшие области. Практика показывает, что изолированно цервицит протекает редко.

Ввиду того, что органы мочеполовой системы и влагалище образуют единую биосистему, ему нередко сопутствует уретрит, вагинит, вульвит и пр.

Цервицит регистрируется преимущественно у женщин репродуктивного возраста.

Виды цервицита

Цервицит классифицируют по площади распространения. Если воспаление локализовано исключительно в ограниченной зоне, то говорят об очаговом цервиците. Если же оно распространилось по всей поверхности слизистых, то о диффузном типе.

В зависимости от того, какие участки поражены, различают 2 разновидности:

  • Экзоцервицит – патологический процесс охватывает влагалищную часть шейки матки.
  • Эндоцервицит – воспалена слизистая цервикального канала, а в последующем строма эндометрия.

Почему начинается цервицит

Причины разные. По этиологии цервициты разделяют на 2 категории:

  • специфические – вызваны возбудителями ИППП. К передающимся половым путем относится хламидийная, гонококковая инфекция, трихомониаз, генитальный герпес. На их фоне возникает гнойный цервицит;
  • неспецифические – развились под действием условно-патогенных факторов (стафило- и стрептококки, микоплазмы, эшерихиоз), гормональных нарушений, а также в результате дисбактериоза влагалища, ослабления организма, использования контрацептивов, травмы при родах, аборте и пр.

Симптомы

Цервициты часто протекают бессимптомно. О его развитии могут свидетельствовать:

  • межменструальные вагинальные кровотечения;
  • ощущение дискомфорта, зуда во влагалище;
  • ноющая боль в малом тазу;
  • выделения слизистого характера – от прозрачных, зеленоватых со зловонным запахом до гнойных желтых;
  • ложные позывы к мочеиспусканию;
  • болезненное половое сношение.

На фоне длительного течения возникает хронический цервицит. Его характерные признаки:

  • скудные или умеренные выделения;
  • незначительные боли, в т.ч. после полового контакта;
  • посткоитальные кровотечения.

Наиболее опасные осложнения

Затяжной хронический цервицит чреват:

  • утолщением или истончением слизистого слоя;
  • появлением эрозии;
  • распространением инфекции с переходом в верхние отделы половых путей;
  • возникновением аднексита;
  • риском инфицирования плода, невынашиванием беременности;
  • раком шейки матки;
  • бесплодием.

Диагностика

Ввиду скудной симптоматики цервицит в большинстве случаев диагностируется лишь при плановом обследовании. При осмотре в зеркалах гинеколог может увидеть гиперемию и отечность тканей, наличие экссудата, изменения в эпителии, кровоточивость.

Для уточнения диагноза потребуется комплексное обследование, включающее:

  • кольпоскопию – дает увеличенное изображение поверхности, показывает все дефекты слизистой;
  • мазок на флору – определение вида, количества бактерий, наличия и степени выраженности воспаления;
  • онкоцитологию (мазок) – обнаружение раковых наростов;
  • бактериологическое исследование – проверка на наличие возбудителя инфекции, чувствительности к антибиотикам;
  • цитограмму (соскоб) – изучение клеточной структуры, выявление патологии в шеечных тканях;
  • ПЦР-анализ – выявление скрытой инфекции с определением концентрации возбудителя.

В качестве дополнительных методов могут назначить биопсию, общий анализ мочи, УЗИ органов малого таза, тест на ВИЧ.

Лечение цервицита

План лечения составляется после получения точной картины всех процессов и с учетом вида возбудителя, стадии цервицита, сопутствующих патологий. Устранение первопричины (возбудителя) и провоцирующих факторов является первостепенной задачей. Второй этап – восстановление нарушенной бактериальной среды влагалища.

Основной комплекс мер:

  • Медикаментозная терапия – антибиотики, противопротозойные препараты, противовирусные, антимикотики. Для нормализации микрофлоры назначают Вагилак, Ацилакт, Лактобактерин. При менопаузе показаны гормональные препараты.
  • Лечебно-гигиенические спринцевания для санации половых путей.
  • Физиотерапевтические процедуры – электрофорез с цинком, дарсонвализация.
  • Хирургическое лечение – лазерное прижигание, диатермокоагуляция, криохирургия.

Внимание! Не занимайтесь самолечением. Для эффективного лечения необходимо пройти диагностику и посетить врача.

Виды диагностики и лечения в нашем медицинском центре

Для получения консультации или записи звоните или оставьте заявку через форму “Заказать звонок”, и мы вам перезвоним.

+7(4722) 250-222

Медиатор воспаления с ультранизким молекулярным весом гиалуронан вызывает некроз В-лейкозных клеток-предшественников с высокой поверхностной экспрессией CD44 KOCL69; две

MLL-AF9 : KOPB26, YACL95; три MLL-ENL : KOPN1, KOCL33, KOCL51), 10 В-предшественников ALL клеточных линий (четыре филадельфийские хромосомы-положительные: KOPN30bi, KOPN55bi, KOPN66bi, четыре TCF3-PBX1 положительные: KOPN34, KOPN36, KOPN54, YAMN92; два ETV6-RUNX1 : KOPN41, REH) и 5 ​​клеточных линий T-ALL (JURKAT MOLT4, KOPTK1, KOPT5 и KOPT11), которые были описаны ранее, 4 использовали для изучения поверхностной экспрессии CD44 и поглощения тимидина.Линия В-лимфоидных клеток YAMB9, трансформированная EBV, также использовалась для сравнения. Клеточная линия KOPB26 (слитый транскрипт MLL-AF9 ) с очень высокой поверхностной экспрессией CD44 широко использовалась на протяжении всего исследования. Шесть образцов первичных клеток ALL (>90% бластов), которые хранились в жидком азоте, размораживали и использовали для некоторых экспериментов.

Установление клеточной линии, экспрессирующей CD44 на очень низком уровне, путем целенаправленного редактирования генома Cas9) система

16 в соответствии с руководством к набору GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США).Направляющие РНК для экзона 2
CD44 человека (смысл: 5′-CTACAGCATCTCTCGGACGGgtttt-3′ и антисмысл: 5′-CCGTCCGAGAGATGCTGTAGcggtg-3′) встраивали в вектор нуклеазы CRISPR CD4 и трансфицировали в исходную клеточную линию с помощью Neon Transfection System. (Технологии жизни). CD4-положительные клетки собирали с помощью CD4-микрогранул (Miltenyi Biotec, Auburn, CA, USA) через 3 дня после трансфекции, а затем CD44-отрицательные клетки отбирали с помощью мышиного моноклонального антитела против CD44 (mAb; Immunotech, Vaudreuil-Dorjon, Квебек, Канада) и иммуномагнитные шарики, конъюгированные с кроличьими антителами против мышиных антител.Экстрагированную геномную ДНК из этой клеточной линии амплифицировали с помощью ПЦР с использованием праймеров 5′-TAACCTGCCGCTTTGCAGGTGTATT-3′ (смысловой) и 5′-GCCATTGTGGGCAAGGTGCTATTGA-3′ (антисмысловой) для человека CD44, экзон 2 , и продукты ПЦР вставляли в вектор pGEM-T Easy (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) и вводили в бактерии. Встроенные фрагменты, полученные из отдельных ампликонов ПЦР в каждом клоне, секвенировали методом Сэнгера.

Реагенты и антитела

HMW-HA (10 3 –10 4  kD) и ULMW-HA (4–8 kD) были приобретены у R&D Systems (Миннеаполис, Миннесота, США).Рекомбинантный HMGB1 человека был приобретен у Prospec (Восточный Брансуик, Нью-Джерси, США). Детектор АФК CM-H 2 DCFDA (диацетат 5-хлорметил-2’7′-дихлоргидрофлуоресцеина) был приобретен у Life Technologies. Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK (Z-VAD-FMK), метилтиогидантоин-DL-триптофан (некростатин-1) и 3-MA были приобретены у Enzyme Systems Products (Livemore, CA, USA), Enzo Life Sciences (Фармингдейл, штат Нью-Йорк, США) и Calbiochem (Ла-Хойя, Калифорния, США) соответственно. Мышиное FITC-конъюгированное моноклональное антитело к CD44 (mAb) (J.173, IgG1) был приобретен у Beckman Coulter (Бреа, Калифорния, США). PE-конъюгированные кроличьи антитела против расщепленной каспазы-3 и mAb против HMGB1 были приобретены у BD Biosciences (Сан-Хосе, Калифорния, США). Другие mAb против p44/p42 MAPK, фосфорилированная MAPK (Thr 202 /Tyr 204 ), Akt, фосфорилированная Akt (Ser 473 ), p38, фосфорилированная p38 (Thr 180 /Tyr 19020) и фосфорилированный JNK1 (Thy 183 /Tyr 185 ) были приобретены у Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA).Кроличье антитело против RHAMM (рецептор HA-опосредованной подвижности, CD168) было приобретено у Lifespan Biosciences (Сиэтл, Вашингтон, США). Крысиные mAb, специфически распознающие человеческий CD44v9 (клон RV3), были получены от Cosmo Bio (Токио, Япония).

Анализ поглощения тимидина

Клетки лейкемии (2,5–5,0 × 10 4 на лунку) культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 7,5% фетальной телячьей сыворотки (FCS) в 96-луночном плоскодонном культуральном планшете в трех экземплярах. в присутствии или в отсутствие различных концентраций ГК при 37 °C в течение указанных периодов времени и измеряли поглощение 5 ч-[ 3 H]-тимидина.% ингибирования поглощения тимидина рассчитывали следующим образом; {1–[(имп/мин обработанных клеток)/(имп/мин необработанных клеток)]} × 100. % поглощения тимидина определяли как [(имп/мин обработанных клеток)/(имп/мин необработанных клеток)] × 100. В некоторых экспериментах , клетки культивировали с одним из нескольких реагентов или без него.

Тест исключения красителя

Клетки лейкемии (5 × 10 4 на лунку) культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 7,5% FCS в 96-луночном плоскодонном культуральном планшете в присутствии или в отсутствие ULMW-HA (2.5 мг/мл) при 37 °C в течение указанных периодов времени. Количество живых и мертвых клеток подсчитывали методом исключения красителя и рассчитывали их жизнеспособность (%).

Анализ клеточного цикла

Лейкозные клетки (5 × 10 4 на лунку) культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 7,5% FCS в присутствии или в отсутствие ULMW-HA (2,5 мг/мл) в течение 2–4 дней. Эти клетки промывали и суспендировали в 0,1% Triton X-PBS, а затем обрабатывали РНКазой при 37°С в течение 15 мин. Клетки, обработанные PI (10  мк мкг/мл), анализировали с помощью проточного цитометра (FACSCalibur, BD Biosciences).

Проточный цитометрический анализ

Лейкозные клетки окрашивали прямо или косвенно контрольным нормальным IgG или специфическим антителом, таким как анти-CD44 и анти-CD44v9. В некоторых экспериментах лейкозные клетки (5 × 10 4 на лунку) культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 7,5% FCS в присутствии или в отсутствие УНМ-ГК (2,5 мг/мл) в течение 2–4 дней. Затем клетки собирали и дважды окрашивали FITC-конъюгированным аннексином V и PI (1  мк г) в течение 15  мин в темноте.Десять тысяч событий были проанализированы с использованием проточного цитометра.

Измерение высокоподвижного белка группы B1 (HMGB1) в культуральной среде HA (2,5 мг/мл) до 4 дней, а уровень HMGB1 в культуральном супернатанте измеряли с помощью набора ELISA от Shinotest (Сагамихара, Канагава, Япония) на 2, 3 и 4 дни. Культуральный супернатант клеток после нагревание при 55 °C в течение 3 мин использовали в качестве положительного контроля.

Внутриклеточное окрашивание HMGB1

Лейкозные клетки (2 × 10 4 на лунку) культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 7,5% FCS в присутствии или в отсутствие ULMW-HA (2,5 мг/мл) в течение 3 дней . Затем клетки фиксировали и пермеабилизировали с помощью PBS, содержащего 4% параформальдегида и сапонина (раствор Cytofix/Cytoperm, BD Biosciences), и окрашивали моноклональными антителами против HMGB1 или DAP1 (4′,6-диамидино-2-фенилиндол; Доджиндо, Кумамото, Япония). ). Клетки запечатывали в монтажном агенте (Fluoromount/Plus, Diagnostic BioSystems, Плезантон, Калифорния, США) и наблюдали с помощью фазово-контрастного флуоресцентного микроскопа (BZ-9000, Keyence, Осака, Япония).

ТЭМ-исследование гибели клеток

Лейкозные клетки (5 × 10 4 на лунку) культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 7,5% FCS в присутствии или в отсутствие ULMW-HA (2,5 мг/мл) в течение 3 дней. Клетки фиксировали 2,5% глутаровым альдегидом и 1% четырехокисью осмия, обезвоживали в последовательностях этанола и, наконец, заливали эпоксидной смолой Epon 812. Ультратонкие срезы при 70–80 нм помещали на медные сетки и дважды окрашивали уранилацетатом и цитратом свинца.Наконец, их наблюдали при ускоряющем напряжении 80 кВ в ПЭМ (H-7500, Hitachi, Токио, Япония). Анализировали пятьсот клеток, выбранных случайным образом.

Вестерн-блот анализ

Лизаты лейкозных клеток разделяли на SDS-полиакриламидном геле и переносили на нитроцеллюлозные мембраны, как сообщалось ранее, 4 , которые инкубировали с различными первичными антителами при 4 °C в течение ночи, а затем с пероксидазой хрена- конъюгированное вторичное антитело при комнатной температуре в течение 1 часа.Полосы визуализировали с использованием набора для улучшенной хемилюминесценции (Amersham, Buckinghamshire, UK).

Продукция АФК

CM-H 2 DCFDA (5  мк М), внутриклеточный детектор АФК, абсорбировали в лейкозные клетки при хорошо) культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 7,5% FCS в присутствии или в отсутствие ULMW-HA (2,5 мг/мл) в течение 5 дней. Изменения продукции внутриклеточных АФК анализировали методом проточной цитометрии.

Анализ сплайс-вариантов CD44

Конкурентный ПЦР-анализ сплайс-вариантов CD44 с обратной транскрипцией в клеточных линиях ALL человека проводили с использованием ДНК-полимеразы Takara Premix Taq (Takara Bio, Shiga, Japan), а продукты ПЦР анализировали. фракционируют электрофорезом в агарозном геле. Использовали следующие наборы праймеров человека (прямой и обратный соответственно): CD44, 5′-TCCCAGACGAAGACAGTCCCTGGAT-3′ и 5′-CACTGGGGTGGAATGTGTCTTGGTC-3′; и β -актин, 5′-AGGCACCAGGGCGTGAT-3′ и 5′-GCCCACATAGGAATCCTTCTGA-3′, как сообщалось ранее. 17

Статистика

Непарный t -критерий использовали для сравнения различий в поглощении [ 3 H]-тимидина и в уровне HMGB1. Значение P <0,05 считалось значимым.

Границы | Градуированная экспрессия RhoA GTPase в Treg-клетках отличает опухолевый иммунитет от аутоиммунитета

Введение

После созревания в тимусе Т-лимфоциты мигрируют в периферические лимфоидные органы, где они сохраняются в виде наивных Т-клеток.После распознавания антигена наивные Т-клетки дифференцируются в эффекторные Т-клетки, такие как CD4 + IFN-γ + T-хелперы 1 (Th2), CD4 + IL-17 + Th27-клетки, CD4 + IL -4 + Th3-клеток и CD8 + IFN-γ + цитотоксических Т-клеток (ЦТЛ) (1). Эффекторные Т-клетки играют важную роль в предотвращении инфекции патогенами, а также в развитии опухоли (2). Однако аномальные ответы эффекторных Т-клеток могут вызывать аутоиммунные заболевания (3).

Регуляторные Т-клетки (Treg), которые также вырабатываются в тимусе, поддерживают иммунную толерантность, прежде всего, путем ингибирования эффекторных Т-клеток (4). Дефекты развития, гомеостаза и/или функции Treg-клеток могут привести к аутоиммунитету (5, 6). В микроокружении опухоли (TME) клетки Treg обеспечивают важный иммуносупрессивный механизм, способствующий росту опухоли (7). Таким образом, истощение клеток Treg может принести пользу больным раком (8). Однако системное удаление клеток Treg, вероятно, вызывает аутоиммунные реакции (8).Недавно было высказано предположение, что рак можно лечить путем индукции пластичности Treg-клеток, что в целом отражается потерей стабильной экспрессии Foxp3, сигнатурного фактора транскрипции Treg-клеток, перепрограммированием эффекторных Т-клеток и/или нарушением функции Treg-клеток. (7, 9–11).

RhoA принадлежит малым ГТФазам семейства Rho суперсемейства Ras. Как и другие GTPases, RhoA активируется при связывании с GTP и инактивируется при связывании с GDP. Активность RhoA также регулируется пренилированием на его С-конце (12).Хорошо известно, что RhoA играет важную роль в организации актинового цитоскелета, клеточной адгезии, миграции, пролиферации и выживании (13-17). В Т-клетках RhoA модулирует поляризацию Т-клеток, развитие и адгезию тимоцитов, а также выход из тимуса (18-25). Было показано, что пренилирование RhoA с помощью PGGT1B контролирует колит, опосредованный клетками Th27 (26). Условным нокаутом RhoA в pan T клетках мы недавно показали, что RhoA необходим для дифференцировки клеток Th3 и Th27 (27, 28). Интересно, что хотя делеция RhoA подавляет дифференцировку клеток Th3 и Th27, она не влияет на дифференцировку клеток Th2 (27).Кроме того, кажется, что делеция RhoA в пан-Т-клетках не нарушает развитие и гомеостаз Treg-клеток (28). Тем не менее, остается неясным, играет ли RhoA внутриклеточную роль в клетках Treg. В этом исследовании мы создали мышей с нокаутом RhoA , специфичных для клеток Treg. Мы обнаружили, что гомозиготная делеция RhoA в клетках Treg снижает частоту периферических клеток Treg, индуцирует пластичность клеток Treg и вызывает ранние смертельные воспалительные заболевания, что позволяет предположить, что RhoA важен для поддержания гомеостаза и приспособленности клеток Treg, а также для контроля аутоиммунитета.Напротив, гетерозиготная делеция RhoA в клетках Treg не влияла на частоту клеток Treg и не вызывала воспалительных заболеваний. Однако гетерозиготность RhoA также индуцировала пластичность клеток Treg. Важно отметить, что гетерозиготная делеция RhoA активировала противоопухолевый Т-клеточный иммунитет. Эти данные свидетельствуют о том, что градуированная экспрессия RhoA в клетках Treg отличает опухолевый иммунитет от аутоиммунитета.

Материалы и методы

Мыши

Мыши Foxp3 YFP-Cre были приобретены в лабораториях Джексона (кат. № 016959, RRID: IMSR_JAX: 016959). RhoA Flox/Flox мышей получали, как описано ранее (29). RhoA Flox / Flox мышей скрещивают с Foxp3 YFP-Cre мышей в нашем виварии для генерации RhoA Flox / + FOXP3 YFP-Cre , RhoA Flox / Flox FOXP3 YFP-Cre и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre/+ мышей. Все мыши содержались в условиях, свободных от патогенов, в виварии Исследовательского фонда детской больницы Цинциннати в соответствии с протоколами Комитета по уходу и использованию животных Медицинского центра детской больницы Цинциннати.

Линии опухолевых клеток

Мышиная аденокарцинома толстой кишки Линия опухолевых клеток MC38, меченная GFP, была любезно предоставлена ​​доктором Джозефом Палумбо в Медицинском центре детской больницы Цинциннати. Линию опухолевых клеток выращивали в DMEM с 10% фетальной телячьей сывороткой (FCS). Регулярные тесты на микоплазму проводили на всех клетках, поддерживаемых в культуре.

Исследования роста опухоли

Восемьсот тысяч опухолевых клеток МС38 вводили подкожно в 100 мкл PBS в один из боков указанных мышей.Объемы опухоли измеряли каждые два-три дня после того, как опухоль становилась видимой, и рассчитывали как V = (длина × ширина 2 ) x 0,50.

Приготовление суспензий одиночных клеток, окрашивание антител и проточная цитометрия

Селезенки растирали с помощью поршня шприца и пропускали через фильтр для клеток 40 мкм с последующей обработкой буфером для лизиса эритроцитов (кат. № 555899, BD Biosciences). Опухоли измельчали ​​на мелкие фрагменты и обрабатывали 1,5 мг/мл коллагеназы IV (Cat # C5138, Sigma) в течение 30 мин при 37°C при перемешивании.Расщепленную опухолевую ткань затем фильтровали через сито с ячейками 70 мкм и центрифугировали при 1500 об/мин при 4°С в течение 5 мин. Осадки растворяли в 8 мл 40% перколла и медленно наслаивали на 5 мл 80% перколла в 15 мл фальконовскую пробирку. Затем пробирку falcon центрифугировали при 2000 об/мин при 4°C в течение 20 мин, останавливая без торможения. Клетки на границе раздела между 40% перколла и 80% перколла осторожно удаляли и дважды промывали полной средой для Т-клеток RPMI. Клетки из селезенки и опухолей повторно стимулировали ФМА и иономицином в течение 5 часов в присутствии пробы Гольджи в течение последних 4 часов, а затем подвергали окрашиванию антителами.Белки клеточной поверхности окрашивали в течение 20 мин при 4°С следующими антителами: PD-1 (кат. № 12-9985-81, клон J43, RRID: AB_466294, eBioscience), GITR (кат. № 25-5874-80, клон DTA-1, RRID: AB_10544396, eBioscience), CTLA-4 (кат. № 12-1522-82, клон UC10-4B9, RRID: AB_465879, eBioscience), CD4 (кат. № 48-0042-82, клон RM4-5, RRID: AB_1272194, eBioscience), CD8α (кат. № 25-0081-82, клон 53-6.7, RRID: AB_469584, eBioscience), CD62L (кат. № 12-0621-82, клон MEL-14, RRID: AB_465721, eBioscience) и CD44 (кат. № 17-0441-82, клон IM7, RRID: AB_469390, eBioscience).Внутриклеточные белки окрашивали в течение 60 минут при комнатной температуре после пермеабилизации и фиксации с помощью BD Cytofix/Cytoperm Plus (кат. № 555028, BD Biosciences) с использованием следующих антител: IL-4 (кат. № 12-7041-82, клон 11B11, RRID: AB_466156, eBioscience), IL-17A (кат. № 559502, клон TC11-18h20, RRID: AB_397256, BD Pharmingen), IFN-γ (кат. № 505810, 505826, клон XMG1.2, RRID: AB_315404, RRID2: 7BiogenLed 702, RRID: 7AB_02, RRID: 7 ), Foxp3 (кат. № 17-5773-82, клон FJK-16s, vRRID: AB_469457, eBioscience), RORγT (кат. № 12-6988-82, клон AFKJS-9, RRID: AB_1834470, eBioscience), T-bet ( № по каталогу 45-5825-82, клон 4B10, RRID: AB_953657, eBioscience) и GATA-3 (кат. № 25-9966-42, клон TWAJ, RRID: AB_2573568, eBioscience).Окрашенные клетки анализировали с помощью проточных цитометров BD LSRII, FACSCanto или LSRFortessa. Данные были проанализированы с помощью BD FACSDiva.

Для анализа клеточного апоптоза свежевыделенные спленоциты были иммуномечены анти-CD4, анти-Foxp3 и антиактивной каспазой 3 (кат. № 559341, клон C92-605, RRID: AB_397234, BD Pharmingen) с последующей проточной цитометрией.

Для анализа пролиферации клеток мышам внутрибрюшинно вводили 500 мг 5-бром-29-дезоксиуридина (BrdU). Через два часа после инъекции спленоциты выделяли и иммунизировали антителами против CD4 и против Foxp3, а включение BrdU анализировали с помощью набора BrdU Flow в соответствии с протоколом производителя (кат. № 552598, BD Pharmingen).

Для анализа супрессивной активности клеток in vitro Treg-клетки селезенки получали путем магнитно-активированной сортировки клеток CD4 + T-клеток (кат. № 130-117-043, Miltenyi) с последующей сортировкой CD4 проточной цитометрией. + YFP + Treg клетки. Очищенные клетки Treg активировали анти-CD3/CD28 Dynabeads Cat # 11456D, ThermoFisher) и IL-2 в течение 24 часов. Наивные Т-клетки CD4 + получали с использованием набора для выделения наивных Т-клеток (Cat # 130-104-453, Miltenyi) и метили CFSE (5 мкМ).Предварительно активированные Treg-клетки смешивали с мечеными CFSE Т-клетками в соотношении 1:1 и культивировали в течение 96 часов в присутствии анти-CD3/CD28 Dynabeads. Разведение CFSE исследовали с помощью проточной цитометрии.

Гистопатологический анализ

Срезы тканей фиксировали в 4% растворе формальдегида, заливали в парафин и окрашивали H&E. Срезы анализировали с помощью световой микроскопии с помощью Fisher Scientific Moticam при 20-кратном увеличении при комнатной температуре. Изображения были получены с помощью программного обеспечения Motic Images Plus 2.0 (30).

Статистический анализ

Выживаемость мышей анализировали с помощью логарифмического критерия (Мантела-Кокса). Рост опухоли анализировали с помощью двустороннего дисперсионного анализа. Все остальные статистические данные были получены с помощью двустороннего t-критерия Стьюдента. Данные выражали как среднее значение ± стандартное отклонение. p < 0,05 считалось значимым.

Результатов

Гомозиготные

RhoA Удаление в Treg клетках вызывает системные воспалительные расстройства

RhoA Flox / Flox Foxp3 YFP-Cre мышея, несущий Treg клетки специфических гомозиготные RhoA удалений были небольшим по размеру, не хватало подвижность, сутулость и изъязвление кожи (данные не показаны).Мыши умерли в течение примерно 3-5 недель после рождения (рис. 1А). Кроме того, у мышей наблюдалась лимфаденопатия (рис. 1В) и массивная лейкоцитарная инфильтрация и/или искаженная архитектура в различных органах, особенно в толстой кишке, почках и легких (рис. 1С). В соответствии с этими фенотипами мыши RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre содержали больше эффекторных Т-клеток памяти (CD62L CD44 + ) в своем компартменте CD4 + + + и CD7010 + Рисунок 1D).Кроме того, у мышей наблюдалось увеличение эффекторных Т-клеток, включая клетки Th27, продуцирующие IL-17, клетки Th2, продуцирующие IFN-γ, и клетки Th3, продуцирующие IL-4 (рис. 1E). Соответственно, RORγT, T-bet и GATA3, сигнатурные транскрипционные факторы для клеток Th27, Th2 и Th3, соответственно, были повышены в клетках CD4 + у мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre (рис. 1F). ). Эти данные свидетельствуют о том, что гомозиготное истощение RhoA в клетках Treg приводит к системным аутоиммунным ответам.

Рисунок 1 Гомозиготная делеция RhoA в клетках Treg приводит к ранним фатальным спонтанным воспалительным заболеваниям. (A) Результат выживания мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre . Результаты анализировали с помощью логарифмического рангового критерия (Мантела-Кокса) и выражали в виде кривых выживаемости Каплана-Мейера. (B) Изображение лимфаденопатии у мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre .Показаны паховые лимфатические узлы. (C) Изображения окрашивания H&E указанных органов у мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre (исходное увеличение X 400). (D) Слева репрезентативная проточная цитограмма окрашивания CD44 и CD62L в клетках CD4 + и CD8 + из селезенки RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Foxp Flox/1lox 900Flox +/+ Foxp3 мышей YFP-Cre .Цифры указывают процентное содержание клеток CD44 + , CD44 + , CD62L + и CD62L + . Справа: среднее процентное содержание клеток CD44 + , CD44 + , CD62L + и CD62L + . (E) Слева репрезентативная проточная цитограмма окрашивания IL-17, IFN-γ и IL-4 в CD4 + Foxp3 клеток селезенки RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre .Цифры указывают процентное содержание клеток IL-17 + , IFN-γ + и IL-4 + . Справа: средний процент клеток IL-17 + , IFN-γ + и IL-4 + . (F) Слева репрезентативная проточная цитограмма окрашивания RORγT, T-bet и GATA3 в CD4 + Foxp3 клетки селезенки RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/ Мыши Flox Foxp3 YFP-Cre . Цифры указывают процентное содержание клеток RORγT + , T-bet + и GATA3 + .Справа, средний процент клеток RORγT + , T-bet + и GATA3 + . (A, D–F) n = 3–5 мышей. Данные являются репрезентативными для двух независимых экспериментов. Столбики погрешностей указывают SD. *р < 0,05, **р < 0,01. (B, C) Данные репрезентативны для 3 мышей.

Гомозиготные

RhoA Делеция в Treg-клетках нарушает гомеостаз Treg-клеток и индуцирует пластичность Treg-клеток .Действительно, количество клеток Treg было значительно снижено у мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre (рис. 2А). Потеря клеток Treg была связана со снижением пролиферации и повышенным апоптозом, что было выявлено у мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre с меньшим количеством BrdU + и более активными клетками Treg, экспрессирующими каспазу-3, чем у мышей
. у мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre (рис. 2B, C). Клетки Treg с гомозиготным истощением RhoA стали пластичными, поскольку они показали снижение экспрессии Foxp3 (рис. 2D) и повышенное перепрограммирование эффекторных Т-клеток, то есть большее количество клеток Treg, продуцирующих эффекторные Т-клеточные цитокины IL-17, IFN-γ и IL-. 4 (рис. 2E) и факторы транскрипции RORγT, T-bet и GATA3 (рис. 2F).Более того, клетки RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre Treg активировали свои функциональные маркеры CTLA-4, GITR и PD-1 (рис. 2G).

Рисунок 2 Гомозиготная Делеция RhoA в клетках Treg ослабляет гомеостаз клеток Treg и индуцирует пластичность клеток Treg. (A) Слева, репрезентативная проточная цитограмма окрашивания Foxp3 в клетках CD4 + из селезенки мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP08-Cre 9.Цифры указывают процент CD4 + Foxp3 + клеток Treg. Среднее, среднее процентное содержание клеток CD4 + Foxp3 + Treg. Справа, среднее количество клеток CD4 + Foxp3 + Treg. (B) Пролиферация клеток Treg. Показан процент клеток CD4 + Foxp3 + Treg, включенных с BrdU. (C) Апоптоз клеток Treg. Показаны уровни экспрессии (MFI: средняя интенсивность флуоресценции) активной каспазы 3 в клетках CD4 + Foxp3 + Treg. (D) Уровни экспрессии Foxp3 в клетках Treg. (E) Слева, репрезентативная проточная цитограмма окрашивания IL-17, IFN-γ и IL-4 в клетках CD4 + Foxp3 + Treg. Цифры показывают процентное содержание клеток IL-17 + , IFN-γ + и IL-4 + Treg. Справа: среднее процентное содержание клеток IL-17 + , IFN-γ + и IL-4 + Treg. (F) Слева, репрезентативная проточная цитограмма окрашивания RORγT, T-bet и GATA3 в клетках CD4 + Foxp3 + Treg.Цифры обозначают процент клеток RORγT + , T-bet + и GATA3 + Treg. Справа, средний процент клеток RORγT + , T-bet + и GATA3 + Treg. (G) Слева, репрезентативная гистограмма уровней экспрессии CTLA-4, GITR и PD-1 в клетках CD4 + Foxp3 + Treg. Цифры над графиками обозначают MFI. Справа, средний MFI CTLA-4, GITR и PD-1 в клетках CD4 + Foxp3 + Treg.n = 3 мыши. Данные являются репрезентативными для двух независимых экспериментов. Столбики погрешностей указывают SD. **р < 0,01.

Известно, что воспаление может индуцировать пластичность клеток Treg (31). В этом контексте пластичность клеток RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre Treg можно объяснить воспалительными заболеваниями у мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre . Чтобы проверить это, мы проанализировали RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre /+ самок мышей, гетерозиготных по Foxp3 YFP-Cre и не проявляющих явного воспаления (данные не показаны).Из-за сцепленной с Х-хромосомой природы и случайной инактивации Х-хромосомы трансгеном Foxp3 YFP-Cre ожидается, что самки мышей Foxp3 YFP-Cre/+ сохранят ~50% Foxp3 + YFP . + клеток Treg и ~50% клеток Foxp3 + YFP клеток Treg (30). В качестве подтверждения, RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre /+ самок мышей демонстрировали соотношение клеток Foxp3 + YFP + : Foxp3 8 901 YFP + 90 0,80:1 (рис. 3А).Тем не менее, соотношение FOXP3 + YFP + против FOXP3 + YFP в клетках RHOA FLOX /FLOX FOXP3 YFP -CRE / + 9008 MICE WASEDS / + 9008 MICE hID -CRE / + ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ . 1 (рис. 3А). Снижение количества клеток Foxp3 + YFP + у мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre /+ было связано со снижением пролиферации и усилением апоптоза (рис. 3В, С). Полученные результаты свидетельствуют о том, что RhoA-дефицитных Foxp3 + YFP + Treg клетки outcompeted с RhoA-опытными Foxp3 + YFP Treg клеток в RhoA Flox / Flox Foxp3 YFP-Cre / + мышей.Это можно объяснить повышенной пластичностью RhoA-дефицитных клеток Foxp3 + YFP + Treg, которые показали снижение экспрессии Foxp3 (рис. 3D) и повышение экспрессии эффекторных Т-клеточных цитокинов IFN-γ и IL-4 (рис. 3E). , по сравнению с RhoA-опытными клетками Foxp3 + YFP Treg от тех же мышей. Пластические клетки Treg могут быть нарушены в их супрессивной функции (11). В качестве поддержки пластиковые клетки Foxp3 + YFP + Treg от мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre/+ проявляли более низкую супрессивную активность в отношении пролиферации наивных Т-клеток по сравнению с таковой у мышей RhoA + 9177. /+ Foxp3 YFP-Cre /+ мышей (рис. 3F).Таким образом, пластичность RhoA-дефицитных Treg-клеток у невоспалительных RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre /+ самок мышей позволяет предположить, что пластичность RhoA-дефицитных Treg-клеток у воспалительных RhoA Flox /Flox Foxp3 YFP-Cre мышей вызвано не продолжающимся воспалением, а внутренним клеточным эффектом.

Рисунок 3. Клетки Treg, несущие гомозиготную делецию RhoA , пластичны и проигрывают клеткам Treg, несущим интактный RhoA, у самок мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre/+ . (A) Слева, репрезентативная проточная цитограмма клеток Foxp3 + YFP + и Foxp3 + YFP в клетках CD4 + Foxp3 + 9007 + Treg Rho 098 1 Aspleen Foxp3 YFP-Cre/+ и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre/+ самок мышей. Цифры показывают процентное содержание клеток Foxp3 + YFP + и Foxp3 + YFP . В середине номера клеток Foxp3 + YFP + и Foxp3 + YFP клеток.Справа: процентное соотношение клеток Foxp3 + YFP + к процентному содержанию клеток Foxp3 + YFP . (B) Foxp3 + YFP + Пролиферация клеток Treg. (C) Foxp3 + YFP + Апоптоз Treg-клеток. (D) Уровни экспрессии (MFI: средняя интенсивность флуоресценции) Foxp3 в клетках Foxp3 + YFP + и Foxp3 + YFP из селезенки RhoA YFP1 Flox/Flox-0 Cre/+ самок мышей. (E) Слева репрезентативная проточная цитограмма окрашивания IL-17, IFN-γ и IL-4 в CD4 + Foxp3 + YFP + и CD4 + Foxp3 + YFP клетки селезенки самок мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre/+ . Цифры указывают процентное содержание клеток IL-17 + , IFN-γ + и IL-4 + . Справа: средний процент клеток IL-17 + , IFN-γ + и IL-4 + . (F) In vitro Супрессивная активность Treg. Слева репрезентативная проточная цитограмма разведения CFSE в Т-клетках (респондеры). Цифры над воротами представляют собой процент клеток с низким уровнем CFSE, представляющих пролиферирующие Т-клетки. Справа, средний процент клеток с низким уровнем CFSE. Клетки Foxp3 + YFP + Treg получены методом проточной цитометрии клеток CD4 + YFP + из селезенки RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre/+/FloxA 900 Foxp3 YFP-Cre/+ самок мышей.Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение для 3 мышей (A–E) или тройных повторов (F) . Данные являются репрезентативными для двух независимых экспериментов. *р < 0,05, **р < 0,01.

Нарушение гомеостаза и пластичности RhoA-дефицитных Treg-клеток может быть результатом нарушения развития Treg-клеток в тимусе. В этом контексте мы проанализировали развитие тимоцитов у мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre .Мы обнаружили, что RhoA Flox / Flox Foxp3 YFP-Cre мышей показали сопоставимые частоты CD4 CD8 , CD4 + CD8 + , CD4 + CD8 , и CD4 CD8 + тимоцитов до мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre (рис. 4А). Клетки Treg тимуса также оставались неизменными у мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre (рис. 4B).Однако экспрессия Foxp3 в клетках Treg тимуса RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre подавлялась (рис. 4C). Аналогично RHOA FLOX/FLOX FOXP3 YFP -CRE мышей, RHOA FLOX/FLOX FOXP3 YFP -CRE /+ У самцов мышей имели INACT CD4 /+ У самцов мышей с использованием CD4 /+ . + CD8 + , CD4 + CD8 , CD4 CD8 + тимоциты (рис. 4D) и Treg-клетки тимуса (рис. 4E).Тем не менее, соотношение клеток Foxp3 + YFP + и клеток Foxp3 + YFP в тимусе RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre 900 было значительно снижено. (Рисунок 4F). В совокупности эти данные предполагают, что дефицит RhoA не влияет на явное развитие тимоцитов/клеток Treg тимуса, но индуцирует пластичность клеток Treg тимуса. Следовательно, оказывается, что измененный гомеостаз периферических Treg-клеток не связан с нарушением развития Treg-клеток в тимусе.Напротив, пластичность периферических Treg-клеток, по-видимому, унаследована от Treg-клеток тимуса.

Рисунок 4 Гомозиготная Делеция RhoA в клетках Treg не влияет на развитие клеток Treg в тимусе, но индуцирует пластичность клеток Treg тимуса. (A) Слева, репрезентативная проточная цитограмма окрашивания CD4 и CD8 в тимоцитах мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre . Цифры обозначают процентное содержание клеток CD4 , CD8 , CD4 + , CD8 + , CD4 + и CD8 + в соответствующем квадранте.Справа, средние проценты клеток CD4 , CD8 , CD4 + , CD8 + , CD4 + и CD8 + . (B) Слева, репрезентативная проточная цитограмма окрашивания Foxp3 в тимоцитах CD4 + мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre . Цифры указывают процент CD4 + Foxp3 + клеток тимуса Treg. Среднее, среднее процентное содержание CD4 + Foxp3 + Treg-клеток тимуса.Справа: количество клеток CD4 + Foxp3 + клеток Treg тимуса. (C) Уровни экспрессии (MFI: средняя интенсивность флуоресценции) Foxp3 в клетках Treg тимуса мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre . (D) Слева, репрезентативная проточная цитограмма окрашивания CD4 и CD8 в тимоцитах самок мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre/+ и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre/+ .Цифры обозначают процентное содержание клеток CD4 , CD8 , CD4 + , CD8 + , CD4 + и CD8 + в соответствующем квадранте. Справа, средние проценты клеток CD4 , CD8 , CD4 + , CD8 + , CD4 + и CD8 + . (E) Слева, репрезентативная проточная цитограмма окрашивания Foxp3 на CD4 + тимоцитов RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre/+ и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP9018/+ самка мышей.Цифры указывают процент CD4 + Foxp3 + клеток тимуса Treg. Справа, среднее процентное содержание клеток CD4 + Foxp3 + Treg тимуса. (F) Слева, репрезентативная проточная цитограмма FOXP3 + YFP + и FOXP3 + YFP в клетках CD4 + FOXP3 + THYMIC TREG CLERG OR RHO OR RHO ARGA . YFP-Cre/+ и RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre/+ самок мышей.Цифры показывают процентное содержание клеток Foxp3 + YFP + и Foxp3 + YFP . Справа соотношение клеток Foxp3 + YFP + и Foxp3 + YFP . n = 3 мыши. Данные являются репрезентативными для двух независимых экспериментов. Столбики погрешностей указывают SD. *р < 0,05, **р < 0,01.

Гетерозиготный

RhoA Делеция в Treg-клетках не вызывает системного аутоиммунитета и нарушения гомеостаза Treg-клеток, но индуцирует пластичность Treg-клеток и противоопухолевый T-клеточный иммунитет
мышей, несущих гетерозиготную делецию RhoA в клетках Treg.В отличие от гомозиготной делеции RhoA , гетерозиготная делеция RhoA не приводила к системному аутоиммунитету, о чем свидетельствует сопоставимый вес мыши (рис. 5A) и гистопатология тканей (рис. 5B) между RhoA Flox/+ Foxp3 YFP- Cre и RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre мышей. На гомеостаз клеток Treg также не повлияла делеция гетерозиготного RhoA (рис. 5C, D), что соответствует интактной пролиферации и выживанию, о чем свидетельствуют сопоставимые BrdU + и активный экспрессирующий каспазу-3 Foxp3 + YFP . + клеток Treg у мышей RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre/+ к таковому у мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre/+ , F (рис. 5E).Однако гетерозиготная делеция RhoA имитировала гомозиготную делецию RhoA в индукции пластичности клеток Treg — она снижала экспрессию Foxp3 (рис. 5G) и увеличивала экспрессию эффекторного Т-клеточного цитокина IFN-γ и/или фактора транскрипции T-bet в Treg (рис. 5H-K) и эффекторные Т-клетки (рис. 5L, M). Кроме того, в соответствии с тем, что пластиковые клетки Treg могут иметь ослабленную функцию (11), клетки Foxp3 + YFP + Treg из мышей RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre/+ показали ослабленную супрессивную активность в отношении пролиферация наивных Т-клеток по сравнению с таковой у мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre/+ (рис. 5N, O).

Рисунок 5 Гетерозиготная делеция RhoA в клетках Treg индуцирует пластичность клеток Treg и увеличивает эффекторные Т-клетки CD4 + , но не приводит к аутоиммунитету. (A) Масса тела мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre . (B) Изображения окрашивания указанных органов гематоксилин-эозином. (C) Репрезентативная проточная цитограмма окрашивания Foxp3 в клетках CD4 + из селезенки мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre .Цифры указывают процент CD4 + Foxp3 + клеток Treg. (D) Слева, средний процент клеток CD4 + Foxp3 + Treg. Справа: номера клеток CD4 + Foxp3 + клеток Treg. (E) Пролиферация Foxp3 + YFP + Treg-клетки самок мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre/+ и RhoA Flox/+ Foxp3 Y9-Cre. Показан процент клеток Foxp3 + YFP + Treg, инкорпорированных с BrdU. (F) Апоптоз Foxp3 + YFP + Treg-клетки из RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre/+ и RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-9. Показаны уровни экспрессии (MFI: средняя интенсивность флуоресценции) активной каспазы 3 в клетках Foxp3 + YFP + Treg. (G) Уровни экспрессии Foxp3 в клетках Treg от мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre . (H) Репрезентативная проточная цитограмма окрашивания IFN-γ, IL-17 и IL-4 в клетках CD4 + Foxp3 + Treg. Цифры показывают процентное содержание клеток IFN-γ +, IL-17 + и IL-4 + Treg. (I) Средние проценты IFN-γ + , IL-17 + и IL-4 + Treg-клеток. (J) Репрезентативная проточная цитограмма окрашивания RORγT, T-bet и GATA3 в клетках CD4 + Foxp3 + Treg.Цифры обозначают процент клеток RORγT + , T-bet + и GATA3 + Treg. (K) Средние проценты клеток RORγT + , T-bet + и GATA3 + Treg. (L) Репрезентативная проточная цитограмма окрашивания IFN-γ, IL-17 и IL-4 в клетках CD4 + Foxp3 . Цифры показывают процентное содержание IFN-γ + CD4 + , IL-17 + CD4 + и IL-4 + CD4 + эффекторных Т-клеток. (М) Средние проценты IFN-γ + CD4 + , IL-17 + CD4 + и IL-4 + CD4 + эффекторных Т-клеток. (N, O) In vitro Подавляющая активность Treg. (N) , репрезентативная проточная цитограмма разведения CFSE в Т-клетках (респондеры). Цифры над воротами представляют собой процент клеток с низким уровнем CFSE, представляющих пролиферирующие Т-клетки. (O) , средний процент клеток с низким уровнем CFSE.Клетки Foxp3 + YFP + Treg получены методом проточной цитометрии клеток CD4 + YFP + из селезенки RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre/+ и RhoA 90 FloxA 90 Foxp3 YFP-Cre/+ самок мышей. (A, C–O) Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение для 5–6 мышей (A, C–M) или трех повторов (N, O) . Данные являются репрезентативными для двух независимых экспериментов. Столбики погрешностей указывают SD. **р < 0,01. (B) Данные репрезентативны для 3 мышей.

В то время как интактные Treg-клетки способствуют уклонению опухоли от иммунного ответа (7), пластиковые Treg-клетки могут вызывать противоопухолевый Т-клеточный иммунитет (32). Чтобы определить, можно ли использовать клетки RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre Treg для борьбы с опухолью, мы инокулировали RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre

+ Rho

+. Мыши Foxp3 YFP-Cre с клетками рака толстой кишки мыши MC38. Мы обнаружили, что рост опухоли (измеряемый по объему опухоли) был заметно подавлен у мышей RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre (рис. 6А).Хотя у мышей RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre частота инфильтрирующих опухоль клеток Treg не изменилась, их количество уменьшилось (рис. 6В). У мышей RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre было больше проникающих в опухоль клеток IFN-γ + и IL-4 + Treg, чем у мышей RhoA +/+ 18 Foxp

-Cre
мышей (рис. 6C, D). Кроме того, в опухолях RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre было увеличено количество эффекторных Т-клеток CD4 + , продуцирующих ИЛ-4, но не суммарных или продуцирующих IFN-γ CD4 + эффекторных Т-клеток. мышей (рис. 6E-G).Хотя количество эффекторных Т-клеток CD8 + , продуцирующих IFN-γ, не изменилось, общее количество эффекторных Т-клеток CD8 + было повышено в опухолях у мышей RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre (рис. 6H, I). ). Взятые вместе, эти результаты предполагают, что гетерозиготность RhoA ингибирует инфильтрацию Treg-клеток в опухоли, индуцирует инфильтрирующую опухоль пластичность Treg-клеток и запускает Т-клеточный иммунитет против роста опухоли.

Рисунок 6 Гетерозиготная Делеция RhoA в клетках Treg ингибирует рост опухоли, повышая пластичность клеток Treg. (A) Слева, средний рост опухоли клеток рака толстой кишки мыши MC38 у мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre . В центре: рост опухоли у отдельных мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre . Справа: рост опухоли у отдельных мышей RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre . (B) Слева, репрезентативная проточная цитограмма клеток CD4 + YFP + из опухолей мышей RhoA +/+ Foxp3 YFP-Cre и RhoA Flox/+ Foxp3 Y0017 .Цифры указывают процент инфильтрирующих опухоль клеток CD4 + YFP + Treg. Средний, средний процент инфильтрирующих опухоль клеток CD4 + YFP + Treg. Справа: количество клеток, инфильтрирующих опухоль CD4 + YFP + Treg-клеток. (C) Слева, репрезентативная проточная цитограмма окрашивания IFN-γ в инфильтрирующих опухоль клетках CD4 + YFP + Treg. Цифры указывают процент инфильтрирующих опухоль клеток IFN-γ + Treg.Справа: средний процент инфильтрирующих опухоль клеток IFN-γ + Treg. (D) Слева, репрезентативная проточная цитограмма окрашивания IL-4 в инфильтрирующих опухоль клетках CD4 + YFP + Treg. Цифры показывают процент инфильтрирующих опухоль клеток IL-4 + Treg. Справа: средний процент инфильтрирующих опухоль клеток IL-4 + Treg. (E) Процент инфильтрирующих опухоль CD4 + эффекторных Т-клеток. (F) Процент инфильтрирующих опухоль IFN-γ + CD4 + эффекторных Т-клеток. (G) Слева, репрезентативная проточная цитограмма окрашивания IL-4 в инфильтрирующих опухоль CD4 + YFP эффекторных Т-клетках. Цифры указывают процент инфильтрирующих опухоль IL-4 + CD4 + эффекторных Т-клеток. Справа, средний процент инфильтрирующих опухоль IL-4 + CD4 + эффекторных Т-клеток. (H) Процент инфильтрирующих опухоль CD8 + эффекторных Т-клеток. (I) Процент инфильтрирующих опухоль IFN-γ + CD8 + эффекторных Т-клеток.n = 4-6 мышей. Данные являются репрезентативными для двух независимых экспериментов. Столбики погрешностей указывают SD. *р < 0,05, **р < 0,01.

Обсуждение

В этом исследовании мы показываем, что гомозиготная делеция RhoA в клетках Treg вызывает ранние фатальные воспалительные заболевания, предполагая, что RhoA является добросовестным привратником иммунной толерантности. Аутоиммунные ответы у мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre связаны с повышением уровня эффекторных Т-клеток, что предположительно является результатом уменьшения числа клеток Treg и/или повышения пластичности клеток Treg.Уменьшение количества Treg-клеток, вероятно, связано с нарушением пролиферации и выживания, но не с развитием в тимусе. Пластичность клеток RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre Treg, по-видимому, является клеточно-автономным явлением, но может быть унаследованным фенотипом от Treg-клеток тимуса. RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre Пластичность клеток Treg проявляется подавлением Foxp3 и перепрограммированием эффекторных Т-клеток. Поскольку известно, что сниженная экспрессия Foxp3 превращает Treg-клетки в эффекторные Т-клетки (30, 33), по крайней мере часть эффекторных Т-клеток с повышенным уровнем CD4 + у мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre могли быть получены из клеток RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre Treg.Учитывая, что Treg-клетки, экспрессирующие маркеры эффекторных Т-клеток, вовлечены в аутоиммунные заболевания, такие как воспалительные заболевания кишечника (34), репрограммирование эффекторных Т-клеток в RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre Treg могло способствовать Функции Т-клеток и, следовательно, воспалительные заболевания у мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre .

В отличие от гомозиготной делеции RhoA , гетерозиготная делеция RhoA не вызывает аутоиммунитета и не нарушает гомеостаз Treg-клеток.Однако, подобно гомозиготности RhoA , гетерозиготность RhoA индуцирует пластичность клеток Treg. Мы отмечаем, что в то время как все цитокины эффекторных Т-клеток IFN-γ, IL-17 и IL-4 активируются в Treg-клетках и CD4 + эффекторных Т-клетках у мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre , только IFN-γ активируется в Treg и эффекторных Т-клетках CD4 + у мышей RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre , что позволяет предположить, что дозы RhoA точно настраивают пластичность клеток Treg.Важно отметить, что клетки RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre Treg способны вызывать противоопухолевый Т-клеточный иммунитет. Тем не менее, в отличие от мышей RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre в стационарном состоянии, у мышей с опухолями RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre кроме того, наблюдается повышенная экспрессия IL-4. к IFN-γ в инфильтрирующих опухоль клетках Treg. Кроме того, IL-4, но не IFN-γ, был повышен во внутриопухолевых эффекторных Т-клетках CD4 + .Таким образом, кажется, что проявления пластичности клеток Treg зависят от контекста. Поскольку сообщалось, что ИЛ-4 способен подавлять прогрессирование рака (35), мы постулируем, что ИЛ-4 продуцируется проникающими в опухоль клетками Treg и эффекторными Т-клетками CD4 + , а IFN-γ продуцируется проникающими в опухоль клетками Treg. , и эффекторные молекулы, отличные от IFN-γ (например, TNF-α, гранзим B и/или перфорин), продуцируемые проникающими в опухоль CD8 + T-клетками, коллективно ингибируют рост опухоли в RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre мышей.

Пластичность клеток Treg может ослабить их подавляющую функцию (11). В подтверждение, пластиковые Treg-клетки, несущие гомозиготную или гетерозиготную делецию RhoA , нарушены в их подавлении пролиферации наивных Т-клеток. Поскольку эти клетки Treg происходят от мышей RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre/+ или RhoA Flox/+ Foxp3 YFP-Cre/+ , которые содержат клетки RhoA отсутствие явного воспаления, наши результаты показывают, что RhoA способствует супрессивной функции Treg внутриклеточным образом.Следует отметить, что клетки RhoA Flox/Flox Foxp3 YFP-Cre Treg активируют свои функциональные маркеры CTLA-4, GITR и PD-1. Мы предполагаем, что эти Treg-клетки подвергаются функциональному истощению, напоминающему LKB1-дефицитные Treg-клетки (36).

Таким образом, наши результаты показывают, что градуированная экспрессия RhoA отличает опухолевый иммунитет от аутоиммунитета. Мы демонстрируем доказательство концепции того, что фармакологическое титрование RhoA для индукции пластичности клеток Treg без нарушения их гомеостаза может вызывать противоопухолевый Т-клеточный иммунитет, не вызывая системных аутоиммунных заболеваний.

Заявление о доступности данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без неоправданных оговорок.

Заявление об этике

Исследование на животных было рассмотрено и одобрено Комитетом по уходу и использованию животных Медицинского центра детской больницы Цинциннати.

Авторские взносы

KK спроектировал и провел исследование и проанализировал данные. J-QY и VM провели исследование и проанализировали данные.PN и YL провели исследование. YZ разработал исследование, проанализировал данные и предоставил жизненно важные новые реагенты или аналитические инструменты. FG разработала исследование, проанализировала данные, предоставила жизненно важные новые реагенты или аналитические инструменты и написала статью. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Эта работа была частично поддержана грантами Национальных институтов здравоохранения (R01GM108661 для FG, R56 HL141499 для FG и R01CA234038 для FG и YZ).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Примечания издателя

Все претензии, изложенные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно представляют претензии их дочерних организаций или издателя, редакторов и рецензентов. Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или претензии, которые могут быть сделаны его производителем, не гарантируются и не поддерживаются издателем.

Благодарности

Мы благодарим Салли Шенкель за корректуру рукописи.

Ссылки

1. Annunziato F, Romagnani C, Romagnani S. 3 основных типа врожденного и адаптивного клеточно-опосредованного эффекторного иммунитета. J Allergy Clin Immunol (2015) 135:626–35. doi: 10.1016/j.jaci.2014.11.001

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

5. Данг Э.В., Барби Дж., Ян Х.И., Цзинасена Д., Ю.Х., Чжэн И. и др. Контроль баланса T(H)17/T(reg) с помощью фактора, индуцируемого гипоксией 1. Cell (2011) 146:772–84. doi: 10.1016/j.cell.2011.07.033

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

6. Gomez-Rodriguez J, Wohlfert EA, Handon R, Meylan F, Wu JZ, Anderson SM, et al. Itk-опосредованная интеграция Т-клеточного рецептора и передачи сигналов цитокинов регулирует баланс между Th27 и регуляторными Т-клетками. J Exp Med (2014) 211:529–43. doi: 10.1084/jem.20131459

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

9.Colamatteo A, Carbone F, Bruzzaniti S, Galgani M, Fusco C, Maniscalco GT и др. Молекулярные механизмы, контролирующие экспрессию Foxp3 в норме и при аутоиммунитете: от эпигенетической до посттрансляционной регуляции. Фронт Иммунол (2020) 10:3136. doi: 10.3389/fimmu.2019.03136

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

10. Cortez JT, Montauti E, Shifrut E, Gatchalian J, Zhang Y, Shaked O, et al. Экран CRISPR в регуляторных Т-клетках выявляет модуляторы Foxp3. Природа (2020) 582:416–20. doi: 10.1038/s41586-020-2246-4

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

11. Takahashi R, Nishimoto S, Muto G, Sekiya T, Tamiya T, Kimura A, et al. SOCS1 необходим для регуляторных функций Т-клеток, предотвращая потерю экспрессии Foxp3, а также продукцию IFN-{Gamma} и IL-17A. J Exp Med (2011) 208:2055–67. doi: 10.1084/jem.20110428

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

12.Tnimov Z, Guo Z, Gambin Y, Nguyen UTT, Wu YW, Abankwa D, et al. Количественный анализ взаимодействия пренилированного RhoA с его шапероном, RhoGDI. J Biol Chem (2012) 287:26549–62. doi: 10.1074/jbc.M112.371294

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

13. Nobes CD, Hall A. Rho, Rac и Cdc42 GTPases регулируют сборку мультимолекулярных фокальных комплексов, связанных с актиновыми стрессовыми волокнами, ламеллоподиями и филоподиями. Cell (1995) 81:53–62.doi: 10.1016/0092-8674(95)-4

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

14. Lin R, Cerione RA, Manor D. Конкретный вклад малых ГТФаз Rho, Rac и Cdc42 в трансформацию Dbl. J Biol Chem (1999) 274:23633–41. doi: 10.1074/jbc.274.33.23633

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

15. Guo F, Zheng Y. Участие ГТФаз семейства Rho в p19Arf- и P53-опосредованной пролиферации первичных эмбриональных фибробластов мыши. Mol Cell Biol (2004) 24:1426–38. doi: 10.1128/mcb.24.3.1426-1438.2004

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

16. Зон И.М., Кэмпбелл С.Л., Хосрави-Фар Р., Россман К.Л., Дер К.Дж. Белки семейства Rho и трансформация Ras: RHOad, по которому меньше путешествовали, становится перегруженным. Онкоген (1998) 17:1415–38. doi: 10.1038/sj.onc.1202181

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

18. Rougerie P, Largeteau Q, Megrelis L, Carrette F, Lejeune T, Toffali L, et al.Fam65b является новой транскрипционной мишенью FOXO1, которая регулирует передачу сигналов RhoA для миграции Т-лимфоцитов. J Immunol (2013) 190:748–55. doi: 10.4049/jimmunol.1201174

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

19. дель Позо М.А., Висенте-Мансанарес М., Техедор Р., Серрадор Дж.М., Санчес-Мадрид Ф. Ро GTPases контролируют миграцию и поляризацию молекул адгезии и цитоскелетных компонентов ERM в Т-лимфоцитах. Eur J Immunol (1999) 29:3609–20.doi: 10.1002/(SICI)1521-4141(199911)29:11<3609::AID-IMMU3609>3.0.CO;2-S

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

20. Heasman SJ, Carlin LM, Cox S, Ng T, Ridley AJ. Координированная передача сигналов RhoA на переднем крае и Uropod необходима для трансэндотелиальной миграции Т-клеток. J Cell Biol (2010) 190:553–63. doi: 10.1083/jcb.201002067

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

22. Mou F, Praskova M, Xia F, Van Buren D, Hock Hock, Avruch J, et al.Киназы Mst1 и Mst2 контролируют активацию ГТФаз семейства Rho и выход зрелых тимоцитов из тимуса. J Exp Med (2012) 209:741–59. doi: 10.1084/jem.20111692

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

23. Корре И., Гомес М., Вилкинд С., Кантрелл Д.А. Анализ развития тимоцитов показывает, что T-GTPase RhoA является положительным регулятором ответов Т-клеточных рецепторов In Vivo . J Exp Med (2001) 194:903–14. doi: 10.1084/jem.194.7.903

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

25. Галандрини Р., Хеннинг С.В., Кантрелл Д.А. Различные функции ГТФазы Rho в протимоцитах и ​​поздних пре-Т-клетках. Иммунитет (1997) 7:163–74. doi: 10.1016/s1074-7613(00)80519-1

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

26. Лопес-Посадас Р., Фастанц П., Кармен Мартинес-Санчес Л.Д., Юлия Пантелеев-Ивлев Дж., Тонн В., Киселева Т. и др. Ингибирование PGGT1B нарушает функцию RHOA, что приводит к Т-клеточной экспрессии интегрина α4β7 и развитию колита у мышей. Гастроэнтерология (2019) 157:1293–309. doi: 10.1053/j.gastro.2019.07.007

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

27. Yang JQ, Kalim KW, Li Y, Zhang S, Hinge A, Filippi MD, et al. RhoA управляет гликолизом для дифференцировки клеток Th3 и аллергического воспаления дыхательных путей. J Allergy Clin Immunol (2016) 137:231–45. doi: 10.1016/j.jaci.2015.05.004

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

28. Yang JQ, Kalim KW, Li Y, Zheng Y, Guo F.Абляция RhoA нарушает дифференцировку клеток Th27 и облегчает вызванное клещами домашней пыли аллергическое воспаление дыхательных путей. J Leukoc Biol (2019) 106:1139–51. doi: 10.1002/JLB.3A0119-025RRR

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

29. Melendez J, Stengel K, Zhou X, Chauhan BK, Debidda M, Andreassen P, et al. RhoA GTPase необязательна для регуляции актомиозина, но необходима для митоза в первичных эмбриональных фибробластах мыши. J Biol Chem (2011) 286:15132–7.doi: 10.1074/jbc.C111.229336

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

30. Kalim KW, Yang JQ, Li Y, Meng Y, Zheng Y, Guo F. Реципрокная регуляция патогенности Th27, обусловленной гликолизом, и стабильности Treg с помощью Cdc42. J Immunol (2018) 200:2313–26. doi: 10.4049/jimmunol.1601765

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

31. Komatsu N, Okamoto K, Sawa S, Nakashima T, Oh-hora M, Kodama T, et al. Патогенное превращение Т-клеток Foxp3+ в клетки Th27 при аутоиммунном артрите. Nat Med (2014) 20:62–8. doi: 10.1038/nm.3432

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

32. Wei J, Long L, Yang K, Guy C, Shrestha S, Chen Z, et al. Аутофагия обеспечивает функциональную целостность регуляторных Т-клеток, объединяя сигналы окружающей среды и метаболический гомеостаз. Nat Immunol (2016) 17(3):277–85. doi: 10.1038/ni.3365

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

34. Уэно А., Гош А., Хунг Д., Ли Дж., Джиджон Х.Пластичность Th27 и ее изменения, связанные с воспалительными заболеваниями кишечника. World J Gastroenterol (2015) 21:12283–95. doi: 10.3748/wjg.v21.i43.12283

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

35. Li S, Liu M, Do MH, Chou C, Stamatiades EG, Nixon BG, et al. Иммунотерапия рака посредством направленной блокады передачи сигналов TGF-β в клетках T H . Природа (2020) 587:121–5. doi: 10.1038/s41586-020-2850-3

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

36.Ян К., Бланко Д.Б., Нил Г., Фогель П., Авила Дж., Клиш С.Б. и др. Гомеостатический контроль метаболической и функциональной пригодности клеток Treg с помощью передачи сигналов LKB1. Природа (2017) 548(7669):602–6. doi: 10.1038/nature23665

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Назальная цитология: неиспользованный диагностический инструмент

Хотя диагностическая ценность назальной цитологии давно установлена, широкое систематическое применение этой очень простой, быстрой и безопасной процедуры в педиатрической популяции все еще отсутствует.Недавний обзорный документ, в котором оцениваются преимущества использования процедуры назальной цитологии в педиатрической популяции 1 , еще раз подтвердил клиническую важность назальной цитологии в качестве дополнительного диагностического инструмента и подчеркнул ее большую полезность в оптимизации лечения и ведения назальных заболеваний. нарушений в детской популяции.

Matteo Gelardi, MD «В отличие от всех цитологических процедур, выполняемых в других частях человеческого тела, таких как щитовидная железа, молочная железа, слюнные железы и лимфатические узлы, назальная цитология не является инвазивной процедурой и не требует анестезии.Техника не требует гистологического образца, вместо этого требуется простой цитологический сбор с поверхности, выполняемый маленькой ложечкой (ринозонд) или тампоном (похожим на ротоглоточный тампон), который вводится в соответствующую нижнюю носовую раковину. Поскольку процедура безболезненная, быстрая и безопасная, ее можно рассматривать как идеальную дополнительную диагностическую процедуру для дальнейшей помощи в лечении и ведении пациентов с заболеваниями носа», — говорит Маттео Геларди, доктор медицинских наук, отделение отоларингологии, отделение базовой медицины. Наука, неврология и органы чувств, Университет Бари, Италия.

Назальная цитология неоднократно подтверждалась как очень полезная диагностическая процедура при нарушениях и заболеваниях носа, поскольку она способна обнаруживать как клеточные модификации назального эпителия, вызванные воздействием аллергена, раздражающими раздражителями (физическими или химическими), так и воспалением. . В дополнение к выяснению тонких различий и нюансов среди недавно выявленных заболеваний, включая неаллергический ринит с эозинофилами (NARES), неаллергический ринит с тучными клетками (NARMA) и неаллергический ринит с нейтрофилами (NARESMA), Геларди говорит, что этот метод также может помочь отличить между различными формами аллергического ринита, тем самым помогая клиницистам быстрее подобрать подходящую терапию, будь то противовоспалительные средства или иммунотерапия аллергенами.

В настоящее время в области отоларингологии используется несколько различных диагностических тестов, в том числе макроскопические (назальная эндоскопия), микроскопические (назальная цитология), аллергологические (прик-тест) и функциональные тесты (риноманометрия), и каждая процедура открывает диагностическое окно. это дает клиницистам лучшую общую картину исследуемого заболевания. Однако, к сожалению, Геларди говорит, что назальная цитология все еще недостаточно используется в педиатрии или в других областях.Исторически предполагается, что одной из основных причин является отсутствие стандартизации цитологических процедур, связанных с забором и интерпретацией назальных цитограмм. Геларди говорит, что литература, созданная за последние годы, очень конкретно помогла решить эти проблемы, открыв дверь для недавно обретенного доверия и уверенности в процедуре. Gelardi также недавно опубликовал теоретическую помощь, чтобы помочь уточнить все цитоморфологические аспекты нормальной и патологической слизистой оболочки носа. 2

Дети часто страдают патологией носа, особенно в раннем детстве, когда инфекционные заболевания и аллергии обычно сочетаются друг с другом. Таким образом, Геларди говорит, что назальная цитология может быть очень полезной для дифференциации этих заболеваний, позволяя клиницистам начать соответствующую и точную терапию. Например, цитология бактериального ринита микроскопически характеризуется наличием многочисленных бактерий и нейтрофилов, а в цитограмме часто можно наблюдать следы биопленки как выражение хронизации имеющейся ринопатии.При острых аллергических заболеваниях цитограмма всегда характеризуется наличием частично дегранулированных эозинофилов и тучных клеток. Такие «характерные» цитограммы могут быстро помочь клиницистам классифицировать рассматриваемое заболевание и начать соответствующую терапию.

После выполнения цитограммы клиническое и терапевтическое наблюдение играет важную роль, говорит Геларди, потому что это позволяет врачу персонализировать лечение в соответствии с цитологическими данными конкретного пациента (т. е. устойчивостью бактерий, наличием биопленки, а также состояние дегрануляции эозинофилов и тучных клеток).

«Назальная цитология становится незаменимой при подозрении на наличие аллергического ринита, даже если все ранее проведенные тесты (например, прик-тест, [радиоаллергосорбентный тест] и т. д.) дали отрицательный результат. Фактически, в этих случаях назальная цитология является единственным диагностическим инструментом, способным идентифицировать те ринопатии, которые обычно определяют как вазомоторные, неспецифические, идиопатические или криптогенные. К счастью, у педиатров, аллергологов и специалистов [отоларингологии] растет интерес к развитию навыков проведения стандартизированных цитологических исследований носа у своих пациентов, и мы надеемся, что эта тенденция будет продолжаться на благо наших пациентов. — говорит Геларди.

Ссылки

1. Gelardi M, Iannuzzi L, Quaranta N, Landi M, Passalacqua G. Назальная цитология: практические аспекты и клиническая значимость. Clin Exp Allergy . 24 марта 2016 г. Epub перед печатью.

2. Геларди М. Атлас цитологии носа для дифференциальной диагностики заболеваний носа . 2-е изд. Милан, Италия: Эди-Эрмес; 2012.

Эозинофильное воспаление дыхательных путей — основной признак нестабильной астмы у подростков

Стабильность астмы — клинический фенотип заболевания, основанный на длительной оценке контроля над симптомами астмы и ее обострениями.Взаимосвязь между воспалением дыхательных путей и клинической классификацией астмы на основе критерия стабильности изучена недостаточно.

Целью нашего исследования был анализ профиля воспаления при стабильной и нестабильной астме у подростков, получавших умеренные и высокие дозы ингаляционных кортикостероидов.

139 юных астматиков 16,8 (3,25) лет после 3-х месячного проспективного наблюдения были отнесены к стабильной группе (N=72) и нестабильной группе (N=67). Сравнивали маркеры воспаления, включая цитограмму индуцированной мокроты (ИС), фракцию оксида азота в выдыхаемом воздухе (FeNO) и бронхиальную гиперреактивность (БГР) после провокации гипертоническим раствором и физической нагрузкой, а также клинические и спирометрические показатели в обеих группах.

У 75% больных с нестабильной БА выявлен повышенный процент эозинофилов в индуцированной мокроте (>2,5%), а средние значения были достоверно выше по сравнению со стабильной БА: 2,0 (0,5–4,2) против 5,5 (2,6–11,3), р<0,001. Бронхиальная гиперреактивность была заметно выше при нестабильной астме, особенно при астме с эозинофильным профилем; статистически значимые различия также относились к функциональным легочным тестам. При многомерном анализе нестабильность астмы была достоверно связана с sEos (p=0,00).005), BHR (p=0,001), но не FeNO (p=0,24).

Заключение (и клиническая значимость)

Эозинофильное воспаление, относительно резистентное к высоким дозам ингаляционных кортикостероидов, является доминирующим типом воспаления при нестабильной астме у подростков. Нестабильность астмы также связана с более высокой гиперреактивностью бронхов и более низкими спирометрическими параметрами. В свете новых исследований и прогресса в биологических методах терапии эозинофильного воспаления нестабильная бронхиальная астма, особенно при тяжелом течении, требует расширенной диагностики с определением воспалительного фенотипа.

Полный текст статьи доступен в формате PDF.

Полный текст статьи доступен в формате PDF.

Ключевые слова :  Подростки, Эозинофилы мокроты, Бронхиальная гиперреактивность, Нестабильная астма, Воспаление дыхательных путей

© 2019 Elsevier Ltd. Все права защищены.

Динамика цитологических показателей при лечении длительно незаживающих ран мягких тканей

Б.Р. Абдулладжанов , К.А. Юсупов , А.Х. Бабаджанова , Садыкова Р.А. , Юсупова Ж.К.

Андижанский государственный медицинский институт, Узбекистан

Copyright © 2021 Автор(ы). Опубликовано Scientific & Academic Publishing.

Эта работа находится под лицензией Creative Commons Attribution International License (CC BY).
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Аннотация

Целью исследования является изучение динамики цитологических показателей при лечении хронических длительно незаживающих гнойных ран мягких тканей. Материал и методы . В основу исследования легли результаты лечения 132 больных с хроническими длительно незаживающими гнойными ранами мягких тканей, находившихся на лечении в клинике Андижанского государственного медицинского института с 2016 по 2020 годы. Проведены ретро- и проспективные исследования с распределением больных на 3 группы. В группу сравнения № 1 вошли 54 пациента с традиционным лечением (ретроспективный анализ). Группа сравнения №. 2 составили 40 пациентов, лечение которых проводилось только с применением препарата ФарГАЛС.В основную группу вошли 38 больных, лечение которых проводилось по предложенному способу химиофотодинамической терапии с местным применением отечественного препарата ФарГАЛС и лазерным облучением раны. В сравнительном аспекте проанализированы результаты цитологических проб экссудата, выделенного из ран. Достоверность полученных результатов подтверждается статистическими методами. Результаты . Анализ видов цитограмм из ран в динамике лечения показал, что в основной группе больных ускорение перехода воспалительной фазы в регенеративную отмечено к 14 дню в 71.у 1% больных (против 31,5% в группе № 1, χ2 = 17,073; df = 3; р<0,001 и 47,5% в группе № 2), а на 219017-й -й день у 94,7% больных (против 53,7% в группе № 2). группа № 1, χ2 = 18,188; df = 2; p < 0,001 и 77,5% в группе № 2, χ2 = 4,780; df = 1; p = 0,029). Заключение . Внедрение нового метода комбинированной местной химио-фотодинамической терапии длительно незаживающих гнойных ран мягких тканей, направленного на индукцию противовоспалительного и репаративного действия, позволило ускорить переход воспалительной фазы в регенеративную фазу в относительно короткие сроки лечения.

Ключевые слова: Хирургия, Длительно незаживающая гнойная рана мягких тканей, Метод химио-фотодинамической терапии, Динамика цитологических показателей

Цитируйте эту бумагу: Абдулладжанов Б.Р., Юсупов К.А., Боров А.Х. Бабаджанов, Р. А. Садыков, Ж. К. Юсупов, Динамика цитологических показателей при лечении длительно незаживающих ран мягких тканей, American Journal of Medicine and Medical Sciences , Vol.11 № 2, 2021. С. 106-112. doi: 10.5923/j.ajmms.20211102.08.

1. Введение. нерешенные проблемы хирургии. [1-3]. В этом аспекте наиболее актуальными вопросами являются разработка новых перевязочных, ранозаживляющих химических средств и тактических подходов к их сочетанному применению с физическими факторами, призванными усилить активность очистки и эпителизации раневой поверхности, ускорить сроки полной регенерации при восстановление анатомо-функциональных структур и снижение риска раннего рецидива [2-3].

По данным исследования Global Burden of Disease Study (2016 г.), «заболеваемость кожными заболеваниями и подкожной клетчаткой различной этиологии составляет 8,24%, а распространенность хронических длительно незаживающих гнойных ран (ХДНР) мягких тканей — 2,21% 1000 человек населения». [2,4]. При этом «частота гнойно-некротического воспаления достигает 45% от общего числа операционных ран кожи, приводящих к инвалидизации и летальности до 25%-50%» [5-7]. Известно, что CNPW мягких тканей приводит к хронической боли, потере активности, повышенному стрессу и социальной изоляции, депрессии и тревоге, длительной госпитализации и значительному увеличению затрат на лечение [8-10].
Также в результате активного развития хирургических технологий на первое место выходит проблема безопасности и биосовместимости применяемых в настоящее время перевязочных материалов, местных препаратов и методов физиотерапии, сокращения реабилитационного периода, частоты инфекционных осложнений и достижение ускоренного заживления ран [3,7,9].
Таким образом, отсутствие единства взглядов и дискуссия по некоторым вопросам тактики лечения этого сложного контингента больных диктует необходимость более детального изучения данной проблемы.Особого внимания требует продолжение изучения вопросов клинического применения различных вариантов комбинированного химического и физиотерапевтического воздействия и их оптимизации. Эти обстоятельства обусловили растущий интерес к фотодинамической терапии (ФДТ) как к серьезной альтернативе традиционным стандартным подходам к хирургической обработке ран, медикаментозным методам обработки ран и перевязок.
Цель исследования — изучение динамики цитологических показателей при лечении длительно незаживающих гнойных ран мягких тканей.

2. Материалы и методы

В основу исследования положены результаты лечения 132 больных с хроническими длительно незаживающими гнойными ранами мягких тканей, находившихся на лечении в клинике Андижанского государственного медицинского института с 2016 по 2020 гг. у всех больных гнойные раны образовались не менее чем за 14 дней до поступления, а средняя продолжительность наличия раны составила 22,6 ± 1,9 дня. В исследование были включены только те пациенты, у которых лечение ЛНПВ подразумевало только местное воздействие; были исключены больные с ранами мягких или глубоколежащих тканей, которым выполнялись различные методы хирургического лечения (традиционные и малоинвазивные вмешательства на сосудах, ампутации и др.). Все пациенты были разделены на три группы в зависимости от метода лечения CNPW. Были сформированы две группы сравнения. Группу сравнения № 1 составили 54 пациента, у которых анализ результатов сравнительного исследования проводился ретроспективно. Обязательным условием включения в эту группу явилось соответствие клинического течения ХНПВ, а также других показателей (возраст, пол, сопутствующая патология, причины раневого образования и др.) больным других групп, а также наличие всех необходимые данные для сравнительного анализа.Лечение ХНПВ в этой группе проводилось по традиционной методике.
В основную группу вошли 38 больных, которым проводилось лечение по предлагаемому способу. В качестве антисептического и ранозаживляющего средства, а также фотосенсибилизатора при ФДТ использовали отечественный препарат «ФарГАЛС». В качестве источника излучения для ФДТ использовали лазерную установку «Матрица». В нем использовался полупроводниковый излучатель с мощностью излучения 3 мВт, спектр — 337 нм. Излучение импульсное с частотой 100 Гц.Прибор снабжен световодом диаметром 500 мкм, измерителем мощности и таймером с дискретными значениями времени от 10 с до 3 мин.
Спектр поглощения «ФарГАЛС» полностью совпадает с излучением лазерного аппарата «Матрица». Отечественный высокоэффективный антимикробный препарат показал спектр поглощения в режиме 350-550 нм, со вторым небольшим подъемом кривой в спектре 800 нм.
Группу сравнения № 2 составили 40 больных. В этой группе лечение больных проводилось только с применением препарата «ФарГАЛС» для объективной картины при оценке результатов.Возраст пациентов, включенных в исследование, колебался от 25 до 75 лет. Большинство больных соответствовало возрастной группе от 45 до 60 лет. В группе сравнения № 1 было 25 (46,3%) женщин и 29 (53,7%) мужчин. В группе сравнения № 2 было 19 (47,5%) женщин и 21 (52,5%) мужчин. В группе сравнения № 2 было 20 (52,6%) женщин. и 18 (47,4%) мужчин в основной группе. Согласно классификации хирургических инфекций мягких тканей, предложенной Ahrenholz D.H. в 1991 г., все больные, включенные в исследование, были отнесены ко второму уровню с поражением подкожной клетчатки (абсцесс, флегмона и др.).) и до третьего уровня при поражении поверхностной фасции (некротизирующий фасциит). Распределение больных по рекомендациям Российской ассоциации хирургических инфекционистов показало, что все случаи относились к вторичным инфекциям с осложненным течением, причинами которых были: укусы с исходом в инфицированные раны, инфицирование области хирургического вмешательства , инфицированные трофические язвы, пролежни и инфицированные ожоговые раны.
По локализации ранений больные распределились следующим образом: ранения медиальной лодыжки составили большинство случаев как в основном (44.7%) и в группах сравнения № 1 и № 2 (48,1% и 45,0%). Следующими по частоте встречаемости были ранения мягких тканей голени, области крестца, ягодиц, стоп и предплечья.
По наличию сочетанной патологии у больных достоверных различий между основной и группами сравнения № 1 и № 2 не было. Чаще всего как в основной (34,2%; 13 из 38 больных), так и в группах сравнения № У 1 (27,8%; 15 из 54) и № 2 (27,5%; 11 из 40) наблюдалась артериальная гипертензия.Сопутствующая патология желудочно-кишечного тракта наблюдалась у 4 (10,5%) больных основной группы, у 5 (9,3%) пациентов группы сравнения № 1 и у 5 (12,5%) больных группы № 2. Диагноз: сопутствующий сахарный диабет сахарный диабет определялся с частотой 10,5% (4 из 38), 5,6% (3 из 54) и 7,5% (3 из 40) в основной и группе сравнения № 1 и № 2 соответственно. Различные формы ишемической болезни сердца как сопутствующая патология выявлены в 13,2%, 11,1% и 10,0% случаев в основной и группе сравнения № 1 и № 2 соответственно.Сопутствующая патология почек и легких выявлялась с относительно меньшей частотой.
У больных исследуемых групп после первичной хирургической обработки чаще всего наблюдались раны площадью от 401 до 600 мм 2 : 48,1% в группе сравнения № 1, 50% в группе № 2 и 55,3% в основной группе . По частоте выявления раны площадью 201-400 мм 2 отмечены в 28,9%, 37,0% и 35,0% случаев основной, группы сравнения № 1 и № 2 соответственно.Обширные раны площадью более 600 мм 2 выявлены только у 4 (10,5%) больных основной группы, у 6 (11,1%) больных группы № 1 и у 4 (10%) больных группы сравнения № 2.

3. Результаты

В ранах больных всех трех групп преобладали дегенеративные нейтрофилы, фибробласты и эпителиоциты практически отсутствовали на начальном этапе лечения. В динамике наблюдалось постепенное купирование воспалительного процесса в ранах.Так, количество дегенеративных нейтрофилов (на 100 клеток) к 219017- дню лечения уменьшилось с 63,5±3,7 до 6,8±0,5 в основной группе больных; от 60,2±4,1 до 21,1±1,8 — в группе сравнения № 1 и от 61,2±3,7 до 16,6±1,7 в группе № 2. При этом отмечалась достоверная разница по этому показателю в пользу основной группы больных ( р +
+
91 991 Стаб нейтрофилы полностью исчезли из клеточного состава раны у больных основной группы.Количество сегментоядерных нейтрофилов уменьшалось с достоверной разницей (р Регенеративно-дегенеративный индекс рассчитывали на этапах лечения на основании полученных результатов цитологических исследований (табл. 2). 2 . Динамика показателя регенеративного-дегенеративных индекса на фоне лечения 91 936
+ + + +
+ +
Таблица 1 динамика клеточного состава раны. (на 100 клеток; м ± м) 91 936
+
+
В динамике, на 3- день после к началу лечения относительно высокий показатель отмечен в основной группе больных (0,0.69±0,03 против 0,60±0,03 и 0,63±0,03 в группе №1 и №2 соответственно). Данная тенденция сохранялась до конца курса лечения, и к 219017- дню показатели были следующими: в основной группе больных — 1,66±0,03, в группе сравнения №1 — 1,35±0,03, в группе сравнения № 2 – 1,53 ± 0,03. Анализ динамики роста показателя регенеративно-дегенеративного индекса показал, что достоверная разница отмечена уже на 3-й день лечения между основной и группой сравнения № 1.1 (t = 2,35; p основная группа больных оставалась до конца курса лечения и к 219017- дню показатели были следующими: в основной группе больных — 1,66±0,03, в группе сравнения № 1 — 1.35 ± 0,03 (t = 7,78; р-й день лечения между группами сравнения № 1 и № 2 выявлены достоверные различия (t = 3,56-4,42; р). Изучено и отслежено соотношение типов цитограмм во всех группах в процессе лечения (табл. 3).
Таблица 3 . Динамика соотношения типов цитограмм за 1-21 дней

+

4.Обсуждение
В процессе лечения изучали и контролировали соотношение типов цитограмм в исследуемых группах (табл. 3 и рис. 2). Таким образом, на начальном этапе лечения во всех группах были выявлены следующие типы цитограмм: некротический, дегенеративно-воспалительный, воспалительный и воспалительно-регенеративный. Наибольшая частота встречаемости выявлена ​​по воспалительному типу — 46,3% (25 из 54), 45,0% (18 из 40) и 42,1% (16 из 38) в группах № 1, № 2 и в основной группе соответственно.В дальнейшем, на 7 день лечения, более половины больных (52,6%; 20 из 38) основной группы имели регенеративно-воспалительный тип цитограмм. В группе сравнения № 2 этот показатель составил 35,0% (14 из 40), а в группе сравнения № 1 — всего 3,7% (2 из 54). Также в основной группе больных на данном этапе лечения отмечено 5 (13,2%) случаев с регенеративным типом цитограмм. В группе сравнения № 1 этого не было, а в группе № 2 выявлено только у 1 (2.5%) случай. Статистически значимая межгрупповая разница в распределении типов цитограмм отмечалась уже к 79017--м суткам от начала лечения (рис. 2).
38) падежи. В группе сравнения № 1 этот показатель равнялся 9.3% (5 из 54 больных) (χ2 = 45,327; df = 4; р-й день лечения отмечено преобладание процессов регенерации у 71,1% больных основной группы (против 31,5% в группе № 1, χ2 = 17,073; df = 3; p ст-сут у 94,7% больных основной группы исследования, что также имело статистически значимо лучшие результаты (против 53,7% в группе № 1, χ2 = 18,188; df = 2; p

5. Выводы

Внедрение нового метода комбинированной местной химио-фотодинамической терапии длительно незаживающих гнойных ран мягких тканей, направленного на индукцию противовоспалительного и репаративного действия, позволяет ускорить переход воспалительной фазы на восстановительную к 14 дню 71 года.1% больных (против 31,5% в группе № 1, χ2 = 17,073; df = 3; р ст-день — у 94,7% больных (против 53,7% в группе № 1, χ2 = 18,188; df = 2; p

Каталожные номера



[1]   Martinengo L, Olsson M, Bajpai R, Soljak M, et al. Распространенность хронических ран среди населения в целом: систематический обзор и метаанализ обсервационных исследований.Энн Эпидемиол. 2019; 29: 8-15. doi: 10.1016/j.annepidem.2018.10.005. Epub 2018, 12 ноября. PMID: 30497932.
[2]   Järbrink K, Ni G, Sönnergren H, et al. Распространенность и частота хронических ран и связанных с ними осложнений: протокол для систематического обзора. Системная редакция 2016 г.; 5(1): 152. Опубликовано 8 сентября 2016 г. doi:10.1186/s13643-016-0329-y.
[3]   Вос, К. Аллен, М. Арора, Р.М. Барбер, З.А. Бхутта, А. Браун и др. Соавторы по заболеваемости и распространенности болезней и травм ГББ 2015 г.Глобальная, региональная и национальная заболеваемость, распространенность и годы жизни с инвалидностью по 310 заболеваниям и травмам: систематический анализ для исследования глобального бремени болезней, 2015 г. Lancet. 2016 8 октября; 388 (10053): 1545-1602.
[4]   Graves N, Zheng H. Распространенность и заболеваемость хроническими ранами: обзор литературы. Раневая практика и исследования. 2014; 22(1): 4–19.
[5]   Икбал А., Ян А., Ваджид М.А., Тарик С. Лечение хронических незаживающих ран с помощью гирудотерапии.Мир J Plast Surg. 2017; 6(1): 9-17.
[6]   Парвез Н., Датта П., Рэй П., Шах В.Н., Пракаш М., Ханделвал Н., Каман Л., Бхансали А. Микробный профиль и использование культур мягких тканей, гноя и костей в диагностике диабетической стопы инфекции. Диабет Текнол Тер. 2012 г.; 14: 669-74.
[7]   Винник Ю.С., Маркелова Н.М., Тюрюмин В.С. Современные методы лечения гнойных ран // Сибирское медицинское обозрение. 2013; 1:18-24.
[8]   Манна Б., Нахирняк П., Моррисон К.А.Обработка раны. 2020, 7 декабря. В: StatPearls [Интернет]. Остров сокровищ (Флорида): Stat Pearls Publishing; 2020. PMID: 29939659.
[9]   Mervis JS, Phillips TJ. Пролежни: профилактика и лечение. J Am Acad Дерматол. 2019; 81(4): 893-902.
[10]   Colenci R, Abbade LPF. Основные аспекты местного подхода к кожным язвам. Бюстгальтеры Дерматол. 2018; 93(6): 859-870.

Метаданные индексирования

Dublin Core Элементы метаданных PKP Метаданные для этого документа
1. Титул Название документа Определение клинической эффективности депротеинизированного диализата из крови молочных телят после эндопротезирования у больных с вентральными грыжами
2. Создатель Имя автора, организация, страна Сергей В. Иванов; Курский государственный медицинский университет; Российская Федерация
2. Создатель Имя автора, организация, страна Илья С.Иванов; Курский государственный медицинский университет; Российская Федерация
2. Создатель Имя автора, организация, страна Евгений Григорьевич Объедков; Курский государственный медицинский университет; Российская Федерация
2. Создатель Имя автора, организация, страна Лилия П. Попова; Курская областная клиническая больница; Российская Федерация
3. Субъект Дисциплина(ы)
3. Субъект Ключевое слово(я) вентральная грыжа; гемодиализат; цитологическое исследование; эндопротезирование; воспаление; травматические выделения
4. Описание Аннотация

Цель. Изучить влияние депротеинизированного диализата крови телят на молочном вскармливании на характер экссудативного отделяемого и динамику воспалительной реакции после герниопластики с пластикой передней брюшной стенки герниоэндопротезом из полипропилена.

Материалы и методы . Обследовано 59 больных, находящихся на стационарном лечении в хирургическом отделении Курской областной клинической больницы. Больные госпитализировались по поводу грыжи малого или среднего размера. Больные были разделены на две группы: основную (n=30) и контрольную (n=29). После эндопротезирования больным контрольной группы проводилось комплексное консервативное лечение. Больным основной группы, помимо стандартного лечения, вводили депротеинизированный диализат из крови молочных телят внутривенно капельно 10 мл + 200 мл 0.9% раствор натрия хлорида в течение 7 дней. Для цитологического исследования и определения вида цитограмм собирали и анализировали травматическое отделяемое по методу М.Ф. Камаев и М.А. Пальцев.

Результаты . Цитоморфометрическое исследование проводили на третьи, пятые и седьмые сутки после эндопротезирования с целью изучения динамики изменений. Определение клеточного состава, а также его изменений, характерных для каждого изучаемого периода, было необходимо для получения дополнительной информации, характеризующей воспалительный процесс в области установки эндопротеза.После эндопротезирования у больных, получавших гемодиализат, воспалительная реакция была менее выражена, чем у больных, не получавших препарат. Это было связано с более динамичной сменой стадий воспалительного процесса. У больных основной группы, получавших депротеинизированный диализат, регенеративный тип воспаления впервые появился на пятые сутки и составил 6,9%; к седьмым суткам доля больных с регенеративным типом увеличилась до 17,5%, в то время как у больных контрольной группы стадия регенерации не наблюдалась в оба периода.

Заключение . Анализ эффективности влияния гемодиализата на воспалительную реакцию при пластике передней брюшной стенки полипропиленовым эндопротезом свидетельствует об ускорении течения всех стадий воспаления и снижении его выраженности на 10%.

5. Издатель Организационное агентство, местонахождение Эко-Вектор
6. Участник Спонсор(ы)
7. Дата (ДД-ММ-ГГГГ) 19.10.2020
8. Тип Статус и жанр Рецензируемая статья
8. Тип Тип Исследовательская статья
9. Формат Формат файла PDF  (Рус),
10. Идентификатор Унифицированный идентификатор ресурса https://журналы.eco-vector.com/pavlovj/article/view/16280
10. Идентификатор Цифровой идентификатор объекта (DOI) 10.23888/PAVLOVJ2020283323-333
10. Идентификатор Цифровой идентификатор объекта (DOI) ( PDF  (Рус)) 10.23888/PAVLOVJ283323-333-30264
10. Идентификатор Цифровой идентификатор объекта (DOI) ( PDF  (англ)) 10.23888/PAVLOVJ283323-333-32253
11. Источник Титул; т., нет. (год) И.П. Павлов Российский медико-биологический вестник; Том 28, № 3 (2020)
12. Язык английский=en ru
13. Отношения Доп. Файлы Рис. 1. Варианты цитограмм выделений из области эндопротезирования у больных на третьи сутки после герниопластики в зависимости от применения гемодиализата (109КБ) doi: 10.23888/PAVLOVJ283323-333-26617
Рис. 2. Варианты цитограмм выделений из площадь эндопротезирования у больных к пятому дню герниопластики в зависимости от применения депротеинизированного диализата (112КБ) doi: 10.23888/PAVLOVJ283323-333-26618
Рис. 3. Цитологическая картина выделения экссудата из парапротезной области на третьи сутки после герниопластики, характерная для воспалительно-регенеративного типа. Окраска по Романовскому-Гимзе. Увеличение х600 (126КБ) doi: 10.23888/PAVLOVJ283323-333-26619
Рис. 4. Варианты цитограмм выделений из области эндопротеза у больных к седьмым суткам после герниопластики в зависимости от применения гемодиализата (106КБ) doi: 10.23888/ PAVLOVJ283323-333-26620
Рис.5. Количество (%) нейтрофилов (А) и фибробластов (В) в раневом экссудате больных после эндопротезирования передней брюшной стенки (121КБ) doi: 10.23888/PAVLOVJ283323-333-26621
14. Покрытие Геопространственное положение, хронологический период, выборка исследования (пол, возраст и т. д.)
15. Права Авторские права и разрешения Copyright (c) 2020 Эко-Вектор

Характеристика ошибок и предсказуемость заболевания с помощью гематологического анализатора Адвиа 120 лейкоцитарный дифференциальный

Реферат

2012 Весна.Включает библиографические ссылки. Автоматизированное инструментальное обеспечение позволило повысить скорость, точность и экономичность при представлении гематологических данных. Эти инструменты расширили доступную информацию за пределы простых числовых данных с помощью передовых методов, таких как проточная цитометрия и цитохимическое окрашивание, для получения специализированных параметров и диаграмм рассеяния в качестве новых систем доставки данных. Метод дифференцировки лейкоцитов на гематологическом анализаторе Advia 120 дает несколько новых параметров, в том числе двухканальные (перокс и базо) цитограммы и несколько индикаторов активности внутриклеточной миелопероксидазы.Эти параметры могут быть полезны с диагностической точки зрения при оценке идиосинкразических видов и механических проблем, возникающих во время рутинной работы, а также предоставлять дискриминационную информацию, связанную с различными болезненными процессами (воспаление, неоплазия и т. д.). Целью этого исследования было определение специфической цитограммы. паттерны неправильной классификации и ошибки, которые могут оказать наибольшее влияние на клиническую операцию или интерпретацию гематологических данных. Кроме того, анализаторный феномен псевдобазофилии был исследован на предмет его потенциального использования для повышения клинической осведомленности о циркулирующих атипичных клетках и их внутренних свойствах.Наконец, пероксидазные индексы MPXI, neut-x и neut-y были исследованы на предмет их диагностического потенциала при выявлении системного воспаления и миелоидных лейкозов. Результаты этого исследования детализировали несколько паттернов цитограмм, их причины и неправильную классификацию, распознавание и понимание которых способствует осознанию существования определенных гематологических результатов, которые иначе не были бы задокументированы в числовых данных, а также ограничений, присущих инструментам. Феномен анализатора псевдобазофилии был продемонстрирован в образцах собак и был тесно связан с присутствием атипичных клеток, обычно лейкемических, в циркулирующей крови.